Name: measurement of cytosolic ca2+ in isolated contractile lymphatics
Uploaded: 2011-12-08T13:00:00
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<p class="jove_content"&gt;이 작품은 NIH 부여 P20RR018766 및 알코올 연구 ABMRF / 재단의 교부금에 의해 지원되었다.</p

1. 동물 <ol><li> 모든 절차는 루이지애나 주립 대학 보건 과학 센터에서 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 승인되었으며 건강의 국립 연구소 (NIH 간행물 번호 85-12, 1996 개정)의 지침에 따라 수행되었다. 남자 스프 - Dawley 쥐 (찰스 리버 연구소, 2백70-3백50g 몸 wt)는 제어 온도 (22 ° C) 및 제어 조명 (12시 12분 H 조명 어두운 사이클) 환경에 보관되어 있었다. 도착 후, 쥐가는 한 주간의 acclimation 기간?...

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	<li>Chakraborty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphatic+system:+a+vital+link+between+metabolic+syndrome+and+inflammation.">Lymphatic system: a vital link between metabolic syndrome and inflammation.</a> Ann. N. Y. Acad. Sci. 1207, 94-94 (2010).</li><li>Zawieja, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphatic+biology+and+the+microcirculation:+past,+present+and+future.">Lymphatic biology and the microcirculation: past, present and future.</a> Microcirculation. 12, 141-141 (2005).</li><li>Benoit, J. N., Zawieja, D. C., Goodman, A. H., Granger, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+intact+mesenteric+lymphatic+pump+and+its+responsiveness+to+acute+edemagenic+stress.">Characterization of intact mesenteric lymphatic pump and its responsiveness to acute edemagenic stress.</a> Am. J. Physiol. 257, H2059-H2059 (1989).</li><li>Davis, M. J., Davis, A. M., Ku, C. W., Gashev, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myogenic+constriction+and+dilation+of+isolated+lymphatic+vessels.">Myogenic constriction and dilation of isolated lymphatic vessels.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 296, H293-H293 (2009).</li><li>Dougherty, P. J., Davis, M. J., Zawieja, D. C., Muthuchamy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+sensitivity+and+cooperativity+of+permeabilized+rat+mesenteric+lymphatics.">Calcium sensitivity and cooperativity of permeabilized rat mesenteric lymphatics.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 294, R1524-R1524 (2008).</li><li>Fay, F. S., Shlevin, H. H., Granger, W. C., Taylor, S. 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Physiol. 297, 726-726 (2009).</li><li>Karaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+movements,+distribution,+and+functions+in+smooth+muscle.">Calcium movements, distribution, and functions in smooth muscle.</a> Pharmacol. Rev. 49, 157-157 (1997).</li><li>Ratz, P. H., Berg, K. M., Urban, N. H., Miner, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+smooth+muscle+calcium+sensitivity:+KCl+as+a+calcium-sensitizing+stimulus.">Regulation of smooth muscle calcium sensitivity: KCl as a calcium-sensitizing stimulus.</a> Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 288, C769-C769 (2005).</li><li>Somlyo, A. P., Somlyo, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2++sensitivity+of+smooth+muscle+and+nonmuscle+myosin+II:+modulated+by+G+proteins,+kinases,+and+myosin+phosphatase.">Ca2+ sensitivity of smooth muscle and nonmuscle myosin II: modulated by G proteins, kinases, and myosin phosphatase.</a> Physiol. Rev. 83, 1325-1325 (2003).</li><li>Souza-Smith, F. M., Kurtz, K. M., Molina, P. E., Breslin, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+mesenteric+collecting+lymphatic+pump+function+following+acute+alcohol+intoxication.">Adaptation of mesenteric collecting lymphatic pump function following acute alcohol intoxication.</a> Microcirculation. 17, 514-514 (2010).</li><li>Breslin, J. W., Yuan, S. Y., Wu, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-C+alters+barrier+function+of+cultured+lymphatic+endothelial+cells+through+a+VEGFR-3-dependent+mechanism.">VEGF-C alters barrier function of cultured lymphatic endothelial cells through a VEGFR-3-dependent mechanism.</a> Lymphat. Res. Biol. 5, 105-105 (2007).</li><li>Shirasawa, Y., Benoit, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stretch-induced+calcium+sensitization+of+rat+lymphatic+smooth+muscle.">Stretch-induced calcium sensitization of rat lymphatic smooth muscle.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 285, H2573-H2573 (2003).</li><li>Imtiaz, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pacemaking+through+Ca2++stores+interacting+as+coupled+oscillators+via+membrane+depolarization.">Pacemaking through Ca2+ stores interacting as coupled oscillators via membrane depolarization.</a> Biophys. J. 92, 3843-3843 (2007).</li><li>Muller, J. M., Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+coronary+endothelial+cell+Ca2++concentration+during+shear+stress-+and+agonist-induced+vasodilation.">Changes in coronary endothelial cell Ca2+ concentration during shear stress- and agonist-induced vasodilation.</a> Am. J. Physiol. 276, 1706-1706 (1999).</li><li>Ferrusi, I., Zhao, J., van Helden, D., von der Weid, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclopiazonic+acid+decreases+spontaneous+transient+depolarizations+in+guinea+pig+mesenteric+lymphatic+vessels+in+endothelium-dependent+and+-independent.">Cyclopiazonic acid decreases spontaneous transient depolarizations in guinea pig mesenteric lymphatic vessels in endothelium-dependent and -independent.</a> 286, H2287-H2287 (2004).</li></ol>

방법의 소설 조합은 림프 혈관의 펌핑 본질을 연구하기 위해 고용되었다. 동시에 변화 측정 기능 [칼슘 2 +] i와 펌핑 lymphatics의 직경은 칼슘 2의 상대적인 기여도 + 종속 및 CA 2 림프 수축성주기를 지배하는 전체 메커니즘에 + - sensitizing 신호 경로. 연구를 허용합니다 림프 수축성주기 톤 이상 겹쳐 phasic 수축으로 구성되어 있습...

<table border="1"><tbody><tr><td> 1. 닮은 5 배 증권 </td></tr><tr><td 화학 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 양 </td></tr><tr><td> 나트륨 염화물 </td><td> EMD </td><td> SX0420 - 3 </td><td> 35g </td></tr><tr><td> 염화칼륨 </td><td> JT 베이커 </td><td> 3040 </td><td> 1.75 g </td></tr><tr><td> 염화칼슘 </td><td> 시그마 </td><td> C - 3881 </td><td> 1.47 g </td></tr><tr><td> 마그네슘 황산 </td><td> 시그마 </td><td> M - 9397 </td><td> 1.44 g </td></tr><tr><td> 무균 필터링 물 </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 1 L에 지참 </td></tr><tr><td> 4 autoclaved 병 및 상점으로 살균 필터 ° C </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2. 맙스 버퍼 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 화학 </td><td> 회사 </TD&gt; <td> 카탈로그 번호 </td><td> 양 </td></tr><tr><td> 맙스 </td><td> 시그마 </td><td> M3183 </td><td> 125.6 g </td></tr><tr><td> 무균 필터링 물 </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 1 L에 지참 </td></tr><tr><td> 4 autoclaved 병 및 상점으로 살균 필터 ° C </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3. 알부민 생리 식염수 (APSS) </td></tr><tr><td> 화학 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 양 </td></tr><tr><td> 닮은 주식 (5 배) </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 200 ML </td></tr><tr><td> 맙스 버퍼 </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 5 ML </td></tr><tr><td> 인산 나트륨 </td><td> 시그마 </td><td> S - 9638 </td><td> 0.168 g </td></tr><tr><td> 나트륨 Pyruvate </td><td> 시그마 </td><td> P5280 </td><td> 0.22 g </td></tr><tr><td> EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 나트륨 샐티 </td><td> 시그마 </td><td> ED2SS </td><td> 0.0074 g </td></tr><tr><td> 포도당 </td><td> 시그마 </td><td> G7528 </td><td> 0.901 g </td></tr><tr><td> 알부민, 소의 </td><td> USB </td><td> 10,856 </td><td> 10g </td></tr><tr><td> 무균 필터링 물 </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 1 L에 지참 </td></tr><tr><td> 37 7.4로 산도를 조절 ° C, 4 autoclaved 병 및 저장에 다음 살균 필터 ° C. </td></tr></tbody></table> 표 1. 특정 시약이 사용됩니다. 4 시에 보관 ° C.

measurement of cytosolic ca2+ in isolated contractile lymphatics

림프 혈관은 액체 항상성 유지 중앙 순환에 lipids를 제공하고, 잠재적으로 해로운 항원에 대한 감시 시스템 역할, 점막 면역과 적응 면역 반응 1 최적화 다기능 교통 시스템을 구성. 림프는 맹인 종단 초기 lymphatics를 입력하고, 다음 큰 수집 lymphatics에서 압력 구배에 대한 수송이다 중간 유체로부터 형성됩니다. 각 수집 림프는 역류를 방지 뾰족한 끝이 둘있는 밸브로 구분 lymphangions라는 세그먼트의 일련의 구성됩니다. 각 lymphangion는 중앙 혈액 순환이 방향 압력 구배에 대한 림프을 향한 추진력을 얻습니다 수축성 사이클을 가지고 있습니다. 이 phasic 수축성 패턴은 수축기 및 diastolic 단계와 심장주기에 유사하고, 낮은 수축 주파수 4. 또한, 림프 평활근은 음색을 생성하고 myogenic 수축과 팽창을 표시 I각각 luminal 압력 증가와 감소, 5 N 응답. lymphatics의 phasic와 토닉 수축성을 모두 지원하는 분자 메커니즘의 하이브리드 따라서 제안하고 있습니다. 평활근의 수축은 일반적으로 cytosolic 칼슘 2 + 농도 규제 ([칼슘 2 +] I) 칼슘 2 플러스 감성 +, 세포 6 주변 환경의 변화에 대한 응답으로 수축성 요소. [칼슘 2 +] 제가 + 플라즈마 막 리간드 또는 전압 문이 칼슘 2 + 채널과 + 내부 상점에서 칼슘 2의 릴리스와 이해를 통해 칼슘 2의 운동의 조합에 의해 결정됩니다. Cytosolic 칼슘 2 + calmodulin에 바인딩 및 마이 오신 조명 체인으로 효소를 활성화 (MLC) 차례로 MLC는 굴지 - 마이 오신 - 중재 수축 8 선도 phosphorylates 키나제 (MLCK). 그러나, 칼슘이 경로의 감도 <sup&gt; 2 +는 MLC 인산 가수 분해 효소 (MLCP) 9 조정할 수 있습니다. MLCP 활동 Rho 키나제 (바위)과 마이 오신의 인산 가수 분해 효소 억제제 단백질 CPI - 17에 의해 규제됩니다. 여기, 우리는 칼슘 2 + - 의존과 칼슘이 림프 평활근의 수축의 + - sensitizing 메커니즘을 연구하기 위해 절연, perfused lymphatics에서 시간이 지남에 따라 [+ 칼슘 2] 나는 변화를 평가하는 방법을 제시한다. 절연 쥐 mesenteric 수집 lymphatics를 사용하여 우리는 [+ 칼슘 2] I 및 수축성 활동에 스트레칭 유발 변화를 공부했습니다. 격리된 림프 모델은 압력, 유량 및 욕조 솔루션의 화학 성분이 밀접하게 제어할 수있는 장점을 제공합니다. [칼슘 2 +] 제가 ratiometric, CA 2 + 바인딩 염색 Fura - 2 lymphatics 로딩에 의해 결정되었다. 이러한 연구는 phasic 조절 다른 분자 메커니즘을 연구의 광범위한 문제에 대한 새로운 접근 방법을 제공합니다림프 평활근의 수축 토닉 대 수축.

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Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

우리는 cytosolic CA를 평가하는 접근 방법을 소개합니다<sup&gt; 2 +</supCA를 공부 격리 lymphatics에&gt; 집중<sup&gt; 2 +</sup&gt; 종속 및 CA<sup&gt; 2 +</sup림프 평활근의 수축&gt; - sensitizing 메커니즘.

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