Name: measurement of cytosolic ca2+ in isolated contractile lymphatics
Uploaded: 2011-12-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics at JoVE.com

<p class="jove_content"&gt; עבודה זו נתמכה על ידי NIH מענק P20RR018766 ומענק מן ABMRF / קרן למחקר אלכוהול.</p

1. בעלי חיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל הנהלים אושרו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת השתמש ב מדינת לואיזיאנה האוניברסיטה למדעי הבריאות מרכז בוצעו בהתאם להנחיות של המכון הלאומי לבריאות (NIH פרסום מס &#39;85-12, מתוקנת 1996). זכר Sprague-Dawley חולדות (Charl...

<ol>
	<li>Chakraborty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphatic+system:+a+vital+link+between+metabolic+syndrome+and+inflammation.">Lymphatic system: a vital link between metabolic syndrome and inflammation.</a> Ann. N. Y. Acad. Sci. 1207, 94-94 (2010).</li><li>Zawieja, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphatic+biology+and+the+microcirculation:+past,+present+and+future.">Lymphatic biology and the microcirculation: past, present and future.</a> Microcirculation. 12, 141-141 (2005).</li><li>Benoit, J. N., Zawieja, D. C., Goodman, A. H., Granger, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+intact+mesenteric+lymphatic+pump+and+its+responsiveness+to+acute+edemagenic+stress.">Characterization of intact mesenteric lymphatic pump and its responsiveness to acute edemagenic stress.</a> Am. J. Physiol. 257, H2059-H2059 (1989).</li><li>Davis, M. J., Davis, A. M., Ku, C. W., Gashev, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myogenic+constriction+and+dilation+of+isolated+lymphatic+vessels.">Myogenic constriction and dilation of isolated lymphatic vessels.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 296, H293-H293 (2009).</li><li>Dougherty, P. J., Davis, M. J., Zawieja, D. C., Muthuchamy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+sensitivity+and+cooperativity+of+permeabilized+rat+mesenteric+lymphatics.">Calcium sensitivity and cooperativity of permeabilized rat mesenteric lymphatics.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 294, R1524-R1524 (2008).</li><li>Fay, F. S., Shlevin, H. H., Granger, W. C., Taylor, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aequorin+luminescence+during+activation+of+single+isolated+smooth+muscle+cells.">Aequorin luminescence during activation of single isolated smooth muscle cells.</a> Nature. 280, 506-506 (1979).</li><li>Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+myosin+light+chain+phosphorylation+decreases+rat+mesenteric+lymphatic+contractile+activity.">Inhibition of myosin light chain phosphorylation decreases rat mesenteric lymphatic contractile activity.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 297, 726-726 (2009).</li><li>Karaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+movements,+distribution,+and+functions+in+smooth+muscle.">Calcium movements, distribution, and functions in smooth muscle.</a> Pharmacol. Rev. 49, 157-157 (1997).</li><li>Ratz, P. H., Berg, K. M., Urban, N. H., Miner, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+smooth+muscle+calcium+sensitivity:+KCl+as+a+calcium-sensitizing+stimulus.">Regulation of smooth muscle calcium sensitivity: KCl as a calcium-sensitizing stimulus.</a> Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 288, C769-C769 (2005).</li><li>Somlyo, A. P., Somlyo, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2++sensitivity+of+smooth+muscle+and+nonmuscle+myosin+II:+modulated+by+G+proteins,+kinases,+and+myosin+phosphatase.">Ca2+ sensitivity of smooth muscle and nonmuscle myosin II: modulated by G proteins, kinases, and myosin phosphatase.</a> Physiol. Rev. 83, 1325-1325 (2003).</li><li>Souza-Smith, F. M., Kurtz, K. M., Molina, P. E., Breslin, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+mesenteric+collecting+lymphatic+pump+function+following+acute+alcohol+intoxication.">Adaptation of mesenteric collecting lymphatic pump function following acute alcohol intoxication.</a> Microcirculation. 17, 514-514 (2010).</li><li>Breslin, J. W., Yuan, S. Y., Wu, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-C+alters+barrier+function+of+cultured+lymphatic+endothelial+cells+through+a+VEGFR-3-dependent+mechanism.">VEGF-C alters barrier function of cultured lymphatic endothelial cells through a VEGFR-3-dependent mechanism.</a> Lymphat. Res. Biol. 5, 105-105 (2007).</li><li>Shirasawa, Y., Benoit, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stretch-induced+calcium+sensitization+of+rat+lymphatic+smooth+muscle.">Stretch-induced calcium sensitization of rat lymphatic smooth muscle.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 285, H2573-H2573 (2003).</li><li>Imtiaz, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pacemaking+through+Ca2++stores+interacting+as+coupled+oscillators+via+membrane+depolarization.">Pacemaking through Ca2+ stores interacting as coupled oscillators via membrane depolarization.</a> Biophys. J. 92, 3843-3843 (2007).</li><li>Muller, J. M., Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+coronary+endothelial+cell+Ca2++concentration+during+shear+stress-+and+agonist-induced+vasodilation.">Changes in coronary endothelial cell Ca2+ concentration during shear stress- and agonist-induced vasodilation.</a> Am. J. Physiol. 276, 1706-1706 (1999).</li><li>Ferrusi, I., Zhao, J., van Helden, D., von der Weid, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclopiazonic+acid+decreases+spontaneous+transient+depolarizations+in+guinea+pig+mesenteric+lymphatic+vessels+in+endothelium-dependent+and+-independent.">Cyclopiazonic acid decreases spontaneous transient depolarizations in guinea pig mesenteric lymphatic vessels in endothelium-dependent and -independent.</a> 286, H2287-H2287 (2004).</li></ol>

שילוב הרומן של שיטות הועסק ללמוד מהותי שאיבה של כלי הלימפה. היכולת למדוד בו זמנית שינויים [Ca 2 +] i ו בקוטר lymphatics שאיבה יאפשר מחקרים על התרומה היחסית של Ca 2 + תלויות Ca 2 + ו-רגישות מסלולי איתות במנגנון הכולל המסדירים את מחזור הלימפה התכווצות. <p class="...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> 1. רינגר 5x במלאי </td></tr><tr><td כימי </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוג </td><td> כמות </td></tr><tr><td> נתרן כלוריד </td><td> EMD </td><td> SX0420-3 </td><td> 35 גרם </td></tr><tr><td> אשלגן כלוריד </td><td> JT בייקר </td><td> 3040 </td><td> 1.75 גר &#39; </td></tr><tr><td> סידן כלוריד </td><td> סיגמא </td><td> C-3881 </td><td> 1.47 גר &#39; </td></tr><tr><td> מגנזיום סולפט </td><td> סיגמא </td><td> M-9397 </td><td> 1.44 גר &#39; </td></tr><tr><td> מים מסוננים ועיקור </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> מביאים L 1 </td></tr><tr><td> סינון סטרילי לתוך בקבוקים חנויות autoclaved ב 4 ° C </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2. מגבים חיץ </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> כימי </td><td> חברה </td&gt; <td> מספר קטלוג </td><td> כמות </td></tr><tr><td> מגבים </td><td> סיגמא </td><td> M3183 </td><td> 125.6 גרם </td></tr><tr><td> מים מסוננים ועיקור </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> מביאים L 1 </td></tr><tr><td> סינון סטרילי לתוך בקבוקים חנויות autoclaved ב 4 ° C </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3. הפתרון אלבומין מלח פיזיולוגיים (APSS) </td></tr><tr><td> כימי </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוג </td><td> כמות </td></tr><tr><td> רינגר מניות (5x) </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 200 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> מגבים הצפת </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 5 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> סודיום פוספט </td><td> סיגמא </td><td> S-9638 </td><td> 0.168 גרם </td></tr><tr><td> נתרן Pyruvate </td><td> סיגמא </td><td> P5280 </td><td> 0.22 גר &#39; </td></tr><tr><td> נתרן EDTA סאללא </td><td> סיגמא </td><td> ED2SS </td><td> 0.0074 גרם </td></tr><tr><td> גלוקוז </td><td> סיגמא </td><td> G7528 </td><td> 0.901 גרם </td></tr><tr><td> אלבומין, שור </td><td> USB </td><td> 10856 </td><td> 10 גרם </td></tr><tr><td> מים מסוננים ועיקור </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> מביאים L 1 </td></tr><tr><td> התאם את ה-pH 7.4 בשעה 37 ° C, ואז לסנן לתוך בקבוקים סטריליים autoclaved ולאחסן ב 4 ° C. </td></tr></tbody></table> טבלה 1. ריאגנטים ספציפיים משומשים. חנות הכל ב 4 ° C.

measurement of cytosolic ca2+ in isolated contractile lymphatics

כלי הלימפה מהווים מערכת תחבורה רב תכליתיים המקיימת הומאוסטזיס נוזל, שומנים מספקת כדי זרימת המרכזית, ופועל כמערכת מעקב עבור אנטיגנים מזיקים, אופטימיזציה חסינות הרירית ונרכשת 1. לימפה נוצר מן נוזל interstitial שנכנס עיוורת הסתיימה lymphatics הראשוני, ולאחר מכן מועבר כנגד מפל הלחץ lymphatics איסוף גדול יותר. לימפטי כל איסוף מורכב מסדרה של קטעים בשם lymphangions, מופרדים על ידי שסתומים המונעים backflow הטוחנת. Lymphangion כל בעל מחזור התכווצות המניע הלימפה נגד הפרש לחצים לקראת מחזור המרכזי 2. דפוס זה התכווצות phasic משול מחזור הלב, עם סיסטולי ודיאסטולי שלבים, ועם 4 בתדר נמוך התכווצות. בנוסף, שריר חלק הלימפה יוצרת צליל ומציג התכווצות התרחבות myogenic ואניn בתגובה עליות וירידות בלחץ luminal, בהתאמה 5. היברידית של המנגנונים המולקולריים התומכות הן contractility phasic טוניק של lymphatics מוצעים כך. התכווצות של שריר חלק מוסדר בדרך כלל על ידי cytosolic Ca 2 + ריכוז ([Ca 2 +] i) בתוספת רגישות Ca 2 +, האלמנטים כויץ בתגובה לשינויים בסביבה המקיפה את תא 6. [Ca 2 +] i נקבעת על ידי שילוב של תנועת Ca 2 + דרך הממברנה הפלסמטית ליגנד או מתח מגודרת Ca 2 + ערוצים שחרור ספיגת של Ca 2 + מחנויות פנימי. Cytosolic Ca 2 + נקשר calmodulin ומפעיל אנזימים כגון שרשרת אור שרירן (MLC) קינאז (MLCK), אשר בתורו phosphorylates MLC המוביל להתכווצות אקטין שרירן בתיווך 8. עם זאת, הרגישות של מסלול זה Ca <sup&gt; 2 + יכול להיות מוסדר על ידי phosphatase MLC (MLCP) 9. פעילות MLCP מוסדר על ידי Rho קינאז (רוק) לבין מעכב phosphatase שרירן חלבון למדד 17. כאן, אנו מציגים שיטה להערכת שינויים [Ca 2 +] i לאורך זמן, lymphatics מבודד perfused כדי ללמוד Ca 2 + תלויות Ca 2 + ו-רגישות מנגנוני התכווצות שריר חלק הלימפה. שימוש מבודד mesenteric עכברוש lymphatics איסוף למדנו למתוח-Induced שינויים [Ca 2 +] i ו התכווצות בפעילות. המודל הלימפה מבודד מציע את היתרון הזה, הלחץ הזרימה, את ההרכב הכימי של הפתרון אמבטיה ניתן לשלוט בחוזקה. [Ca 2 +] i נקבע על ידי טעינת lymphatics עם ratiometric, Ca 2 + מחייב לצבוע Fura-2. מחקרים אלה יספקו גישה חדשה לבעיה רחבה יותר של חקר המנגנונים המולקולריים שונים המווסתים phasicהתכווצויות לעומת התכווצות בשריר טוניק הלימפה חלקה.

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics at JoVE.com

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

אנחנו מציגים גישה להעריך את Ca cytosolic<sup&gt; 2 +</sup&gt; ריכוז lymphatics מבודדים ללמוד Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; תלויי Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt;-רגישות מנגנוני התכווצות שריר חלק הלימפה.

מדידה של Cytosolic Ca 2 + ב lymphatics כויץ מבודד

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Measurement of &#947;HV68 Infection in Mice

Measurement of ÃƒÅ½Ã‚Â³HV68 Infection in Mice

מדידה של זיהום γHV68 ב עכברים

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human ...

Measurement of Antibody Effects on Cellular Function of Isolated Cardiomyocytes

מדידה של אפקטי נוגדנים על תפקוד תאי של cardiomyocytes המבודד

Dilated cardiomyopathy  (DCM) is one of the main causes for heart failure in younger adults1.  Although genetic disposition and exposition to toxic ...

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

מדידת כמותית של התגובה החיסונית ובשינה<em&gt; דרוזופילה</em

A complex interaction between the immune response and  host behavior has been described in a wide range of species. Excess sleep, in  particular, is known ...

Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

מדידה של Allodynia משושים בדגם Murine של ערמונית קטריאלי

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently ...

Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs

Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs

Assay גופיים תא דם אדום המוליזה להערכת סוכני Endosomolytic pH המגיבים למשלוח cytosolic של סמי Biomacromolecular

Phospholipid bilayers that constitute endo-lysosomal vesicles can pose a barrier to delivery of biologic drugs to intracellular targets. To overcome this ...

Assessing Anti-fungal Activity of Isolated Alveolar Macrophages by Confocal Microscopy

הערכת פעילות אנטי פטרייתי של מבודדים מכתשיים המקרופאגים ידי מיקרוסקופיה confocal

The lung is an interface where host cells are routinely exposed to microbes and microbial products. Alveolar macrophages are the first-line phagocytic ...

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

כימות של Cytosolic לעומת vacuolar<em&gt; סלמונלה</em&gt; ביסודי המקרופאגים על ידי דיפרנציאל permeabilization

Intracellular bacterial pathogens can replicate in the cytosol or in specialized pathogen-containing vacuoles (PCVs). To reach the cytosol, bacteria like ...

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

מדידה<em&gt; במבחנה</em&gt; פעילות האינטגרציה של HIV-1 Preintegration מכלולים

HIV-1 envelope proteins engage cognate receptors on the target cell surface, which leads to viral-cell membrane fusion followed by the release of the ...

Size Matters: Measurement of Capsule Diameter in Cryptococcus neoformans

Size Matters: Measurement of Capsule Diameter in Cryptococcus neoformans

גודל ענייני: מדידה של הקפסולה בקוטר של neoformans קריפטוקוקוס

The polysaccharide capsule of Cryptococcus neoformans is the primary virulence factor and one of the most commonly studied aspects of this pathogenic ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

שיטת המדידה של תפקוד בלוטת הרוק בעכברים

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...