Name: pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes
Uploaded: 2012-02-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes at JoVE.com

De auteurs danken de Howard Hughes Medical Institute voor een UF Science for Life Award voor AH

1. Voorbereiden van de cassettes <ol><li> Schoon voor-en achterkant platen van een gebruikte Invitrogen Nupage Novex MiniGel cassette, of andere commerciële MiniGel cassette. </li><li> Bereid ongeveer 1-3 ml kunststof epoxy en meng goed volgens de instructies van de fabrikant. </li><li> Breng de epoxy aan de binnenzijde van de voorplaat, waarbij de beide platen in aanraking komen, wanneer de cassette is gemonteerd. </li><li> Schuif een stuk filtreerpapier of karton door de bodem spleet van de achterplaat montage van ...

<ol>
	<li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4.">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227, 680-685 (1970).</li><li>Raymond, S., Weintraub, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acrylamide+gel+as+a+supporting+medium+for+zone+electrophoresis.">Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis.</a> Science. 130, 711-711 (1959).</li><li>Sch&#228;gger, H., von Jagow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricine-sodium+dodecyl+sulfate-polyacrylamide+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+proteins+in+the+range+from+1+to+100+kDa.">Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa.</a> Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).</li><li>Shapiro, A. L., Vi&#241;uela, E., Maizel, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+weight+estimation+of+polypeptide+chains+by+electrophoresis+in+SDS-polyacrylamide+gels.">Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).</li></ol>

Protein gel electroforese een onmisbaar methode voor de meeste laboratoria moleculaire biologie. In de handel verkrijgbare minigels bieden een hoge mate van gemak, maar kan kostbaar zijn. Hier laten we zien hoe de MiniGel cassettes van een populair merk in de handel verkrijgbare minigels opnieuw te gebruiken. Deze methode houdt het gemak van een kant en klaar bron van gels, maar een fractie van de kosten van commercieel beschikbare minigels. Een belangrijke stap in de procedure wordt de toepassing van de juiste hoeveelh...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Invitrogen Nupage Novex MiniGel Cassette (1,0 mm) </td><td> Invitrogen </td><td> NC2010 </td><td> In 2, 5, 10, 12, 15 en 2D putten </td></tr><tr><td> Plastic Epoxy </td><td> Loctite </td><td> 108771 </td><td></td></tr><tr><td> Elektrische Tape </td><td> Scotch </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 125 ml zijarm fles </td><td> Pyrex </td><td> 5360 </td><td></td></tr><tr><td> 4X Tris-Base het oplossen gel buffer </td><td></td><td></td><td> 1,5 M Tris-base pH 8,7 </td></tr><tr><td> acrylamide </td><td> Fisher Scientific </td><td> 01065-500 </td><td></td></tr><tr><td> Bis-acrylamide </td><td> MP Biomedicals Inc </td><td> 800173 </td><td></td></tr><tr><td> 30,8% acrylamide oplossing </td><td></td><td></td><td> 30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H 2 O </td></tr><tr><td> 10% APS </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP179-25 </td><td> 0,1 g ammoniumpersulfaat in 1 ml IRG-H 2 O onmiddellijk vóór gebruik </td></tr><tr><td> TEMED </td><td> Arcos Organics </td><td> 138450500 </td><td></td></tr><tr><td> 1-butanol verzadigd met 1X het oplossen gel buffer </td><td></td><td></td><td> 05:02 1-butanol tot 1X het oplossen gel buffer </td></tr><tr><td> 4X Tris-base stackinggel buffer </td><td></td><td></td><td> 1,5 M Tris-base pH 6,8 </td></tr><tr><td> Gel kam </td><td> Invitrogen </td><td> NC3015 </td><td> 15 goed, 1,0 mm dik </td></tr><tr><td> Impulse Sealer </td><td> TEW Elektrische Verwarming Equipment </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Warmte Verzegelbare Pouch </td><td> Kapak / Scotchpak </td><td></td><td> 1 pint maat (6,5 &#39;x 8 &quot;) </td></tr><tr><td> Gel opslagbuffer </td><td></td><td></td><td> 1X stackinggel buffer met 0,1% natriumazide </td></tr><tr><td> Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X) </td><td> Invitrogen </td><td> LC2676 </td><td></td></tr><tr><td> DTT </td><td> FisherBiotech </td><td> BP172-5 </td><td></td></tr><tr><td> 10X Tris-Gylcine loopbuffer </td><td> Invitrogen </td><td> LC2675 </td><td> 1L van 10X stock: 29,0 g Tris-Base, 144,0 g Glycine, 10,0 g SDS </td></tr><tr><td> XCell SureLock Mini-Cell </td><td> Invitrogen </td><td> EI0001 </td><td></td></tr><tr><td> Gel Knife </td><td> Invitrogen </td><td> EI9010 </td><td></td></tr><tr><td> SimplyBlue Veilig Stain </td><td> Invitrogen </td><td> LC6065 </td&gt; <td></td></tr></tbody></table>

pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes

De evaluatie van eiwitten met natriumdodecylsulfaat-polyacrylamide-gelelektroforese (SDS-PAGE) analyse een techniek die door biochemie en moleculaire biologie onderzoekers 1-4. Voor laboratoria die de dagelijkse analyses van eiwitten uit te voeren, kunnen de kosten van in de handel verkrijgbare polyacrylamidegels (~ $ 10/gel) aanzienlijk zijn in de tijd. Om deze kosten te beperken, sommige onderzoekers bereiden hun eigen polyacrylamide gels. Traditionele methoden van het gieten van deze gels meestal gebruik maken van gespecialiseerde apparatuur en glas gel platen die kunnen duur zijn en weg te gieten veel gels en op te slaan voor toekomstig gebruik. Bovendien kan de behandeling van glazen platen bij het schoonmaken of gel gieten resulteren in een onvoorziene breuk het creëren van een gevaar voor de veiligheid, waarin het gebruik ervan kan zich verzetten tegen in undergraduate laboratorium klassen. Ons protocol legt uit hoe meerdere eiwitten tegelijk gels giet door recycling Invitrogen Nupage Novex MiniGel cassettes, en goedkoop materialen gekocht bij een bouwmarkt te vinden. Deze voordelige gestroomlijnd werkwijze omvat een manier om de gels bewaren bij 4 ° C gedurende enkele weken. Door hergebruik van kunststof gel cassettes uit de handel verkrijgbare gels, laboratoria dat frequent eiwit gels draaien kan besparen aanzienlijke kosten en help het milieu. Daarnaast plastic gel cassettes zijn uitermate bestand tegen breuk, waardoor ze ideaal zijn voor undergraduate laboratorium klaslokalen.

Watch this Scientific Journal Video about Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes at JoVE.com

Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes

Ons protocol legt uit hoe meerdere eiwitten gels gieten in een tijd van recycling Invitrogen Nupage Novex MiniGel cassettes, en goedkope materialen die zijn aangeschaft bij een bouwmarkt te vinden. Deze voordelige gestroomlijnd werkwijze omvat een manier om de gels bewaren bij 4 ° C gedurende enkele weken. Door hergebruik van kunststof gel cassettes uit de handel verkrijgbare gels, laboratoria dat frequent eiwit gels draaien kan besparen aanzienlijke kosten en help het milieu.

Gieten en runnen van een eiwitgel door hergebruik van Commercial Cassettes

The evaluation of proteins using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis is a common technique used by biochemistry ...

Research

JoVE Journal

Biology

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE)

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis DGGE

Denaturerende gradiënt Gel Elektroforese (DGGE)

Screening for Amyloid Aggregation by Semi-Denaturing Detergent-Agarose Gel Electrophoresis

Screening op Amyloid Aggregation door semi-denaturerende Detergent-agarosegelelektroforese

Amyloid aggregation is associated with numerous protein misfolding pathologies and underlies the infectious properties of prions, which are ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Kleuring van eiwitten in Gels met Coomassie G-250 zonder organisch oplosmiddel en azijnzuur

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

Met behulp van de GELFREE 8100 Fractionering System for Molecular Weight-Based Fractionering met Liquid Phase Recovery

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

Isolatie van labiele Multi-eiwit-complexen door In vivo Gecontroleerde Cellulaire Cross-Linking and Immuno-magnetische affiniteitschromatografie

The dynamic nature of cellular machineries is frequently built on transient and/or weak protein associations. These low affinity interactions preclude ...

Orthogonal Protein Purification Facilitated by a Small Bispecific Affinity Tag

Orthogonale Protein Purification Gesteund door een Small Bispecifieke Affiniteit Tag

Due to the high costs associated with purification of recombinant proteins the protocols need to be rationalized. For high-throughput efforts there is a ...

Improving the Success Rate of Protein Crystallization by Random Microseed Matrix Screening

Het verbeteren van de slaagkans van eiwitkristallisatie door Random Microseed Matrix Screening

Random microseed matrix screening  (rMMS) is a protein crystallization technique in which seed crystals are added  to random screens. By increasing the ...

Protein-protein Interactions Visualized by Bimolecular Fluorescence Complementation in Tobacco Protoplasts and Leaves

Eiwit-eiwit interacties gevisualiseerd door Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie in Protoplasten en Bladeren Tabak

Many proteins interact transiently with other proteins or are integrated into multi-protein complexes to perform their biological function. Bimolecular ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-dimensionale Tracking van hematopoietische stamcellen en progenitorcellen in volwassen muis calvarial Bone Marrow

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Green Fluorescent Protein gebaseerd Expression Screening van membraaneiwitten in<em&gt; Escherichia coli</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...