Name: murine superficial lymph node surgery
Uploaded: 2012-05-21T12:00:00
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Damos las gracias a Lesage Sylvie y todos los miembros del laboratorio para la lectura crítica del protocolo. Este trabajo fue apoyado por una beca (MOP-77545) de los Institutos Canadienses de Investigación en Salud (CIHR). Nathalie Labrecque con el apoyo de una Beca Senior de FRSQ y Mélissa Mathieu recibió un NSERC Alexander Graham Bell Canada Becas de Posgrado.

1. Preparación Antes de la cirugía Los ratones fueron tratados de acuerdo con el Consejo Canadiense de Cuidado de Animales Directrices. <ol><li> Ratones anestesiar por inyección de ketamina / xilazina (150/300 mg / kg, ip) o por inhalación de isoflurano (2%, oxígeno 1L). Si está disponible, isoflurano se debe utilizar, ya que permite un mejor control de tiempo de anestesia y profundidad. Además, el oxígeno se administra al mismo tiempo que soporta las funciones fisiológicas de los...

<ol>
	<li>Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+but+curtailed+T-cell+response+to+very+low-affinity+antigen.">Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen.</a> Nature. 458, 211-214 (2009).</li><li>Vezys, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+CD8+T-cell+compartment+grows+in+size+with+immunological+experience.">Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience.</a> Nature. 457, 196-199 (2009).</li><li>Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+persistence+of+memory+CD8(+)+T+cells+depend+on+T+cell+factor+1.">Differentiation and persistence of memory CD8(+) T cells depend on T cell factor 1.</a> Immunity. 33, 229-240 (2010).</li><li>Wirth, T. C., Badovinac, V. P., Zhao, L., Dailey, M. O., Harty, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+central+memory+CD8+T+cells+is+independent+of+CD62L-mediated+trafficking+to+lymph+nodes.">Differentiation of central memory CD8 T cells is independent of CD62L-mediated trafficking to lymph nodes.</a> J. Immunol. 182, 6195-6206 (2009).</li><li>Rooke, R., Waltzinger, C., Benoist, C., Mathis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+complementation+of+MHC+class+II+deficiency+by+intrathymic+delivery+of+recombinant+adenoviruses.">Targeted complementation of MHC class II deficiency by intrathymic delivery of recombinant adenoviruses.</a> Immunity. 7, 123-134 (1997).</li><li>Witherden, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracycline-controllable+selection+of+CD4(+)+T+cells:+half-life+and+survival+signals+in+the+absence+of+major+histocompatibility+complex+class+II+molecules.">Tetracycline-controllable selection of CD4(+) T cells: half-life and survival signals in the absence of major histocompatibility complex class II molecules.</a> J. Exp. Med. 191, 355-364 (2000).</li><li>Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+much+TCR+does+a+T+cell+need.">How much TCR does a T cell need.</a> Immunity. 15, 71-82 (2001).</li><li>Leignadier, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epitope+density+influences+CD8++memory+T+cell+differentiation.">Epitope density influences CD8+ memory T cell differentiation.</a> PLoS One. 5, e13740 (2010).</li><li>Leignadier, J., Hardy, M. P., Cloutier, M., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+T-lymphocyte+survival+does+not+require+T-cell+receptor+expression.">Memory T-lymphocyte survival does not require T-cell receptor expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20440-20445 (2008).</li><li>Obst, R., van Santen, H. M., Mathis, D., Benoist, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+persistence+is+required+throughout+the+expansion+phase+of+a+CD4(+)+T+cell+response.">Antigen persistence is required throughout the expansion phase of a CD4(+) T cell response.</a> J. Exp. Med. 201, 1555-1565 (2005).</li><li>Bassett, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T-cell+expansion+and+maintenance+after+recombinant+adenovirus+immunization+rely+upon+cooperation+between+hematopoietic+and+nonhematopoietic+antigen-presenting+cells.">CD8+ T-cell expansion and maintenance after recombinant adenovirus immunization rely upon cooperation between hematopoietic and nonhematopoietic antigen-presenting cells.</a> Blood. 117, 1146-1155 (2011).</li><li>Lacombe, M. H., Hardy, M. P., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7+receptor+expression+levels+do+not+identify+CD8++memory+T+lymphocyte+precursors+following+peptide+immunization.">IL-7 receptor expression levels do not identify CD8+ memory T lymphocyte precursors following peptide immunization.</a> J. Immunol. 175, 4400-4407 (2005).</li><li>Leignadier, J., Rooney, J., Daudelin, J. F., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lowering+TCR+expression+on+naive+CD8++T+cells+does+not+affect+memory+T-cell+differentiation.">Lowering TCR expression on naive CD8+ T cells does not affect memory T-cell differentiation.</a> Immunol. Cell. Biol. 89, 322-325 (2011).</li></ol>

Hemos descrito un protocolo de cirugía LN que puede aplicarse a muchos sistemas experimentales. Aunque es muy útil para seguir la respuesta inmune o la homeostasis de las células inmunitarias, esta técnica tiene algunas limitaciones. En primer lugar, sólo cuatro LN pueden ser cosechadas. En segundo lugar, estudió la respuesta inmune debe ser sistémica u ocurre en las inguinales superficiales o braquial (piel de drenaje) LNS. Finalmente, el número de células recolectadas se ve influida por la calidad de la elimi...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reactivo Nombre </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> Graefe Bellas Pinzas de primera calidad de patrón </td><td> Aparato de Harvard </td><td> 52-2144 </td><td> Fuertemente curvado, de 10 cm (4 pulgadas), 0,8 mm de la punta </td></tr><tr><td> Clip Michel Aplicar y eliminar Pinzas </td><td> Aparato de Harvard </td><td> 52-3779 </td><td> 12,5 cm (5 pulgadas) </td></tr><tr><td> Michel Clip 100 </td><td> Aparato de Harvard </td><td> 52-3746 </td><td> 7,5-1,75 mm </td></tr><tr><td> Temgesic (hidrocloruro de buprenorfina) </td><td> Schering-Plough </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Vetalar (clorhidrato de ketamina) </td><td> Boniche de Salud Animal </td><td></td><td> DIN: 01989529 </td></tr><tr><td> Rompun (xilazina) </td><td> Bayer </td> &lt;td&gt; </td><td> DIN: 02169592 </td></tr><tr><td> El isoflurano </td><td> ABBOTT </td><td></td><td> DIN: 02032384 </td></tr><tr><td> Hypotears pomada para los ojos </td><td> Novartis Ophtalmics </td><td></td><td> DIN: 02133288 </td></tr><tr><td> Baxedin (gluconato de clorhexidina al 2% en alcohol isopropílico al 70%) </td><td> Omega </td><td> L0000017 </td><td> DIN: 02251477 </td></tr></tbody></table>

murine superficial lymph node surgery

En el campo de la inmunología, para entender la progresión de una respuesta inmune contra una vacuna, una infección o un tumor, la respuesta es seguido a menudo con el tiempo. Del mismo modo, el estudio de la homeostasis de los linfocitos se requieren experimentos en curso. Realizar estos estudios dentro del mismo ratón es ideal para reducir la variabilidad experimental, así como el número de ratones utilizados. La extracción de sangre permite un rendimiento de experimentos de tiempo, pero sólo se da información sobre los linfocitos circulantes y proporciona un número limitado de células 1-4. Dado que los linfocitos que circulan por el cuerpo y que residen en los ganglios linfáticos tienen propiedades diferentes, es importante examinar ambas localidades. La eliminación secuencial de los ganglios linfáticos mediante cirugía ofrece una oportunidad única para seguir una respuesta inmune o la expansión de células inmunes en el mismo ratón a través del tiempo. Además, esta técnica produce entre 1-2x10 6 células por ganglio linfático que es suficiente para PErform caracterización fenotípica y / o ensayos funcionales. La cirugía secuencial de los ganglios linfáticos o linfadenectomía ha sido utilizado con éxito por nosotros y otros 5-11. Aquí se describe cómo los nódulos linfáticos inguinales braquial y se puede quitar haciendo una pequeña incisión en la piel de un ratón anestesiados. Dado que la cirugía es superficial y se hace rápidamente, el ratón se recupera muy rápidamente, cura bien y no experimenta dolor excesivo. Cada segundo día, es posible cosechar uno o dos ganglios linfáticos permitiendo experimentos de tiempo. Esta técnica es por tanto adecuado para estudiar las características de los ganglios linfáticos de linfocitos que residen en el tiempo. Este enfoque es adecuado para diferentes diseños experimentales y creemos que muchos laboratorios se beneficiarán de la realización de cirugías secuenciales de los ganglios linfáticos.

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Murine Superficial Lymph Node Surgery

Para seguir la progresión de una respuesta inmune con el tiempo dentro del mismo ratón, los ganglios linfáticos se pueden extirpar mediante cirugía secuencial. Aquí se describe cómo esta técnica se puede realizar.

Murino linfáticos superficiales Cirugía de los ganglios

In the field of immunology, to understand the progression of an immune response against a vaccine, an infection or a tumour, the response is often ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

Microscopia intravital de los ganglios linfáticos inguinales

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

Investigación

Inmunología e Infección

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Ex vivo de imágenes de células T en los ganglios linfáticos murino Rebanadas con campo amplio y microscopios confocal

Na&iuml;ve T cells continuously traffic to secondary lymphoid organs, including peripheral lymph nodes, to detect rare expressed antigens. The migration ...

Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

Imagen intravital del nodo linfático poplíteo ratón

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign ...

Generation of Lymph Node-fat Pad Chimeras for the Study of Lymph Node Stromal Cell Origin

Generación de nódulos linfáticos de grasa Pad quimeras para el Estudio del Ganglio Linfático estroma origen de célula

The stroma is a key component of the lymph node structure and function. However, little is known about its origin, exact cellular composition and the ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Aislamiento de células estromales murinas en nódulos linfáticos

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

El aislamiento de las células mieloides de ratón de la piel y el drenaje de ganglios linfáticos Siguiendo intradérmica La inmunización con viva atenuada<em&gt; Plasmodium</emLos esporozoitos&gt;

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Gu&#233;rin

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-GuÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â©rin

Un ensayo basado en CFSE para estudiar la migración de la piel murina de células dendríticas en los nodos linfáticos de drenaje durante la infección con<em&gt; Mycobacterium bovis</em&gt; Bacilo de Calmette-Guérin

Dendritic cells (DCs) are important for initiating immune responses, in part through their ability to acquire and shuttle antigen to the draining lymph ...

Murine Full-thickness Skin Transplantation

Murino de grosor completo Trasplante de Piel

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

Intracellular Staining and Flow Cytometry to Identify Lymphocyte Subsets within Murine Aorta, Kidney and Lymph Nodes in a Model of Hypertension

La tinción intracelular y citometría de flujo para identificar subconjuntos de linfocitos dentro de murino aorta, riñón y los ganglios linfáticos en un modelo de hipertensión

It is now well known that T lymphocytes play a critical role in the development of several cardiovascular diseases1,2,3,4,5. For example, studies from our ...

Collection and Processing of Lymph Nodes from Large Animals for RNA Analysis: Preparing for Lymph Node Transcriptomic Studies of Large Animal Species

Recogida y tratamiento de los ganglios linfáticos de animales grandes para el análisis de ARN: preparación para estudios de nodo de linfa transcriptómicos de grandes especies animales

Large animals (both livestock and wildlife) serve as important reservoirs of zoonotic pathogens, including Brucella, Mycobacterium bovis, Salmonella, and ...