Name: measurement of cytosolic ca2+ in isolated contractile lymphatics
Uploaded: 2011-12-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics at JoVE.com

<p class="jove_content"&gt; وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح P20RR018766 ومنحة من ABMRF / مؤسسة للبحوث الكحول.</p

1. الحيوانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقد وافق جميع الإجراءات المتبعة في رعاية الحيوان واللجنة المؤسسية استخدم في جامعة ولاية لويزيانا مركز العلوم الصحية ، وأجريت وفقا للمبادئ التوجيهية للمعهد الوطني للصحة (NIH المنشور رقم 85-12 ، المنقحة لعام 19...

<ol>
	<li>Chakraborty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphatic+system:+a+vital+link+between+metabolic+syndrome+and+inflammation.">Lymphatic system: a vital link between metabolic syndrome and inflammation.</a> Ann. N. Y. Acad. Sci. 1207, 94-94 (2010).</li><li>Zawieja, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphatic+biology+and+the+microcirculation:+past,+present+and+future.">Lymphatic biology and the microcirculation: past, present and future.</a> Microcirculation. 12, 141-141 (2005).</li><li>Benoit, J. N., Zawieja, D. C., Goodman, A. H., Granger, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+intact+mesenteric+lymphatic+pump+and+its+responsiveness+to+acute+edemagenic+stress.">Characterization of intact mesenteric lymphatic pump and its responsiveness to acute edemagenic stress.</a> Am. J. Physiol. 257, H2059-H2059 (1989).</li><li>Davis, M. J., Davis, A. M., Ku, C. W., Gashev, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myogenic+constriction+and+dilation+of+isolated+lymphatic+vessels.">Myogenic constriction and dilation of isolated lymphatic vessels.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 296, H293-H293 (2009).</li><li>Dougherty, P. J., Davis, M. J., Zawieja, D. C., Muthuchamy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+sensitivity+and+cooperativity+of+permeabilized+rat+mesenteric+lymphatics.">Calcium sensitivity and cooperativity of permeabilized rat mesenteric lymphatics.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 294, R1524-R1524 (2008).</li><li>Fay, F. S., Shlevin, H. H., Granger, W. C., Taylor, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aequorin+luminescence+during+activation+of+single+isolated+smooth+muscle+cells.">Aequorin luminescence during activation of single isolated smooth muscle cells.</a> Nature. 280, 506-506 (1979).</li><li>Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+myosin+light+chain+phosphorylation+decreases+rat+mesenteric+lymphatic+contractile+activity.">Inhibition of myosin light chain phosphorylation decreases rat mesenteric lymphatic contractile activity.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 297, 726-726 (2009).</li><li>Karaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+movements,+distribution,+and+functions+in+smooth+muscle.">Calcium movements, distribution, and functions in smooth muscle.</a> Pharmacol. Rev. 49, 157-157 (1997).</li><li>Ratz, P. H., Berg, K. M., Urban, N. H., Miner, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+smooth+muscle+calcium+sensitivity:+KCl+as+a+calcium-sensitizing+stimulus.">Regulation of smooth muscle calcium sensitivity: KCl as a calcium-sensitizing stimulus.</a> Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 288, C769-C769 (2005).</li><li>Somlyo, A. P., Somlyo, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2++sensitivity+of+smooth+muscle+and+nonmuscle+myosin+II:+modulated+by+G+proteins,+kinases,+and+myosin+phosphatase.">Ca2+ sensitivity of smooth muscle and nonmuscle myosin II: modulated by G proteins, kinases, and myosin phosphatase.</a> Physiol. Rev. 83, 1325-1325 (2003).</li><li>Souza-Smith, F. M., Kurtz, K. M., Molina, P. E., Breslin, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+mesenteric+collecting+lymphatic+pump+function+following+acute+alcohol+intoxication.">Adaptation of mesenteric collecting lymphatic pump function following acute alcohol intoxication.</a> Microcirculation. 17, 514-514 (2010).</li><li>Breslin, J. W., Yuan, S. Y., Wu, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-C+alters+barrier+function+of+cultured+lymphatic+endothelial+cells+through+a+VEGFR-3-dependent+mechanism.">VEGF-C alters barrier function of cultured lymphatic endothelial cells through a VEGFR-3-dependent mechanism.</a> Lymphat. Res. Biol. 5, 105-105 (2007).</li><li>Shirasawa, Y., Benoit, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stretch-induced+calcium+sensitization+of+rat+lymphatic+smooth+muscle.">Stretch-induced calcium sensitization of rat lymphatic smooth muscle.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 285, H2573-H2573 (2003).</li><li>Imtiaz, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pacemaking+through+Ca2++stores+interacting+as+coupled+oscillators+via+membrane+depolarization.">Pacemaking through Ca2+ stores interacting as coupled oscillators via membrane depolarization.</a> Biophys. J. 92, 3843-3843 (2007).</li><li>Muller, J. M., Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+coronary+endothelial+cell+Ca2++concentration+during+shear+stress-+and+agonist-induced+vasodilation.">Changes in coronary endothelial cell Ca2+ concentration during shear stress- and agonist-induced vasodilation.</a> Am. J. Physiol. 276, 1706-1706 (1999).</li><li>Ferrusi, I., Zhao, J., van Helden, D., von der Weid, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclopiazonic+acid+decreases+spontaneous+transient+depolarizations+in+guinea+pig+mesenteric+lymphatic+vessels+in+endothelium-dependent+and+-independent.">Cyclopiazonic acid decreases spontaneous transient depolarizations in guinea pig mesenteric lymphatic vessels in endothelium-dependent and -independent.</a> 286, H2287-H2287 (2004).</li></ol>

كان يعمل الرواية مزيج من الأساليب لدراسة جوهرية ضخ الأوعية اللمفاوية. القدرة على قياس التغيرات في وقت واحد [كا 2 +] وأنا وقطر في مفاوية ضخ تسمح للدراسات للمساهمات النسبية للكا 2 + والتي تعتمد على الكالسيوم 2 + للتوعية مسارات إشارات في الآلية الشام...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> 1. الجرس أسهم 5X </td></tr><tr><td مادة كيميائية </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> كمية </td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td> EMD </td><td> SX0420 - 3 </td><td> 35 ز </td></tr><tr><td> كلوريد البوتاسيوم </td><td> JT بيكر </td><td> 3040 </td><td> ز 1.75 </td></tr><tr><td> كلوريد الكالسيوم </td><td> سيغما </td><td> C - 3881 </td><td> ز 1.47 </td></tr><tr><td> كبريتات المغنيسيوم </td><td> سيغما </td><td> M - 9397 </td><td> ز 1.44 </td></tr><tr><td> معقمة الماء المصفى </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> جلب إلى 1 L </td></tr><tr><td> تصفية في زجاجات معقمة تعقيمها ومخازن في 4 درجات مئوية </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2. اجتماعات الأطراف العازلة </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> مادة كيميائية </td><td> شركة </TD&gt; <td> كتالوج رقم </td><td> كمية </td></tr><tr><td> اجتماعات الأطراف </td><td> سيغما </td><td> M3183 </td><td> ز 125.6 </td></tr><tr><td> معقمة الماء المصفى </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> جلب إلى 1 L </td></tr><tr><td> تصفية في زجاجات معقمة تعقيمها ومخازن في 4 درجات مئوية </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3. ألبومين محلول الملح الفسيولوجي (هذه الخدمات) </td></tr><tr><td> مادة كيميائية </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> كمية </td></tr><tr><td> قذف الأسهم (5X) </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 200 مل </td></tr><tr><td> المماسح العازلة </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 5 مل </td></tr><tr><td> فوسفات الصوديوم </td><td> سيغما </td><td> S - 9638 </td><td> 0،168 ز </td></tr><tr><td> الصوديوم البيروفات </td><td> سيغما </td><td> P5280 </td><td> ز 0.22 </td></tr><tr><td> الصوديوم EDTA ش.ر </td><td> سيغما </td><td> ED2SS </td><td> ز 0.0074 </td></tr><tr><td> جلوكوز </td><td> سيغما </td><td> G7528 </td><td> 0،901 ز </td></tr><tr><td> الزلال ، البقري </td><td> USB </td><td> 10856 </td><td> 10 ز </td></tr><tr><td> معقمة الماء المصفى </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> جلب إلى 1 L </td></tr><tr><td> ضبط درجة الحموضة إلى 7.4 في 37 درجة مئوية ، ثم التصفية في زجاجات معقمة تعقيمها وتخزينها في 4 درجات مئوية. </td></tr></tbody></table> الجدول 1. الكواشف المحددة المستخدمة. تخزين كافة في 4 درجات مئوية.

measurement of cytosolic ca2+ in isolated contractile lymphatics

الأوعية اللمفاوية تشمل نظام نقل متعدد الوظائف التي تحافظ على توازن السوائل والدهون يسلم إلى الدورة الدموية المركزية ، ويعمل بمثابة نظام للمراقبة لمستضدات يمكن أن تكون ضارة ، وتحسين مناعة الغشاء المخاطي والاستجابات المناعية التكيفية 1. يتكون من السائل الخلالي الليمفاوية الذي يدخل الأعمى العضوية مفاوية الأولية ، ومن ثم يتم نقلها ضد التدرج في جو من الضغط وجمع الأوعية اللمفاوية. يتم جمع كل اللمفاوي يتكون من سلسلة من شرائح تسمى lymphangions ، مفصولة ضاحكة الصمامات التي تمنع ارتجاعي. كل lymphangion تمتلك دورة مقلص الليمفاوية الذي يدفع مقابل الضغط التدرج نحو تعميم المركزية 2. هذا النمط طوري مقلص مشابه لدورة القلب ، والانقباضي والانبساطي مراحل ، ومع 4 الانكماش أدنى تردد بالإضافة إلى ذلك ، على نحو سلس العضلات اللمفاوية يولد نغمة ويعرض انقباض عضلي وتمدد طن ردا على الزيادة والنقصان في ضغط اللمعية ، على التوالي 5. ويقترح بالتالي مزيج من الآليات الجزيئية التي تدعم كلا من انقباض طورية ومنشط لمفاوية. وينظم عموما تقلص العضلات الملساء التي كا 2 + تركيز عصاري خلوي ([كا 2 +] I) ، بالإضافة إلى الحساسية للكا 2 + ، من العناصر مقلص في استجابة للتغيرات في البيئة المحيطة الخلية 6. [كا 2 +] ط يتحدد من قبل مجموعة من حركة كا 2 + يجند من خلال غشاء البلازما أو الجهد بوابات الكالسيوم 2 + قنوات والإفراج وامتصاص الكالسيوم 2 + من مخازن الداخلية. عصاري خلوي كا 2 + بربط كالمودولين وينشط الإنزيمات مثل ضوء سلسلة الميوسين (حركة تحرير الكونغو) كيناز (MLCK) ، والذي بدوره يؤدي إلى حركة تحرير الكونغو phosphorylates الأكتين ، الميوسين بوساطة انكماش 8. ومع ذلك ، فإن حساسية هذا الممر الى كاليفورنيا <supيمكن تنظيم&gt; 2 + من قبل حركة تحرير الكونغو الفوسفاتيز (MLCP) 9. وينظم MLCP النشاط كيناز رو (روك) ومثبط الفوسفاتيز الميوسين بروتين CPI - 17. هنا ، نقدم طريقة لتقييم التغيرات في [كا 2 +] أنا مع مرور الوقت في الأوعية اللمفاوية ، معزولة perfused من أجل دراسة كا 2 + والتي تعتمد على الكالسيوم 2 + للتوعية آليات اللمفاوية تقلص العضلات الملساء. استخدام الفئران المعزولة مفاوية المساريقي جمع درسنا تمتد بفعل التغيرات في [كا 2 +] ط مقلص والنشاط. نموذج اللمفاوية معزولة يوفر ميزة أنه يمكن الضغط والتدفق ، والتركيب الكيميائي للحمام حل لرقابة مشددة. [كا 2 +] كنت مصممة عن طريق تحميل مفاوية مع ratiometric ، كا 2 + ملزم صبغ Fura - 2. وستوفر هذه الدراسات نهجا جديدا لمشكلة أوسع نطاقا لدراسة مختلف الآليات الجزيئية التي تنظم طوريمقابل انكماش انقباض العضلات في منشط اللمفاوي على نحو سلس.

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics at JoVE.com

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

نقدم هذا النهج لتقييم كا عصاري خلوي<sup&gt; 2 +</sup&gt; التركيز في مفاوية معزولة لدراسة كاليفورنيا<sup&gt; 2 +</sup&gt; والتي تعتمد على الكالسيوم<sup&gt; 2 +</sup&gt; آليات للتوعية من تقلص العضلات الملساء اللمفاوي.

قياس الكالسيوم عصاري خلوي 2 + في مفاوية مقلص متفرقة

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Measurement of &#947;HV68 Infection in Mice

Measurement of ÃƒÅ½Ã‚Â³HV68 Infection in Mice

قياس γHV68 العدوى في الفئران

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human ...

Measurement of Antibody Effects on Cellular Function of Isolated Cardiomyocytes

قياس تأثيرات على الأجسام المضادة من وظيفة الخلوية Cardiomyocytes متفرقة

Dilated cardiomyopathy  (DCM) is one of the main causes for heart failure in younger adults1.  Although genetic disposition and exposition to toxic ...

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

قياس كمية الاستجابة المناعية والنوم في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

A complex interaction between the immune response and  host behavior has been described in a wide range of species. Excess sleep, in  particular, is known ...

Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

قياس آلام جلدية اللمس في نموذج الفئران التهاب البروستاتا الجرثومي

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently ...

Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs

Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs

فيفو السابقين خلية الدم الحمراء الفحص انحلال الدم لتقييم درجة الحموضة التي تستجيب لتسليم وكلاء Endosomolytic عصاري خلوي من أدوية Biomacromolecular

Phospholipid bilayers that constitute endo-lysosomal vesicles can pose a barrier to delivery of biologic drugs to intracellular targets. To overcome this ...

Assessing Anti-fungal Activity of Isolated Alveolar Macrophages by Confocal Microscopy

تقييم نشاط مضاد للفطريات المعزولة من السنخية الضامة التي كتبها متحد البؤر المجهري

The lung is an interface where host cells are routinely exposed to microbes and microbial products. Alveolar macrophages are the first-line phagocytic ...

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

الكمي عصاري خلوي مقابل رغوي<em&gt; السالمونيلا</em&gt; في الضامة الابتدائية التي كتبها التفاضلية Permeabilization

Intracellular bacterial pathogens can replicate in the cytosol or in specialized pathogen-containing vacuoles (PCVs). To reach the cytosol, bacteria like ...

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

قياس ل<em&gt; في المختبر</em&gt; التكامل آخر من HIV-1 Preintegration مجمعات

HIV-1 envelope proteins engage cognate receptors on the target cell surface, which leads to viral-cell membrane fusion followed by the release of the ...

Size Matters: Measurement of Capsule Diameter in Cryptococcus neoformans

Size Matters: Measurement of Capsule Diameter in Cryptococcus neoformans

المسائل الحجم: قياس "القطر كبسولة" في المرسلة بين

The polysaccharide capsule of Cryptococcus neoformans is the primary virulence factor and one of the most commonly studied aspects of this pathogenic ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

طريقة لقياس وظيفة الغدة اللعابية في الفئران

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...