Name: murine superficial lymph node surgery
Uploaded: 2012-05-21T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Superficial Lymph Node Surgery at JoVE.com

نشكر سيلفي ليسيج وجميع أفراد مختبر لقراءة نقدية للبروتوكول. وأيد هذا العمل من خلال منحة (MOP-77545) من المعاهد الكندية لأبحاث الصحة (CIHR). ويدعم ناتالي Labrecque بواسطة منحة دراسية كبار FRSQ وميليسا ماتيو تلقى الكسندر غراهام بيل NSERC منحة دراسات عليا كندا.

<html> 1. إعداد قبل الجراحة عولجت فئران وفقا لمبادئ توجيهية المجلس الكندي للرعاية الحيوان. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Anesthetise الفئران عن طريق الحقن من الكيتامين / زيلازين (150/300 ملغ / كلغ، والملكية الفكرية) أو عن طر...

<ol>
	<li>Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+but+curtailed+T-cell+response+to+very+low-affinity+antigen.">Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen.</a> Nature. 458, 211-214 (2009).</li><li>Vezys, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+CD8+T-cell+compartment+grows+in+size+with+immunological+experience.">Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience.</a> Nature. 457, 196-199 (2009).</li><li>Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+persistence+of+memory+CD8(+)+T+cells+depend+on+T+cell+factor+1.">Differentiation and persistence of memory CD8(+) T cells depend on T cell factor 1.</a> Immunity. 33, 229-240 (2010).</li><li>Wirth, T. C., Badovinac, V. P., Zhao, L., Dailey, M. O., Harty, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+central+memory+CD8+T+cells+is+independent+of+CD62L-mediated+trafficking+to+lymph+nodes.">Differentiation of central memory CD8 T cells is independent of CD62L-mediated trafficking to lymph nodes.</a> J. Immunol. 182, 6195-6206 (2009).</li><li>Rooke, R., Waltzinger, C., Benoist, C., Mathis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+complementation+of+MHC+class+II+deficiency+by+intrathymic+delivery+of+recombinant+adenoviruses.">Targeted complementation of MHC class II deficiency by intrathymic delivery of recombinant adenoviruses.</a> Immunity. 7, 123-134 (1997).</li><li>Witherden, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracycline-controllable+selection+of+CD4(+)+T+cells:+half-life+and+survival+signals+in+the+absence+of+major+histocompatibility+complex+class+II+molecules.">Tetracycline-controllable selection of CD4(+) T cells: half-life and survival signals in the absence of major histocompatibility complex class II molecules.</a> J. Exp. Med. 191, 355-364 (2000).</li><li>Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+much+TCR+does+a+T+cell+need.">How much TCR does a T cell need.</a> Immunity. 15, 71-82 (2001).</li><li>Leignadier, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epitope+density+influences+CD8++memory+T+cell+differentiation.">Epitope density influences CD8+ memory T cell differentiation.</a> PLoS One. 5, e13740 (2010).</li><li>Leignadier, J., Hardy, M. P., Cloutier, M., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+T-lymphocyte+survival+does+not+require+T-cell+receptor+expression.">Memory T-lymphocyte survival does not require T-cell receptor expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20440-20445 (2008).</li><li>Obst, R., van Santen, H. M., Mathis, D., Benoist, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+persistence+is+required+throughout+the+expansion+phase+of+a+CD4(+)+T+cell+response.">Antigen persistence is required throughout the expansion phase of a CD4(+) T cell response.</a> J. Exp. Med. 201, 1555-1565 (2005).</li><li>Bassett, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T-cell+expansion+and+maintenance+after+recombinant+adenovirus+immunization+rely+upon+cooperation+between+hematopoietic+and+nonhematopoietic+antigen-presenting+cells.">CD8+ T-cell expansion and maintenance after recombinant adenovirus immunization rely upon cooperation between hematopoietic and nonhematopoietic antigen-presenting cells.</a> Blood. 117, 1146-1155 (2011).</li><li>Lacombe, M. H., Hardy, M. P., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7+receptor+expression+levels+do+not+identify+CD8++memory+T+lymphocyte+precursors+following+peptide+immunization.">IL-7 receptor expression levels do not identify CD8+ memory T lymphocyte precursors following peptide immunization.</a> J. Immunol. 175, 4400-4407 (2005).</li><li>Leignadier, J., Rooney, J., Daudelin, J. F., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lowering+TCR+expression+on+naive+CD8++T+cells+does+not+affect+memory+T-cell+differentiation.">Lowering TCR expression on naive CD8+ T cells does not affect memory T-cell differentiation.</a> Immunol. Cell. Biol. 89, 322-325 (2011).</li></ol>

وقد وصفت نحن بروتوكولا للجراحة LN التي يمكن أن تنطبق على كثير من النظم التجريبية. وعلى الرغم من المفيد جدا لمتابعة الاستجابات المناعية أو المناعي توازن الخلية، هذه التقنية لديها عدد قليل من القيود. أولا، يمكن أن يحصد سوى أربعة LNS. ثانيا، يجب أن يكون رد الفعل المناعي در?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> غريف الجميلة الملقط بريميوم نمط </td><td> هارفارد جهاز </td><td> 52-2144 </td><td> منحني بقوة، 10 سم (4 بوصة)، و 0.8 ملم معلومات سرية </td></tr><tr><td> ميشال كليب تطبيق وإزالة الملقط </td><td> هارفارد جهاز </td><td> 52-3779 </td><td> 12.5 سم (5 بوصة) </td></tr><tr><td> ميشال كليب 100 </td><td> هارفارد جهاز </td><td> 52-3746 </td><td> 7،5-1،75 مم </td></tr><tr><td> Temgesic (البوبرينورفين هيدروكلوريد) </td><td> شيرينغ بلاو </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Vetalar (هيدروكلوريد الكيتامين) </td><td> Boniche الحيوان للرعاية الصحية </td><td></td><td> الدين: 01989529 </td></tr><tr><td> Rompun (زيلازين) </td><td> باير </td> &lt;TD&gt; </td><td> الدين: 02169592 </td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> ABBOTT </td><td></td><td> الدين: 02032384 </td></tr><tr><td> Hypotears العين مرهم </td><td> نوفارتيس Ophtalmics </td><td></td><td> الدين: 02133288 </td></tr><tr><td> Baxedin (Clorhexidine جلوكونات 2٪ في ايزوبروبيل 70٪) </td><td> أوميغا </td><td> L0000017 </td><td> الدين: 02251477 </td></tr></tbody></table>

murine superficial lymph node surgery

في مجال علم المناعة، لفهم تطور استجابة مناعية ضد لقاح لعدوى أو ورم، ويتبع في كثير من الأحيان استجابة مع مرور الوقت. وبالمثل، فإن دراسة التوازن لمفاوية يتطلب بطبيعة الحال التجارب المرة. تنفيذ هذه الدراسات في الماوس نفسه مثالية للحد من التقلبات التجريبية، فضلا عن عدد من الفئران المستخدمة. سحب الدم يسمح أداء التجارب مسار الزمن، لكنه يعطي فقط معلومات حول تعميم الخلايا اللمفية، ويقدم لعدد محدود من الخلايا 1-4. منذ الخلايا الليمفاوية من خلال تعميم الجسد والمقيمين في الغدد الليمفاوية لها خصائص مختلفة، من المهم أن تدرس كلا الموقعين. إزالة متتابعة من الغدد الليمفاوية عن طريق الجراحة يوفر فرصة فريدة لمتابعة استجابة مناعية أو توسيع الخلية المناعية في الماوس نفسه مع مرور الوقت. وعلاوة على ذلك، هذا الأسلوب ينتج بين الخلايا 6 1-2x10 في العقدة الليمفاوية التي هي كافية لPErform التوصيف المظهري و / أو فحوصات وظيفية. وقد متتابعة لعملية جراحية العقدة الليمفاوية أو الغدد الليمفاوية استخدمت بنجاح من قبلنا وغيرها من 5-11. هنا، نحن تصف كيف يمكن إزالة العقد اللمفية العضدية، والاربية من خلال جعل شق صغير في الجلد من فأر anesthetised. منذ العملية الجراحية هو سطحي والقيام بسرعة، والماوس للشفاء بسرعة كبيرة، ويشفى تماما وليس تجربة الألم المفرط. كل يوم الثاني على التوالي، فمن الممكن لجني الغدد الليمفاوية واحد أو اثنين مما يسمح للتجارب دوام. هذا الأسلوب هو مناسب وبالتالي إلى دراسة خصائص العقدة الليمفاوية، الخلايا الليمفاوية المقيمين على مر الزمن. هذا النهج هو مناسبة لتصاميم تجريبية مختلفة، ونعتقد أن العديد من المختبرات ستستفيد من تنفيذ عمليات جراحية متتابعة العقدة الليمفاوية.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Superficial Lymph Node Surgery at JoVE.com

Murine Superficial Lymph Node Surgery

لمتابعة تطور استجابة مناعية أكثر من مرة داخل الماوس نفسه، ويمكن إزالة الغدد الليمفاوية بشكل متتابع عن طريق الجراحة. هنا، نحن تصف كيف يمكن تنفيذ هذه التقنية.

الفئران عقدة اللمفاوية السطحية جراحة

In the field of immunology, to understand the progression of an immune response against a vaccine, an infection or a tumour, the response is often ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

Intravital الميكروسكوب من العقدة الليمفاوية الأربي

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

التصوير خارج الحي من خلايا تي في الفئران شرائح العقدة الليمفاوية مع Widefield ومجاهر متحد البؤر

Na&iuml;ve T cells continuously traffic to secondary lymphoid organs, including peripheral lymph nodes, to detect rare expressed antigens. The migration ...

Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

Intravital التصوير من العقدة اللمفية الفأر المأبضية

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign ...

Generation of Lymph Node-fat Pad Chimeras for the Study of Lymph Node Stromal Cell Origin

جيل من العقدة الليمفاوية الدسم سادة الوهم لدراسة العقدة الليمفاوية اللحمية خلية المنشأ

The stroma is a key component of the lymph node structure and function. However, little is known about its origin, exact cellular composition and the ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

عزل خلايا الفئران العقدة الليمفاوية اللحمية

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

النخاعي عزل الخلايا من الجلد ماوس وتصريف العقدة الليمفاوية بعد الأدمة التحصين مع لايف الموهن<em&gt; المتصورة</em&gt; Sporozoites

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Gu&#233;rin

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-GuÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â©rin

مقايسة على أساس CFSE لدراسة الهجرة من الجلد الفئران الخلايا الجذعية في تصريف الغدد الليمفاوية خلال العدوى مع<em&gt; المتفطرة البقرية</em&gt; عصيات كالميت غيران

Dendritic cells (DCs) are important for initiating immune responses, in part through their ability to acquire and shuttle antigen to the draining lymph ...

Murine Full-thickness Skin Transplantation

الفئران كامل سماكة الجلد زراعة

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

Intracellular Staining and Flow Cytometry to Identify Lymphocyte Subsets within Murine Aorta, Kidney and Lymph Nodes in a Model of Hypertension

بين الخلايا تلطيخ والتدفق الخلوي لتحديد الخلايا الليمفاوية مجموعات فرعية ضمن الفئران الأورطي، الكلى والغدد الليمفاوية في نموذج من ارتفاع ضغط الدم

It is now well known that T lymphocytes play a critical role in the development of several cardiovascular diseases1,2,3,4,5. For example, studies from our ...

Collection and Processing of Lymph Nodes from Large Animals for RNA Analysis: Preparing for Lymph Node Transcriptomic Studies of Large Animal Species

جمع وتجهيز العقد الليمفاوية من الحيوانات الكبيرة لتحليل الحمض النووي الريبي: التحضير للدراسات ترانسكريبتوميك العقدة الليمفاوية للأنواع الحيوانية الكبيرة

Large animals (both livestock and wildlife) serve as important reservoirs of zoonotic pathogens, including Brucella, Mycobacterium bovis, Salmonella, and ...