Name: murine superficial lymph node surgery
Uploaded: 2012-05-21T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Superficial Lymph Node Surgery at JoVE.com

Vi tackar Sylvie Lesage och alla medlemmar Lab för kritisk läsning av protokollet. Detta arbete stöds av ett bidrag (MOP-77.545) från den kanadensiska Institutes of Health Research (CIHR). Nathalie Labrecque stöds av en FRSQ Senior stipendium och Melissa Mathieu mottagna en NSERC Alexander Graham Bell Kanada Graduate stipendium.

1. Förberedelser Före operationen Möss behandlades i enlighet med den kanadensiska rådet om riktlinjer Animal Care. <ol><li> Anesthetise möss genom injektion av ketamin / xylazin (150/300 mg / kg, ip) eller genom inhalation av isofluran (2%, 1 liter syre). Om sådana finns, bör isofluran användas som den möjliggör en bättre kontroll av anestesi tid och djup. Dessutom är syre administreras vid samma tidpunkt som uppbär de fysiologiska funktionerna hos djuret. Dessutom Isofluran ...

<ol>
	<li>Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+but+curtailed+T-cell+response+to+very+low-affinity+antigen.">Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen.</a> Nature. 458, 211-214 (2009).</li><li>Vezys, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+CD8+T-cell+compartment+grows+in+size+with+immunological+experience.">Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience.</a> Nature. 457, 196-199 (2009).</li><li>Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+persistence+of+memory+CD8(+)+T+cells+depend+on+T+cell+factor+1.">Differentiation and persistence of memory CD8(+) T cells depend on T cell factor 1.</a> Immunity. 33, 229-240 (2010).</li><li>Wirth, T. C., Badovinac, V. P., Zhao, L., Dailey, M. O., Harty, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+central+memory+CD8+T+cells+is+independent+of+CD62L-mediated+trafficking+to+lymph+nodes.">Differentiation of central memory CD8 T cells is independent of CD62L-mediated trafficking to lymph nodes.</a> J. Immunol. 182, 6195-6206 (2009).</li><li>Rooke, R., Waltzinger, C., Benoist, C., Mathis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+complementation+of+MHC+class+II+deficiency+by+intrathymic+delivery+of+recombinant+adenoviruses.">Targeted complementation of MHC class II deficiency by intrathymic delivery of recombinant adenoviruses.</a> Immunity. 7, 123-134 (1997).</li><li>Witherden, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracycline-controllable+selection+of+CD4(+)+T+cells:+half-life+and+survival+signals+in+the+absence+of+major+histocompatibility+complex+class+II+molecules.">Tetracycline-controllable selection of CD4(+) T cells: half-life and survival signals in the absence of major histocompatibility complex class II molecules.</a> J. Exp. Med. 191, 355-364 (2000).</li><li>Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+much+TCR+does+a+T+cell+need.">How much TCR does a T cell need.</a> Immunity. 15, 71-82 (2001).</li><li>Leignadier, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epitope+density+influences+CD8++memory+T+cell+differentiation.">Epitope density influences CD8+ memory T cell differentiation.</a> PLoS One. 5, e13740 (2010).</li><li>Leignadier, J., Hardy, M. P., Cloutier, M., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+T-lymphocyte+survival+does+not+require+T-cell+receptor+expression.">Memory T-lymphocyte survival does not require T-cell receptor expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20440-20445 (2008).</li><li>Obst, R., van Santen, H. M., Mathis, D., Benoist, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+persistence+is+required+throughout+the+expansion+phase+of+a+CD4(+)+T+cell+response.">Antigen persistence is required throughout the expansion phase of a CD4(+) T cell response.</a> J. Exp. Med. 201, 1555-1565 (2005).</li><li>Bassett, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T-cell+expansion+and+maintenance+after+recombinant+adenovirus+immunization+rely+upon+cooperation+between+hematopoietic+and+nonhematopoietic+antigen-presenting+cells.">CD8+ T-cell expansion and maintenance after recombinant adenovirus immunization rely upon cooperation between hematopoietic and nonhematopoietic antigen-presenting cells.</a> Blood. 117, 1146-1155 (2011).</li><li>Lacombe, M. H., Hardy, M. P., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7+receptor+expression+levels+do+not+identify+CD8++memory+T+lymphocyte+precursors+following+peptide+immunization.">IL-7 receptor expression levels do not identify CD8+ memory T lymphocyte precursors following peptide immunization.</a> J. Immunol. 175, 4400-4407 (2005).</li><li>Leignadier, J., Rooney, J., Daudelin, J. F., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lowering+TCR+expression+on+naive+CD8++T+cells+does+not+affect+memory+T-cell+differentiation.">Lowering TCR expression on naive CD8+ T cells does not affect memory T-cell differentiation.</a> Immunol. Cell. Biol. 89, 322-325 (2011).</li></ol>

Vi har beskrivit ett protokoll för LN operation vilka kan gälla för många experimentella system. Även mycket användbara för att följa immunsvar eller immunceller homeostas, har denna teknik ett antal begränsningar. Först kan endast fyra LNS skördas. För det andra måste immunsvaret studeras vara systemisk eller förekommer i ytliga inguinal eller brakial (hud-dränerande) LNS. Slutligen är antalet skördade celler påverkas av kvaliteten på LN bort en teknisk begränsning som kan bidra till experimentell v...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens Namn </td><td> Företaget </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Graefe fin pincett Pattern Premium </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 52-2144 </td><td> Kraftigt böjda, 10 cm (4 tum), 0,8 mm munstycke </td></tr><tr><td> Michel Clip Tillämpa och ta bort Tång </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 52-3779 </td><td> 12,5 cm (5 tum) </td></tr><tr><td> Michel Clip 100 </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 52-3746 </td><td> 7,5-1,75 mm </td></tr><tr><td> Temgesic (Buprenorfin-hydroklorid) </td><td> Schering-Plough </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Vetalar (ketamin-hydroklorid) </td><td> Boniche djurhälsovård </td><td></td><td> DIN: 01989529 </td></tr><tr><td> Rompun (xylazin) </td><td> Bayer </td> &lt;TD&gt; </td><td> DIN: 02169592 </td></tr><tr><td> Isofluran </td><td> ABBOTT </td><td></td><td> DIN: 02032384 </td></tr><tr><td> Hypotears ögonsalva </td><td> Novartis Ophtalmics </td><td></td><td> DIN: 02133288 </td></tr><tr><td> Baxedin (Clorhexidine glukonat 2% i isopropylalkohol 70%) </td><td> Omega </td><td> L0000017 </td><td> DIN: 02251477 </td></tr></tbody></table>

murine superficial lymph node surgery

Inom området för immunologi, att förstå progressionen av en immunrespons mot ett vaccin, en infektion eller en tumör, är svaret följs ofta över tiden. Likaså kräver studiet av lymfocyter homeostas försök tidsförlopp. Dessa studier inom samma mus är idealisk för att reducera den experimentella variationen liksom antalet använda möss. Blod tillbakadragande kan utföra experiment tidsförloppet för detta, men det ger endast information om cirkulerande lymfocyter och ger ett begränsat antal celler 1-4. Eftersom lymfocyter cirkulerar genom kroppen och är bosatt i lymfkörtlarna har olika egenskaper är det viktigt att undersöka båda platserna. Det sekventiella avlägsnandet av lymfkörtlar genom kirurgi ger en unik möjlighet att följa ett immunsvar eller immunceller expansion i samma mus över tiden. Vidare ger denna teknik mellan 1-2x10 6 celler per lymfkörtel som är tillräcklig för att perform Fenotypisk karakterisering och / eller funktionella analyser. Sekventiell lymfkörtel operation eller lymfkörtlar har framgångsrikt använts av oss och andra 5-11. Här beskriver vi hur brachialis och inguinala lymfknutor kan avlägsnas genom att ge ett litet snitt i huden på en anestesi mus. Eftersom operationen är ytlig och gjort snabbt återhämtar musen mycket snabbt läker bra och inte uppleva kraftigt smärta. Varannan dag, är det möjligt att skörda en eller två lymfkörtlar möjliggör experiment tidsförlopp. Denna teknik är därför lämplig att studera egenskaperna hos lymfkörtel-bor lymfocyter över tiden. Detta tillvägagångssätt är lämpligt för olika experimentella design och vi tror att många laboratorier skulle ha nytta av att utföra sekventiella operationer lymfkörtlar.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Superficial Lymph Node Surgery at JoVE.com

Murine Superficial Lymph Node Surgery

Att följa framskridandet av en immunrespons med tiden inom samma mus kan lymfkörtlar sekventiellt avlägsnas genom kirurgi. Här beskriver vi hur denna teknik kan utföras.

Murint Ytlig Lymph Node Kirurgi

In the field of immunology, to understand the progression of an immune response against a vaccine, an infection or a tumour, the response is often ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

Intravital mikroskopi av inguinal Lymph Node

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Ex vivo Imaging av T-celler i murina Slices lymfkörtel med Widefield och Confocal Mikroskop

Na&iuml;ve T cells continuously traffic to secondary lymphoid organs, including peripheral lymph nodes, to detect rare expressed antigens. The migration ...

Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

Intravital Imaging of the Mouse knäveckslymfknutas

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign ...

Generation of Lymph Node-fat Pad Chimeras for the Study of Lymph Node Stromal Cell Origin

The stroma is a key component of the lymph node structure and function. However, little is known about its origin, exact cellular composition and the ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Isolering av murint Lymph Node stromaceller

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid cellisolering från mushud och dränerande lymfkörteln Efter Intradermal immunisering med levande försvagade<em&gt; Plasmodium</em&gt; Sporozoiter

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Gu&#233;rin

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-GuÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â©rin

En CFSE-baserad analys för att studera migration av dendritiska Murin hudceller i dränerande lymfkörtlar under infektion med<em&gt; Mycobacterium bovis</em&gt; Bacille Calmette-Guerin

Dendritic cells (DCs) are important for initiating immune responses, in part through their ability to acquire and shuttle antigen to the draining lymph ...

Murine Full-thickness Skin Transplantation

Murin full tjocklek hudtransplantation

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

Intracellular Staining and Flow Cytometry to Identify Lymphocyte Subsets within Murine Aorta, Kidney and Lymph Nodes in a Model of Hypertension

Intracellulär färgning och flödescytometri för att identifiera lymfocytundergrupper inom Murina Aorta, njure och lymfkörtlar i en modell of Hypertension

It is now well known that T lymphocytes play a critical role in the development of several cardiovascular diseases1,2,3,4,5. For example, studies from our ...

Collection and Processing of Lymph Nodes from Large Animals for RNA Analysis: Preparing for Lymph Node Transcriptomic Studies of Large Animal Species

Insamling och bearbetning av lymfkörtlar från stora djur för RNA analys: förbereda för lymfkörtel Transcriptomic studier av stora djurarter

Large animals (both livestock and wildlife) serve as important reservoirs of zoonotic pathogens, including Brucella, Mycobacterium bovis, Salmonella, and ...