Name: murine superficial lymph node surgery
Uploaded: 2012-05-21T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Superficial Lymph Node Surgery at JoVE.com

Nous tenons à remercier Sylvie Lesage et tous les membres du laboratoire pour la lecture critique du protocole. Ce travail a été soutenu par une subvention (MOP-77545) à partir de l&#39;Institut canadien de recherche en santé (IRSC). Nathalie Labrecque est soutenu par une bourse du FRSQ principal et Mélissa Mathieu a reçu une CRSNG Alexander Graham Bell Canada Bourses d&#39;études supérieures.

1. Préparation avant la chirurgie Les souris ont été traitées conformément au Conseil canadien sur les lignes directrices en soins des animaux. <ol><li> Anesthésie souris par injection de kétamine / xylazine (150/300 mg / kg, ip) ou par inhalation d&#39;isoflurane (2%, l&#39;oxygène 1L). Si elle est disponible, l&#39;isoflurane doit être utilisé car il permet un meilleur contrôle de la durée de l&#39;anesthésie et la profondeur. En outre, l&#39;oxygène est administré en mêm...

<ol>
	<li>Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+but+curtailed+T-cell+response+to+very+low-affinity+antigen.">Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen.</a> Nature. 458, 211-214 (2009).</li><li>Vezys, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+CD8+T-cell+compartment+grows+in+size+with+immunological+experience.">Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience.</a> Nature. 457, 196-199 (2009).</li><li>Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+persistence+of+memory+CD8(+)+T+cells+depend+on+T+cell+factor+1.">Differentiation and persistence of memory CD8(+) T cells depend on T cell factor 1.</a> Immunity. 33, 229-240 (2010).</li><li>Wirth, T. C., Badovinac, V. P., Zhao, L., Dailey, M. O., Harty, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+central+memory+CD8+T+cells+is+independent+of+CD62L-mediated+trafficking+to+lymph+nodes.">Differentiation of central memory CD8 T cells is independent of CD62L-mediated trafficking to lymph nodes.</a> J. Immunol. 182, 6195-6206 (2009).</li><li>Rooke, R., Waltzinger, C., Benoist, C., Mathis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+complementation+of+MHC+class+II+deficiency+by+intrathymic+delivery+of+recombinant+adenoviruses.">Targeted complementation of MHC class II deficiency by intrathymic delivery of recombinant adenoviruses.</a> Immunity. 7, 123-134 (1997).</li><li>Witherden, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracycline-controllable+selection+of+CD4(+)+T+cells:+half-life+and+survival+signals+in+the+absence+of+major+histocompatibility+complex+class+II+molecules.">Tetracycline-controllable selection of CD4(+) T cells: half-life and survival signals in the absence of major histocompatibility complex class II molecules.</a> J. Exp. Med. 191, 355-364 (2000).</li><li>Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+much+TCR+does+a+T+cell+need.">How much TCR does a T cell need.</a> Immunity. 15, 71-82 (2001).</li><li>Leignadier, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epitope+density+influences+CD8++memory+T+cell+differentiation.">Epitope density influences CD8+ memory T cell differentiation.</a> PLoS One. 5, e13740 (2010).</li><li>Leignadier, J., Hardy, M. P., Cloutier, M., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+T-lymphocyte+survival+does+not+require+T-cell+receptor+expression.">Memory T-lymphocyte survival does not require T-cell receptor expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20440-20445 (2008).</li><li>Obst, R., van Santen, H. M., Mathis, D., Benoist, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+persistence+is+required+throughout+the+expansion+phase+of+a+CD4(+)+T+cell+response.">Antigen persistence is required throughout the expansion phase of a CD4(+) T cell response.</a> J. Exp. Med. 201, 1555-1565 (2005).</li><li>Bassett, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T-cell+expansion+and+maintenance+after+recombinant+adenovirus+immunization+rely+upon+cooperation+between+hematopoietic+and+nonhematopoietic+antigen-presenting+cells.">CD8+ T-cell expansion and maintenance after recombinant adenovirus immunization rely upon cooperation between hematopoietic and nonhematopoietic antigen-presenting cells.</a> Blood. 117, 1146-1155 (2011).</li><li>Lacombe, M. H., Hardy, M. P., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7+receptor+expression+levels+do+not+identify+CD8++memory+T+lymphocyte+precursors+following+peptide+immunization.">IL-7 receptor expression levels do not identify CD8+ memory T lymphocyte precursors following peptide immunization.</a> J. Immunol. 175, 4400-4407 (2005).</li><li>Leignadier, J., Rooney, J., Daudelin, J. F., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lowering+TCR+expression+on+naive+CD8++T+cells+does+not+affect+memory+T-cell+differentiation.">Lowering TCR expression on naive CD8+ T cells does not affect memory T-cell differentiation.</a> Immunol. Cell. Biol. 89, 322-325 (2011).</li></ol>

Nous avons décrit un protocole de chirurgie LN qui peut s&#39;appliquer à de nombreux systèmes expérimentaux. Bien que très utile pour suivre les réponses immunitaires ou l&#39;homéostasie des cellules immunitaires, cette technique a quelques limitations. Tout d&#39;abord, seulement quatre ganglions peuvent être récoltés. Deuxièmement, la réponse immunitaire étudiée doit être systémique ou se produire dans les inguinaux superficiels ou brachiale (la peau de vidange) LNS. Enfin, le nombre de cellules réc...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom réactif </td><td> Entreprise </td><td> Le numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Graefe Beaux Forceps haut de gamme de modèle </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 52-2144 </td><td> Fortement courbé, 10 cm (4 po), 0,8 mm pointe </td></tr><tr><td> Clips Michel application et le retrait Forceps </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 52-3779 </td><td> 12,5 cm (5 po) </td></tr><tr><td> Clips Michel 100 </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 52-3746 </td><td> De 7,5 à 1,75 mm </td></tr><tr><td> Temgésic (chlorhydrate de buprénorphine) </td><td> Schering-Plough </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Vetalar (chlorhydrate de kétamine) </td><td> Boniche animale Santé </td><td></td><td> DIN: 01989529 </td></tr><tr><td> Rompun (xylazine) </td><td> Bayer </td> &lt;td&gt; </td><td> DIN: 02169592 </td></tr><tr><td> L&#39;isoflurane </td><td> ABBOTT </td><td></td><td> DIN: 02032384 </td></tr><tr><td> Pommade oculaire Hypotears </td><td> Novartis ophtalmiques </td><td></td><td> DIN: 02133288 </td></tr><tr><td> Baxedin (gluconate de Clorhexidine 2% dans l&#39;alcool isopropylique à 70%) </td><td> Oméga </td><td> L0000017 </td><td> DIN: 02251477 </td></tr></tbody></table>

murine superficial lymph node surgery

Dans le domaine de l&#39;immunologie, de comprendre la progression d&#39;une réponse immunitaire contre un vaccin, une infection ou une tumeur, la réponse est souvent suivie au fil du temps. De même, l&#39;étude de l&#39;homéostasie lymphocytaire nécessite des expériences de cours à temps. La réalisation de ces études dans la même souris est idéale pour réduire la variabilité expérimentale ainsi que le nombre de souris utilisées. De prélèvement de sang permet des performances des expériences de cours à temps, mais il ne donne que des informations sur les lymphocytes circulants et fournit un nombre limité de cellules 1-4. Depuis lymphocytes circulants dans le corps et résidant dans les ganglions lymphatiques ont des propriétés différentes, il est important d&#39;examiner ces deux endroits. La suppression séquentielle des ganglions lymphatiques par la chirurgie offre une occasion unique de suivre une réponse immunitaire ou l&#39;expansion des cellules immunitaires chez la souris même au fil du temps. En outre, cette technique donne entre 1-2x10 6 cellules par des ganglions lymphatiques qui est suffisant pour perform caractérisation phénotypique et / ou des tests fonctionnels. Séquentiel chirurgie ganglionnaire ou lymphadénectomie a été utilisé avec succès par nous et les autres 5-11. Ici, nous décrivons comment les ganglions lymphatiques brachial et inguinales peuvent être retirés en faisant une petite incision dans la peau d&#39;une souris anesthésiée. Depuis la chirurgie est superficielle et fait rapidement, la souris récupère très rapidement, guérit bien et ne pas éprouver de la douleur excessive. Tous les deux jours, il est possible de récolter un ou deux ganglions lymphatiques permettant des expériences de cours à temps. Cette technique est donc appropriée pour étudier les caractéristiques des ganglions lymphatiques des lymphocytes résidant au fil du temps. Cette approche est adaptée aux différents modèles expérimentaux et nous pensons que de nombreux laboratoires gagneraient à effectuer séquentielles chirurgies des ganglions lymphatiques.

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Murine Superficial Lymph Node Surgery

Pour suivre la progression d&#39;une réponse immunitaire au fil du temps au sein de la même souris, des ganglions lymphatiques peut être enlevé par chirurgie séquentielle. Ici, nous décrivons comment cette technique peut être réalisée.

Murine chirurgie superficielle des ganglions lymphatiques

In the field of immunology, to understand the progression of an immune response against a vaccine, an infection or a tumour, the response is often ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

Microscopie intravitale du ganglion lymphatique inguinal

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

Recherche

Immunologie et infection

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Ex vivo l&#39;imagerie de cellules T dans murin tranches avec des ganglions lymphatiques et la microscopie confocale Widefield

Na&iuml;ve T cells continuously traffic to secondary lymphoid organs, including peripheral lymph nodes, to detect rare expressed antigens. The migration ...

Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

Imagerie intravitale du ganglion lymphatique poplité souris

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign ...

Generation of Lymph Node-fat Pad Chimeras for the Study of Lymph Node Stromal Cell Origin

The stroma is a key component of the lymph node structure and function. However, little is known about its origin, exact cellular composition and the ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Isolement de cellules murines ganglions lymphatiques stromales

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myéloïde cellule d&#39;isolement de la peau de souris et Vidange ganglion Après intradermique immunisation avec Live Atténuée<em&gt; Plasmodium</em&gt; sporozoïtes

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Gu&#233;rin

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-GuÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â©rin

Un test basé CFSE pour étudier la migration de la peau murine cellules dendritiques dans les ganglions lymphatiques de drainage lors de l&#39;infection avec<em&gt; Mycobacterium bovis</em&gt; Bacille Calmette-Guérin

Dendritic cells (DCs) are important for initiating immune responses, in part through their ability to acquire and shuttle antigen to the draining lymph ...

Murine Full-thickness Skin Transplantation

Murine Transplantation de peau pleine épaisseur

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

Intracellular Staining and Flow Cytometry to Identify Lymphocyte Subsets within Murine Aorta, Kidney and Lymph Nodes in a Model of Hypertension

Intracellulaires Coloration et cytométrie de flux pour identifier lymphocytaires sous-ensembles au sein murin Aorte, Reins et les ganglions lymphatiques dans un modèle de l&#39;hypertension

It is now well known that T lymphocytes play a critical role in the development of several cardiovascular diseases1,2,3,4,5. For example, studies from our ...

Collection and Processing of Lymph Nodes from Large Animals for RNA Analysis: Preparing for Lymph Node Transcriptomic Studies of Large Animal Species

Collecte et traitement des ganglions lymphatiques des animaux de grande taille pour l’analyse de l’ARN : préparation pour l’étude de transcriptomique ganglion des grandes espèces animales

Large animals (both livestock and wildlife) serve as important reservoirs of zoonotic pathogens, including Brucella, Mycobacterium bovis, Salmonella, and ...