Name: murine superficial lymph node surgery
Uploaded: 2012-05-21T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Superficial Lymph Node Surgery at JoVE.com

Мы благодарим Сильви Лесаж и все лаборатории членов критического чтения протокола. Эта работа была поддержана грантом (СС-77 545) из Канадского института исследований в области здравоохранения (CIHR). Натали Labrecque поддерживается FRSQ старший стипендии и Мелисса Матье получил NSERC Александр Грэхем Белл Канада высшей стипендии.

1. Подготовка перед операцией Мыши были обработаны в соответствии с Канадским советом по руководящим принципам Animal Care. <ol><li> Anesthetise мышам инъекции кетамина / ксилазина (150/300 мг / кг, внутрибрюшинно) или при вдыхании ИФ (2%, 1 л кислорода). Если возможно, ИФ следует использоват?...

<ol>
	<li>Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+but+curtailed+T-cell+response+to+very+low-affinity+antigen.">Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen.</a> Nature. 458, 211-214 (2009).</li><li>Vezys, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+CD8+T-cell+compartment+grows+in+size+with+immunological+experience.">Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience.</a> Nature. 457, 196-199 (2009).</li><li>Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+persistence+of+memory+CD8(+)+T+cells+depend+on+T+cell+factor+1.">Differentiation and persistence of memory CD8(+) T cells depend on T cell factor 1.</a> Immunity. 33, 229-240 (2010).</li><li>Wirth, T. C., Badovinac, V. P., Zhao, L., Dailey, M. O., Harty, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+central+memory+CD8+T+cells+is+independent+of+CD62L-mediated+trafficking+to+lymph+nodes.">Differentiation of central memory CD8 T cells is independent of CD62L-mediated trafficking to lymph nodes.</a> J. Immunol. 182, 6195-6206 (2009).</li><li>Rooke, R., Waltzinger, C., Benoist, C., Mathis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+complementation+of+MHC+class+II+deficiency+by+intrathymic+delivery+of+recombinant+adenoviruses.">Targeted complementation of MHC class II deficiency by intrathymic delivery of recombinant adenoviruses.</a> Immunity. 7, 123-134 (1997).</li><li>Witherden, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracycline-controllable+selection+of+CD4(+)+T+cells:+half-life+and+survival+signals+in+the+absence+of+major+histocompatibility+complex+class+II+molecules.">Tetracycline-controllable selection of CD4(+) T cells: half-life and survival signals in the absence of major histocompatibility complex class II molecules.</a> J. Exp. Med. 191, 355-364 (2000).</li><li>Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+much+TCR+does+a+T+cell+need.">How much TCR does a T cell need.</a> Immunity. 15, 71-82 (2001).</li><li>Leignadier, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epitope+density+influences+CD8++memory+T+cell+differentiation.">Epitope density influences CD8+ memory T cell differentiation.</a> PLoS One. 5, e13740 (2010).</li><li>Leignadier, J., Hardy, M. P., Cloutier, M., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+T-lymphocyte+survival+does+not+require+T-cell+receptor+expression.">Memory T-lymphocyte survival does not require T-cell receptor expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20440-20445 (2008).</li><li>Obst, R., van Santen, H. M., Mathis, D., Benoist, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+persistence+is+required+throughout+the+expansion+phase+of+a+CD4(+)+T+cell+response.">Antigen persistence is required throughout the expansion phase of a CD4(+) T cell response.</a> J. Exp. Med. 201, 1555-1565 (2005).</li><li>Bassett, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T-cell+expansion+and+maintenance+after+recombinant+adenovirus+immunization+rely+upon+cooperation+between+hematopoietic+and+nonhematopoietic+antigen-presenting+cells.">CD8+ T-cell expansion and maintenance after recombinant adenovirus immunization rely upon cooperation between hematopoietic and nonhematopoietic antigen-presenting cells.</a> Blood. 117, 1146-1155 (2011).</li><li>Lacombe, M. H., Hardy, M. P., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7+receptor+expression+levels+do+not+identify+CD8++memory+T+lymphocyte+precursors+following+peptide+immunization.">IL-7 receptor expression levels do not identify CD8+ memory T lymphocyte precursors following peptide immunization.</a> J. Immunol. 175, 4400-4407 (2005).</li><li>Leignadier, J., Rooney, J., Daudelin, J. F., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lowering+TCR+expression+on+naive+CD8++T+cells+does+not+affect+memory+T-cell+differentiation.">Lowering TCR expression on naive CD8+ T cells does not affect memory T-cell differentiation.</a> Immunol. Cell. Biol. 89, 322-325 (2011).</li></ol>

Мы описали протокол Л.Н. операции, которые могут применяться в отношении многих экспериментальных систем. Хотя очень полезно следовать иммунный ответ или иммунного гомеостаза клетки, этот метод имеет ряд ограничений. Во-первых, только четыре LNS могут быть собраны. Во-вторых, иммунный от...

<table border="1"><tbody><tr><td> Реагент Имя </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Грефе пинцет изобразительных премиум шаблон </td><td> Гарвардский аппарата </td><td> 52-2144 </td><td> Сильно изогнутый, 10 см (4 дюйма), 0,8 мм наконечником </td></tr><tr><td> Мишель клип Применение и удаление щипцы </td><td> Гарвардский аппарата </td><td> 52-3779 </td><td> 12,5 см (5 дюймов) </td></tr><tr><td> Мишель клипов 100 </td><td> Гарвардский аппарата </td><td> 52-3746 </td><td> 7.5-1.75 мм </td></tr><tr><td> Temgesic (бупренорфина гидрохлорид) </td><td> Schering-Plough </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Vetalar (кетамина гидрохлорид) </td><td> Boniche животных здравоохранения </td><td></td><td> DIN: 01989529 </td></tr><tr><td> Rompun (Ксилазин) </td><td> Bayer </td> &lt;TD&gt; </td><td> DIN: 02169592 </td></tr><tr><td> Изофлюран </td><td> ABBOTT </td><td></td><td> DIN: 02032384 </td></tr><tr><td> Hypotears глазной мази </td><td> Novartis Ophtalmics </td><td></td><td> DIN: 02133288 </td></tr><tr><td> Baxedin (Clorhexidine глюконат 2% изопропиловый спирт 70%) </td><td> Омега </td><td> L0000017 </td><td> DIN: 02251477 </td></tr></tbody></table>

murine superficial lymph node surgery

В области иммунологии, чтобы понять, прогрессирование иммунного ответа на вакцину, инфекции или опухоли, ответ часто сопровождается с течением времени. Кроме того, исследование лимфоцитов гомеостаза требует экспериментов время курса. Выполнение этих работ в том же мышь идеально подходит для уменьшения экспериментальной изменчивости, а также количество мышей использовали. Забора крови позволяет проводить эксперименты время, конечно, но это только дает информацию о циркулирующих лимфоцитов и предоставляет ограниченное количество ячеек 1-4. Так как лимфоциты циркулируют по всему телу и проживающих в лимфатические узлы имеют различные свойства, важно изучить обоих местах. Последовательное удаление лимфатических узлов хирургическим путем предоставляет уникальную возможность следить за иммунный ответ или иммунной расширения ячейки в той же мыши с течением времени. Кроме того, этот метод дает от 1-2х10 6 клеток в лимфатических узлах, достаточное для пеrform фенотипические характеристики и / или функционального анализа. Последовательные операции лимфатических узлов или лимфаденэктомия была успешно использована нами и другими 5-11. Здесь мы опишем, как плечевой и паховые лимфатические узлы могут быть удалены, сделав небольшой разрез в коже anesthetised мыши. Поскольку операция является поверхностным и сделать быстро, мыши восстанавливается очень быстро, заживает хорошо и не испытывает чрезмерную боль. Каждый второй день, можно собрать один или два лимфатических узлов позволяет эксперименты время курса. Этот метод, таким образом, подходящим для изучения характеристик лимфатических узлов, проживающих лимфоцитов с течением времени. Такой подход годится для различных экспериментальных проектов и мы считаем, что многие лаборатории выиграют от выполнения последовательных операций лимфатических узлов.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Superficial Lymph Node Surgery at JoVE.com

Murine Superficial Lymph Node Surgery

Чтобы проследить прогрессирование иммунного ответа с течением времени в той же мыши, лимфатические узлы могут быть последовательно удалены хирургическим путем. Здесь мы опишем, как эта техника может быть выполнена.

Поверхностные мышей хирургии лимфатических узлов

In the field of immunology, to understand the progression of an immune response against a vaccine, an infection or a tumour, the response is often ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

Прижизненные микроскопия пахового лимфатического узла

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Экс естественных изображений Т-клеток у мышей фрагменты лимфатических узлов с Широкоугольные и конфокальной Микроскопы

Na&iuml;ve T cells continuously traffic to secondary lymphoid organs, including peripheral lymph nodes, to detect rare expressed antigens. The migration ...

Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

Прижизненные изображения с помощью мыши подколенный лимфатический узел

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign ...

Generation of Lymph Node-fat Pad Chimeras for the Study of Lymph Node Stromal Cell Origin

The stroma is a key component of the lymph node structure and function. However, little is known about its origin, exact cellular composition and the ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Выделение Мышиный лимфатических узлов стромальных клеток

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Миелоидный Выделение клеток из кожи мышей и Слив лимфатического узла После внутрикожной иммунизации с живой аттенуированной<em&gt; Plasmodium</em&gt; Спорозоиты

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Gu&#233;rin

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-GuÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â©rin

Пробирного CFSE основе для изучения миграции мышиной кожи дендритных клеток в Опорожнение лимфатических узлов во время инфекции с<em&gt; Mycobacterium Bovis</em&gt; Кальметта-Герена

Dendritic cells (DCs) are important for initiating immune responses, in part through their ability to acquire and shuttle antigen to the draining lymph ...

Murine Full-thickness Skin Transplantation

Мышиные Полная толщина кожи Трансплантация

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

Intracellular Staining and Flow Cytometry to Identify Lymphocyte Subsets within Murine Aorta, Kidney and Lymph Nodes in a Model of Hypertension

Внутриклеточные Окрашивание и проточной цитометрии для идентификации субпопуляций лимфоцитов в пределах мышиной аорте, почек и лимфатических узлов в модели артериальной гипертензии

It is now well known that T lymphocytes play a critical role in the development of several cardiovascular diseases1,2,3,4,5. For example, studies from our ...

Collection and Processing of Lymph Nodes from Large Animals for RNA Analysis: Preparing for Lymph Node Transcriptomic Studies of Large Animal Species

Сбор и обработка лимфатических узлов от крупных животных для анализа РНК: подготовка исследований транскриптомики Лимфоузел крупных видов животных

Large animals (both livestock and wildlife) serve as important reservoirs of zoonotic pathogens, including Brucella, Mycobacterium bovis, Salmonella, and ...