Name: murine superficial lymph node surgery
Uploaded: 2012-05-21T12:00:00
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हम Sylvie Lesage और प्रोटोकॉल के महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए सभी प्रयोगशाला के सदस्यों को धन्यवाद देता हूं. इस काम के स्वास्थ्य अनुसंधान (CIHR) की कनाडा के संस्थानों से एक अनुदान (एमओपी 77,545) द्वारा समर्थित किया गया. नथाली Labrecque एक FRSQ वरिष्ठ छात्रवृत्ति के द्वारा समर्थित है और मेलिस्सा मैथ्यू एक NSERC अलेक्जेंडर ग्राहम बेल कनाडा ग्रेजुएट छात्रवृत्ति प्राप्त.

1. सर्जरी से पहले तैयारी चूहे पशु की देखभाल के दिशा निर्देशों पर कनाडा परिषद के अनुसार इलाज किया गया. <ol><li> चतनाशून्य करना चूहों, ketamine / xylazine (150/300 मिलीग्राम / किग्रा, आईपी) के इंजेक्शन या isoflurane की साँस ल?...

<ol>
	<li>Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+but+curtailed+T-cell+response+to+very+low-affinity+antigen.">Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen.</a> Nature. 458, 211-214 (2009).</li><li>Vezys, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+CD8+T-cell+compartment+grows+in+size+with+immunological+experience.">Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience.</a> Nature. 457, 196-199 (2009).</li><li>Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+persistence+of+memory+CD8(+)+T+cells+depend+on+T+cell+factor+1.">Differentiation and persistence of memory CD8(+) T cells depend on T cell factor 1.</a> Immunity. 33, 229-240 (2010).</li><li>Wirth, T. C., Badovinac, V. P., Zhao, L., Dailey, M. O., Harty, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+central+memory+CD8+T+cells+is+independent+of+CD62L-mediated+trafficking+to+lymph+nodes.">Differentiation of central memory CD8 T cells is independent of CD62L-mediated trafficking to lymph nodes.</a> J. Immunol. 182, 6195-6206 (2009).</li><li>Rooke, R., Waltzinger, C., Benoist, C., Mathis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+complementation+of+MHC+class+II+deficiency+by+intrathymic+delivery+of+recombinant+adenoviruses.">Targeted complementation of MHC class II deficiency by intrathymic delivery of recombinant adenoviruses.</a> Immunity. 7, 123-134 (1997).</li><li>Witherden, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracycline-controllable+selection+of+CD4(+)+T+cells:+half-life+and+survival+signals+in+the+absence+of+major+histocompatibility+complex+class+II+molecules.">Tetracycline-controllable selection of CD4(+) T cells: half-life and survival signals in the absence of major histocompatibility complex class II molecules.</a> J. Exp. Med. 191, 355-364 (2000).</li><li>Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+much+TCR+does+a+T+cell+need.">How much TCR does a T cell need.</a> Immunity. 15, 71-82 (2001).</li><li>Leignadier, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epitope+density+influences+CD8++memory+T+cell+differentiation.">Epitope density influences CD8+ memory T cell differentiation.</a> PLoS One. 5, e13740 (2010).</li><li>Leignadier, J., Hardy, M. P., Cloutier, M., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+T-lymphocyte+survival+does+not+require+T-cell+receptor+expression.">Memory T-lymphocyte survival does not require T-cell receptor expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20440-20445 (2008).</li><li>Obst, R., van Santen, H. M., Mathis, D., Benoist, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+persistence+is+required+throughout+the+expansion+phase+of+a+CD4(+)+T+cell+response.">Antigen persistence is required throughout the expansion phase of a CD4(+) T cell response.</a> J. Exp. Med. 201, 1555-1565 (2005).</li><li>Bassett, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T-cell+expansion+and+maintenance+after+recombinant+adenovirus+immunization+rely+upon+cooperation+between+hematopoietic+and+nonhematopoietic+antigen-presenting+cells.">CD8+ T-cell expansion and maintenance after recombinant adenovirus immunization rely upon cooperation between hematopoietic and nonhematopoietic antigen-presenting cells.</a> Blood. 117, 1146-1155 (2011).</li><li>Lacombe, M. H., Hardy, M. P., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7+receptor+expression+levels+do+not+identify+CD8++memory+T+lymphocyte+precursors+following+peptide+immunization.">IL-7 receptor expression levels do not identify CD8+ memory T lymphocyte precursors following peptide immunization.</a> J. Immunol. 175, 4400-4407 (2005).</li><li>Leignadier, J., Rooney, J., Daudelin, J. F., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lowering+TCR+expression+on+naive+CD8++T+cells+does+not+affect+memory+T-cell+differentiation.">Lowering TCR expression on naive CD8+ T cells does not affect memory T-cell differentiation.</a> Immunol. Cell. Biol. 89, 322-325 (2011).</li></ol>

हम एलएन सर्जरी के एक प्रोटोकॉल है जो कई प्रयोगात्मक सिस्टम को लागू कर सकते हैं वर्णन किया है. हालांकि बहुत उपयोगी प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया या प्रतिरक्षा सेल homeostasis को पालन करने के लिए, इस तकनीक के कुछ सीमा?...

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूची संख्या </td><td> टिप्पणियाँ </td></tr><tr><td> ठीक पैटर्न प्रीमियम संदंश Graefe </td><td> हार्वर्ड उपकरण </td><td> 52-2144 </td><td> दृढ़ता से घुमावदार, 10 (4) में सेमी, 0.8 मिमी टिप </td></tr><tr><td> मिशेल क्लिप को लागू करना और हटाना संदंश </td><td> हार्वर्ड उपकरण </td><td> 52-3779 </td><td> 12.5 सेमी (5 में) </td></tr><tr><td> मिशेल 100 क्लिप </td><td> हार्वर्ड उपकरण </td><td> 52-3746 </td><td> 7.5-1.75 मिमी </td></tr><tr><td> Temgesic (Buprenorphine हाइड्रोक्लोराइड) </td><td> Schering-सप्तऋषि </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Vetalar (Ketamine हाइड्रोक्लोराइड) </td><td> Boniche पशु हेल्थकेयर </td><td></td><td> दीन: 01989529 </td></tr><tr><td> Rompun (Xylazine) </td><td> बायर </td> &lt;p&gt; </td><td> दीन: 02169592 </td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> ABBOTT </td><td></td><td> दीन: 02032384 </td></tr><tr><td> Hypotears नेत्र मरहम </td><td> नोवार्टिस Ophtalmics </td><td></td><td> दीन: 02133288 </td></tr><tr><td> Baxedin (Clorhexidine 2 isopropyl शराब में gluconate% 70%) </td><td> ओमेगा </td><td> L0000017 </td><td> दीन: 02251477 </td></tr></tbody></table>

murine superficial lymph node surgery

इम्मुनोलोगि के क्षेत्र में, एक टीका, एक संक्रमण या एक ट्यूमर के खिलाफ एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की प्रगति को समझने में, प्रतिक्रिया अक्सर समय के साथ पीछा किया जाता है. इसी तरह, लिम्फोसाइट homeostasis के अध्ययन पाठ्यक्रम प्रयोगों की आवश्यकता है. एक ही माउस के भीतर इन अध्ययनों प्रदर्शन प्रयोगात्मक रूप में अच्छी तरह के रूप में इस्तेमाल चूहों की संख्या परिवर्तनशीलता को कम करने के लिए आदर्श है. रक्त वापसी समय पाठ्यक्रम प्रयोगों के प्रदर्शन की अनुमति देता है, लेकिन यह ही लिम्फोसाइटों परिसंचारी के बारे में जानकारी देता है और 1-4 कक्षों की एक सीमित संख्या प्रदान करता है. के बाद से शरीर के माध्यम से परिसंचारी और लिम्फ नोड्स में रहने लिम्फोसाइटों अलग गुण है, यह महत्वपूर्ण है दोनों स्थानों की जांच की. अनुक्रमिक हटाने सर्जरी द्वारा लिम्फ नोड्स के एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया या समय पर एक ही माउस में प्रतिरक्षा सेल विस्तार का पालन करने के लिए एक अनूठा अवसर प्रदान करता है. इसके अलावा, इस तकनीक 1 - 2x10 लिम्फ नोड 6 प्रतिशत कोशिकाओं के बीच पैदावार जो पे के लिए पर्याप्त हैप्ररूपी लक्षण वर्णन और / या कार्यात्मक assays rform. अनुक्रमिक लसीका नोड सर्जरी या lymphadenectomy सफलतापूर्वक किया गया है हमारे और दूसरों के 5-11 के द्वारा प्रयोग किया जाता है. यहाँ, हम वर्णन कैसे बाहु और वंक्षण लिम्फ नोड्स एक anesthetised माउस की त्वचा में एक छोटा सा चीरा द्वारा हटाया जा सकता है. के बाद सर्जरी सतही और तेजी से किया है, माउस बहुत जल्दी ठीक है, अच्छी तरह से भर देता है और अत्यधिक दर्द का अनुभव नहीं है. हर दूसरे दिन, यह संभव है फसल एक या दो लिम्फ नोड्स समय बेशक प्रयोगों के लिए अनुमति देता है. इस तकनीक को इस तरह समय के साथ लसीका नोड की विशेषताओं रहने लिम्फोसाइटों का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त है. इस दृष्टिकोण के विभिन्न प्रयोगात्मक डिजाइन के लिए उपयुक्त है और हम मानते हैं कि कई प्रयोगशालाओं अनुक्रमिक लसीका नोड सर्जरी के प्रदर्शन से लाभ होगा.

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Murine Superficial Lymph Node Surgery

एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के ही माउस भीतर समय के साथ प्रगति का पालन करने के लिए, लिम्फ नोड्स sequentially सर्जरी द्वारा हटाया जा सकता है. यहाँ, हम वर्णन कैसे इस तकनीक का प्रदर्शन किया जा सकता है.

को murine सतही लिम्फ नोड सर्जरी

In the field of immunology, to understand the progression of an immune response against a vaccine, an infection or a tumour, the response is often ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

वंक्षण लिम्फ नोड के intravital माइक्रोस्कोपी

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Widefield और confocal सूक्ष्मदर्शी के साथ murine लसीका नोड स्लाइसें में टी कोशिकाओं की पूर्व vivo इमेजिंग

Na&iuml;ve T cells continuously traffic to secondary lymphoid organs, including peripheral lymph nodes, to detect rare expressed antigens. The migration ...

Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

माउस जानुपृष्ठीय लसीका नोड के intravital इमेजिंग

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign ...

Generation of Lymph Node-fat Pad Chimeras for the Study of Lymph Node Stromal Cell Origin

लिम्फ नोड stromal सेल मूल के अध्ययन के लिए लिम्फ नोड वसा पैड काइमेरा का सृजन

The stroma is a key component of the lymph node structure and function. However, little is known about its origin, exact cellular composition and the ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Murine लिम्फ नोड stromal कोशिकाओं का अलगाव

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

माउस त्वचा और draining लिम्फ नोड से माइलॉयड सेल अलगाव लाइव तनु के साथ intradermal टीकाकरण के बाद<em&gt; प्लाज्मोडियम</em&gt; स्पोरोजोएट्स

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Gu&#233;rin

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-GuÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â©rin

Draining लिम्फ नोड्स में Murine त्वचा वृक्ष के समान कोशिकाओं के प्रवास का अध्ययन करने के साथ संक्रमण के दौरान एक CFSE आधारित परख<em&gt; माइकोबैक्टीरियम बोविस</em&gt; Bacille Calmette-Guérin

Dendritic cells (DCs) are important for initiating immune responses, in part through their ability to acquire and shuttle antigen to the draining lymph ...

Murine Full-thickness Skin Transplantation

Murine पूर्ण मोटाई त्वचा प्रत्यारोपण

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

Intracellular Staining and Flow Cytometry to Identify Lymphocyte Subsets within Murine Aorta, Kidney and Lymph Nodes in a Model of Hypertension

Intracellular धुंधला और फ्लो का उच्च रक्तचाप के एक मॉडल में murine महाधमनी, किडनी और लिम्फ नोड्स के भीतर लिम्फोसाइट सबसेट की पहचान करने के लिए

It is now well known that T lymphocytes play a critical role in the development of several cardiovascular diseases1,2,3,4,5. For example, studies from our ...

Collection and Processing of Lymph Nodes from Large Animals for RNA Analysis: Preparing for Lymph Node Transcriptomic Studies of Large Animal Species

आरएनए विश्लेषण के लिए बड़े जानवरों से लिम्फ नोड्स के संग्रह और प्रसंस्करण: बड़े पशु प्रजातियों के लिम्फ नोड Transcriptomic अध्ययन के लिए तैयारी

Large animals (both livestock and wildlife) serve as important reservoirs of zoonotic pathogens, including Brucella, Mycobacterium bovis, Salmonella, and ...