Name: growth assays to assess polyglutamine toxicity in yeast
Uploaded: 2012-03-05T12:00:00
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Duennwald 연구소의 작품은 노화 연구 (멀리), 유전성 질병 재단 (HDF)와 윌리엄 우드 재단에 대한 미국 연방의 보조금에 의해 지원됩니다.

1. 효모의 독성 PolyQ - 확장 단백질의 표현 체계적인 분석은 효모 7 독성을 생산하는 데 필요한 polyQ - 확장 단백질의 정확한 아미노산 서열을 확립했습니다. 이 독성 polyQ - 확장 단백질 그림을 참조 huntingtin 단백질, polyQ 지역 및 카르복시 - 터미널 융합의 원래 순서에서 형광 단백질 (GFP 또는 CFP 중 17 아미노산 뒤에 아미노 터미널 깃발 태그가 있습니다 1). inducible와 상대 ?...

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	<li>Soto, C., Estrada, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+misfolding+and+neurodegeneration.">Protein misfolding and neurodegeneration.</a> Arch. Neurol. 65, 184-189 (2008).</li><li>Ross, C. A., Tabrizi, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Huntington's+disease:+from+molecular+pathogenesis+to+clinical+treatment.">Huntington's disease: from molecular pathogenesis to clinical treatment.</a> Lancet Neurol. 10, 83-98 (2011).</li><li>Zoghbi, H. Y., Orr, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamine+repeats+and+neurodegeneration.">Glutamine repeats and neurodegeneration.</a> Annu. Rev. Neurosci. 23, 217-247 (2000).</li><li>Meriin, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocytosis+machinery+is+involved+in+aggregation+of+proteins+with+expanded+polyglutamine+domains.">Endocytosis machinery is involved in aggregation of proteins with expanded polyglutamine domains.</a> FASEB J. 21, 1915-1925 (2007).</li><li>Giorgini, F., Guidetti, P., Nguyen, Q., Bennett, C. S., Muchowski, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genomic+screen+in+yeast+implicates+kynurenine+3-monooxygenase+as+a+therapeutic+target+for+Huntington+disease.">A genomic screen in yeast implicates kynurenine 3-monooxygenase as a therapeutic target for Huntington disease.</a> Nat. Genet. 37, 526-5231 (2005).</li><li>Duennwald, M. L., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+ERAD+and+ER+stress+are+early+and+specific+events+in+polyglutamine+toxicity.">Impaired ERAD and ER stress are early and specific events in polyglutamine toxicity.</a> Genes Dev. 22, 3308-3319 (2008).</li><li>Duennwald, M. L., Jagadish, S., Muchowski, P. J., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flanking+sequences+profoundly+alter+polyglutamine+toxicity+in+yeast.">Flanking sequences profoundly alter polyglutamine toxicity in yeast.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 11045-1150 (2006).</li><li>Duennwald, M. L., Jagadish, S., Giorgini, F., Muchowski, P. J., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+network+of+protein+interactions+determines+polyglutamine+toxicity.">A network of protein interactions determines polyglutamine toxicity.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 11051-116 (2006).</li><li>Meriin, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Huntington+toxicity+in+yeast+model+depends+on+polyglutamine+aggregation+mediated+by+a+prion-like+protein+Rnq1.">Huntington toxicity in yeast model depends on polyglutamine aggregation mediated by a prion-like protein Rnq1.</a> J. Cell. Biol. 157, 997-1004 (2002).</li><li>Murakami, C., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+Yeast+Chronological+Life+Span+by+Outgrowth+of+Aged+Cells.">Quantifying Yeast Chronological Life Span by Outgrowth of Aged Cells.</a> J. Vis. Exp. (27), e1156-e1156 (2009).</li><li>Gitler, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beer+and+bread+to+brains+and+beyond:+can+yeast+cells+teach+us+about+neurodegenerative+disease.">Beer and bread to brains and beyond: can yeast cells teach us about neurodegenerative disease.</a> Neurosignals. 16, 52-62 (2008).</li><li>Giorgini, F., Muchowski, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+genetic+modifiers+of+amyloid+toxicity+in+yeast.">Screening for genetic modifiers of amyloid toxicity in yeast.</a> Methods Enzymol. 412, 201-222 (2006).</li><li>Ehrnhoefer, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+tea+(-)-epigallocatechin-gallate+modulates+early+events+in+huntingtin+misfolding+and+reduces+toxicity+in+Huntington's+disease+models.">Green tea (-)-epigallocatechin-gallate modulates early events in huntingtin misfolding and reduces toxicity in Huntington's disease models.</a> Hum. Mol. Genet. 15, 2743-2751 (2006).</li><li>Cashikar, A. G., Duennwald, M., Lindquist, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chaperone+pathway+in+protein+disaggregation.+Hsp26+alters+the+nature+of+protein+aggregates+to+facilitate+reactivation+by+Hsp104.">A chaperone pathway in protein disaggregation. Hsp26 alters the nature of protein aggregates to facilitate reactivation by Hsp104.</a> J. Biol. Chem. 280, 23869-2375 (2005).</li></ol>

본 원고는 독성 polyQ - 확장 단백질을 표현 효모 세포의 감소 성장을 바탕으로 모델 유기체 효모에 polyQ - 독성을 측정하는 세 보완적인 실험 방법을 설명합니다. 효모의 작업 polyQ - 확장 단백질 9,11,12의 misfolding과 독성을 포함한 단백질 misfolding의 기본 세포와 분자 메커니즘과 그 다음의 독성,로 심오한 통찰력을 제공하고있다. 여기에 제시된 프로토콜을 기반으로 실험은 이미 polyQ 독성 <sup...

<table border="1"><tbody><tr><td> 악기의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> Frogger (6x8 핀) </td><td> V &amp; P 과학, 샌디에고 </td><td> VP 407 AH </td></tr><tr><td> BioscreenC </td><td> Growthcurves 미국 </td><td> 5,101,370 </td></tr><tr><td> 100 잘 허니컴 접시 </td><td> Growthcurves 미국 </td><td> 9,602,550 </td></tr></tbody></table>

growth assays to assess polyglutamine toxicity in yeast

단백질 misfolding 같은 알츠하이머 질환, 파킨슨병과 헌팅턴의 질병과 한 많은 인간의 질병, 특히 neurodegenerative 질병과 연관됩니다. 헌팅턴의 질병 (HD)은 단백질 huntingtin 이내 polyglutamine (polyQ) 지역의 비정상적인 확대로 인해 발생합니다. polyQ - 확장된 huntingtin 단백질이 비정상적 형태 (즉, 그것이 misfolds)을 attains 및 세포 독성에게 2를 일으 킵니다. 적어도 8 이상 neurodegenerative 질병은 Spinocerebellar Ataxias과 케네디의 질병 3를 포함해 polyQ - 확장에 의해 발생합니다. 모델 생물 효모는 polyQ - 확장을 표현 polyQ - 독성의 내부와 남북 분자 요인의 영향, 그리고 세포에 손상되는 세포 경로의 식별을 포함하여 polyQ - 독성의 세포 및 분자 기초에 중대한 통찰력을 촉진하고있다 단백질 3-8. 중요단조는 효모에서 발견된 polyQ - 독성의 여러 측면 따라서 polyQ - 독성 underpinning 기본적인 메커니즘의 발견을위한 효모 모델의 중요성을 보여주는 다른 실험적인 시스템에서와 HD 환자에서 샘플에 어느 정도까지 재현했다. 효모에 polyQ - 독성을 결정하는 직접적이고 비교적 간단한 방법 polyQ - 확장 단백질을 표현 효모 세포의 성장 결함을 측정하는 것입니다. 본 원고는 polyQ - 확장 단백질을 표현 효모 세포의 성장을 측정하여 효모에 polyQ - 독성을 결정하는 세 보완 실험적인 접근 방법을 설명합니다. 처음 두 실험 방법은 접시에 효모의 성장을 모니터링, 세 번째 접근법은 BioscreenC 악기를 사용하여 액체 효모 문화의 성장을 모니터링합니다. 또한이 원고는 효모 polyQ 모델을 다룰 때 발생할 수있는 실험적인 어려움을 설명하고 또는 피하기 위해 도움이 될 전략을 보여줍니다이러한 어려움을 최소화합니다. 여기에 설명된 프로토콜 식별 및 유전 경로 및 polyQ - 독성을 조절 작은 분자를 특성화하는 데 사용할 수 있습니다. 또한, 설명 assays는 효모 모델의 다른 질병 관련 misfolded 단백질에 의한 독성의 정확한 분석을위한 템플릿으로 사용될 수 있습니다.

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Growth Assays to Assess Polyglutamine Toxicity in Yeast

본 원고는 효모에 polyglutamine의 독성 (polyQ) - 확장 단백질을 평가 삼 보완적인 프로토콜을 설명합니다<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;. 이러한 프로토콜은 쉽게 효모의 다른 misfolded 단백질의 독성을 모니터링하기 위해 수정할 수 있습니다.

성장 Assays은 효모에서 Polyglutamine 독성을 평가하기 위해

Protein misfolding is associated with many human diseases, particularly neurodegenerative diseases, such as Alzheimer&#x2019;s disease, Parkinson's ...

Research

JoVE Journal

Biology

Identification of Growth Inhibition Phenotypes Induced by Expression of Bacterial Type III Effectors in Yeast

성장 저해 Phenotypes의 확인은 효모에서 세균의 종류 III Effectors 표현에 의해 유도된

Many Gram-negative pathogenic bacteria use a type III secretion system to translocate a suite of effector proteins into the cytosol of host cells. Within ...

연구

생물학

Modified Yeast-Two-Hybrid System to Identify Proteins Interacting with the Growth Factor Progranulin

성장 팩터 Progranulin와 상호 작용하는 단백질을 식별하기 위해 수정된 효모 - 2 하이브리드 시스템

Progranulin (PGRN), also known as granulin epithelin precursor (GEP), is a 593-amino-acid autocrine growth factor. PGRN is known to play a critical role ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

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갑각류와 장기 치명적인 독성 시험 Artemia franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

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방법은 근육의 세포 내 구획을 평가하기 위해<em&gt; C. 엘레</em

Muscle is a dynamic tissue that responds to changes in nutrition, exercise, and disease state. The loss of muscle mass and function with disease and age ...

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Growth phenotypes of microorganisms are a strong indicator of their underlying genetic fitness and can be segregated into 3 growth regimes: lag-phase, ...

Effect of Fluorescent Proteins on Fusion Partners Using Polyglutamine Toxicity Assays in Yeast

효 모에 Polyglutamine 독성 분석 실험을 사용 하 여 퓨전 파트너에 형광 단백질의 영향

For the investigation of protein localization and trafficking using live cell imaging, researchers often rely on fusing their protein of interest to a ...

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

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매체-처리량에 캘리포니아2 +효과의 평가 대 한 분석 실험을 심사-신호 및 인간의 정자에서 Acrosome 반응

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm ...

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

형광 라이브 세포 현미경 검사법에 의한 미토틱 및 Meiotic 핵분열 효모 핵 역학의 검사

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...