Name: murine superficial lymph node surgery
Uploaded: 2012-05-21T12:00:00
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우리는 Sylvie의 Lesage 및 프로토콜의 중요한 독서에 대한 모든 실험실 구성원 감사드립니다. 이 작품은 건강 연구 (CIHR)의 캐나다 연구소에서 교부금 (걸레-77545)에 의해 지원되었다. 나탈리 Labrecque는 FRSQ 수석 장학금의 지원과 멜리사 매튜는 NSERC 알렉산더 그레이엄 벨 캐나다의 대학원 장학금을 받고있다.

1. 수술 전 준비 마우스는 동물 복지 지침에 캐나다 문화원에 따라 취급되었다. <ol><li> 케타민을 / xylazine (300분의 150 밀리그램 / kg, IP)의 주입에 의해 또는 isoflurane의 흡입 (2 %, 1L 산소)에 의한 마취시키다 생쥐. 가능한 경우는 마취 시간과 깊이 나은 제어를 허용로 isoflurane를 사용해야합니다. 또한 산소는 동물의 생리 기능을 지원하는 동시에 관리합니다. 또한, isoflurane 직접 ?...

<ol>
	<li>Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+but+curtailed+T-cell+response+to+very+low-affinity+antigen.">Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen.</a> Nature. 458, 211-214 (2009).</li><li>Vezys, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+CD8+T-cell+compartment+grows+in+size+with+immunological+experience.">Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience.</a> Nature. 457, 196-199 (2009).</li><li>Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+persistence+of+memory+CD8(+)+T+cells+depend+on+T+cell+factor+1.">Differentiation and persistence of memory CD8(+) T cells depend on T cell factor 1.</a> Immunity. 33, 229-240 (2010).</li><li>Wirth, T. C., Badovinac, V. P., Zhao, L., Dailey, M. O., Harty, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+central+memory+CD8+T+cells+is+independent+of+CD62L-mediated+trafficking+to+lymph+nodes.">Differentiation of central memory CD8 T cells is independent of CD62L-mediated trafficking to lymph nodes.</a> J. Immunol. 182, 6195-6206 (2009).</li><li>Rooke, R., Waltzinger, C., Benoist, C., Mathis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+complementation+of+MHC+class+II+deficiency+by+intrathymic+delivery+of+recombinant+adenoviruses.">Targeted complementation of MHC class II deficiency by intrathymic delivery of recombinant adenoviruses.</a> Immunity. 7, 123-134 (1997).</li><li>Witherden, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracycline-controllable+selection+of+CD4(+)+T+cells:+half-life+and+survival+signals+in+the+absence+of+major+histocompatibility+complex+class+II+molecules.">Tetracycline-controllable selection of CD4(+) T cells: half-life and survival signals in the absence of major histocompatibility complex class II molecules.</a> J. Exp. Med. 191, 355-364 (2000).</li><li>Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+much+TCR+does+a+T+cell+need.">How much TCR does a T cell need.</a> Immunity. 15, 71-82 (2001).</li><li>Leignadier, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epitope+density+influences+CD8++memory+T+cell+differentiation.">Epitope density influences CD8+ memory T cell differentiation.</a> PLoS One. 5, e13740 (2010).</li><li>Leignadier, J., Hardy, M. P., Cloutier, M., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+T-lymphocyte+survival+does+not+require+T-cell+receptor+expression.">Memory T-lymphocyte survival does not require T-cell receptor expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20440-20445 (2008).</li><li>Obst, R., van Santen, H. M., Mathis, D., Benoist, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+persistence+is+required+throughout+the+expansion+phase+of+a+CD4(+)+T+cell+response.">Antigen persistence is required throughout the expansion phase of a CD4(+) T cell response.</a> J. Exp. Med. 201, 1555-1565 (2005).</li><li>Bassett, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T-cell+expansion+and+maintenance+after+recombinant+adenovirus+immunization+rely+upon+cooperation+between+hematopoietic+and+nonhematopoietic+antigen-presenting+cells.">CD8+ T-cell expansion and maintenance after recombinant adenovirus immunization rely upon cooperation between hematopoietic and nonhematopoietic antigen-presenting cells.</a> Blood. 117, 1146-1155 (2011).</li><li>Lacombe, M. H., Hardy, M. P., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7+receptor+expression+levels+do+not+identify+CD8++memory+T+lymphocyte+precursors+following+peptide+immunization.">IL-7 receptor expression levels do not identify CD8+ memory T lymphocyte precursors following peptide immunization.</a> J. Immunol. 175, 4400-4407 (2005).</li><li>Leignadier, J., Rooney, J., Daudelin, J. F., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lowering+TCR+expression+on+naive+CD8++T+cells+does+not+affect+memory+T-cell+differentiation.">Lowering TCR expression on naive CD8+ T cells does not affect memory T-cell differentiation.</a> Immunol. Cell. Biol. 89, 322-325 (2011).</li></ol>

우리는 많은 실험적인 시스템에 적용할 수있는 에선 수술의 프로토콜을 설명했습니다. 면역 반응 또는 면역 세포 항상성를 수행하는 것이 매우 유용하지만,이 기법은 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 첫째, 적당히 LNs을 수확 할 수 있습니다. 둘째, 공부 면역 반응은 조직의 산물이거나 외면 사타구니 또는 상완 (피부 배수) LNs에서 발생합니다. 마지막으로, 수확 세포의 숫자 에선 제거, 절대 셀 참조...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 파인 패턴 프리미엄 집게를 Graefe </td><td> 하버드 장치 </td><td> 52-2144 </td><td> 매우 구부러져, 10cm (4), 0.8 밀리미터 팁 </td></tr><tr><td> 미셸 클립 집게 적용 및 제거 </td><td> 하버드 장치 </td><td> 52-3779 </td><td> 12.5 cm (5) </td></tr><tr><td> 미셸 클립 100 </td><td> 하버드 장치 </td><td> 52-3746 </td><td> 7.5-1.75 mm </td></tr><tr><td> Temgesic (Buprenorphine 염산염) </td><td> Schering-북두칠성 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Vetalar (케타민을 하이드로 클로라이드) </td><td> Boniche 동물 건강 관리 </td><td></td><td> DIN : 01,989,529 </td></tr><tr><td> Rompun (Xylazine) </td><td> 바이엘 </td> &lt;TD&gt; </td><td> DIN : 02,169,592 </td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> 애보트 </td><td></td><td> DIN : 02,032,384 </td></tr><tr><td> Hypotears의 눈 연고 </td><td> 노바티스 Ophtalmics </td><td></td><td> DIN : 02,133,288 </td></tr><tr><td> Baxedin (이소 프로필 알코올의 Clorhexidine 글루 콘 산 2퍼센트 70 %) </td><td> 오메가 </td><td> L0000017 </td><td> DIN : 02,251,477 </td></tr></tbody></table>

murine superficial lymph node surgery

백신, 감염이나 종양에 대한 면역 반응의 진행을 이해하는 면역학 분야에서, 반응은 종종 시간이 지남에 따라합니다. 마찬가지로 림프구 항상성의 연구는 시간 과정 실험이 필요합니다. 같은 마우스 내에서 이러한 연구를 수행하는 것은 실험적 다양성뿐만 아니라 사용하는 마우스의 개수를 줄이기 위해 이상적입니다. 혈액 금단 시간 과정 실험의 성능을 가능하지만, 그것은 단지 lymphocytes 순환에 대한 정보를 제공하고 세포 1-4 제한된 수의를 제공합니다. 몸 전체 순환과 림프 노드에 거주하는 lymphocytes 서로 다른 성질을 가지고 있기 때문에 두 위치를 검토하는 것이 중요합니다. 수술에 의한 림프절의 연속적인 제거는 면역 반응이나 시간의 경과에 같은 마우스의 면역 세포 확장을 수행하는 독특한 기회를 제공합니다. 또한이 기술은 PE에 대한 충분한입니다 림프절 당 1-2x10 6 셀 사이에 듭니다phenotypic 특성화 및 / 또는 기능 assays를 rform. 순차 림프절 수술이나 lymphadenectomy이 성공적으로 우리와 다른 5-11에 의해 사용되었습니다. 여기서는 상완과 사타구니 임파선이 anesthetised 마우스의 피부에 작은 절개를함으로써 제거할 수 방법에 대해 설명합니다. 수술은 외면하고 신속하게 이루어지기 때문에, 마우스가 매우 빠르게 복구 잘 치유하고 과도한 통증을 경험하지 않습니다. 매초마다 하루 시간 과정 실험 허용 하나 또는 두 개의 림프절을 적출하는 것이 가능합니다. 이 기술은 시간이 지남에 임파선의 특성 노드 거주 lymphocytes를 공부하기 때문에 적합합니다. 이 방법은 여러 가지 실험 설계에 적합하며 우리는 많은 실험실은 순차 림프절의 수술을 혜택을 누릴 것이라고 믿습니다.

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Murine Superficial Lymph Node Surgery

같은 마우스 내에서 시간에 따른 면역 반응의 진행을 수행하려면, 임파선이 순차적으로 수술로 제거할 수 있습니다. 여기서는이 기술을 수행할 수있는 방법에 대해 설명합니다.

Murine 외면적인 림프절 외과

In the field of immunology, to understand the progression of an immune response against a vaccine, an infection or a tumour, the response is often ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

사타구니 림프 노드의 Intravital 현미경

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

연구

면역학 및 감염병학

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

위드 필드와 공촛점 현미경과 Murine 림프절의 조각에서 T 세포의 생체내 이미징 전

Na&iuml;ve T cells continuously traffic to secondary lymphoid organs, including peripheral lymph nodes, to detect rare expressed antigens. The migration ...

Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

마우스 오금 림프절의 Intravital 이미징

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign ...

Generation of Lymph Node-fat Pad Chimeras for the Study of Lymph Node Stromal Cell Origin

The stroma is a key component of the lymph node structure and function. However, little is known about its origin, exact cellular composition and the ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

쥐과 림프절 기질 세포의 분리

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

약독 화와 피내 접종에 따라 마우스의 피부와 배수 림프절에서 골수 세포 분리<em&gt; 변형체</em&gt; 포자 소체

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Gu&#233;rin

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-GuÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â©rin

와 감염시 배수 림프절에 쥐 피부 수지상 세포의 마이그레이션을 연구하는 CFSE 기반 분석<em&gt; 소 결핵균</em&gt; Bacille 칼 메트 - GUERIN

Dendritic cells (DCs) are important for initiating immune responses, in part through their ability to acquire and shuttle antigen to the draining lymph ...

Murine Full-thickness Skin Transplantation

쥐의 전체 두께 피부 이식

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

Intracellular Staining and Flow Cytometry to Identify Lymphocyte Subsets within Murine Aorta, Kidney and Lymph Nodes in a Model of Hypertension

세포 내 염색 및 유동 세포 계측법은 고혈압의 모델에 쥐 대동맥, 신장 및 림프절에서 림프구 하위 집합을 식별하는

It is now well known that T lymphocytes play a critical role in the development of several cardiovascular diseases1,2,3,4,5. For example, studies from our ...

Collection and Processing of Lymph Nodes from Large Animals for RNA Analysis: Preparing for Lymph Node Transcriptomic Studies of Large Animal Species

수집 및 RNA 분석에 대 한 큰 동물에서 림프절의 처리: 큰 동물 종의 림프 노드 Transcriptomic 연구에 대 한 준비

Large animals (both livestock and wildlife) serve as important reservoirs of zoonotic pathogens, including Brucella, Mycobacterium bovis, Salmonella, and ...