Name: pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes
Uploaded: 2012-02-12T14:00:00
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Les auteurs tiennent à remercier l&#39;Institut médical Howard Hughes pour une science UF pour l&#39;attribution de la vie à AH

1. Préparation des cassettes <ol><li> Avant et arrière Clean plaques d&#39;un employé Invitrogen NuPAGE cassette de Novex minigel, ou d&#39;autres cassettes minigel commerciale. </li><li> Préparer ml environ 1-3 de plastique époxy et bien mélanger selon les instructions du fabricant. </li><li> Appliquer la résine époxy à l&#39;arête intérieure de la plaque avant, où les deux plaques ne viennent en contact lorsque la cassette est assemblé. </li><li> Coulisser un morceau de papier filtre ou de carton à tra...

<ol>
	<li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4.">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227, 680-685 (1970).</li><li>Raymond, S., Weintraub, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acrylamide+gel+as+a+supporting+medium+for+zone+electrophoresis.">Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis.</a> Science. 130, 711-711 (1959).</li><li>Sch&#228;gger, H., von Jagow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricine-sodium+dodecyl+sulfate-polyacrylamide+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+proteins+in+the+range+from+1+to+100+kDa.">Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa.</a> Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).</li><li>Shapiro, A. L., Vi&#241;uela, E., Maizel, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+weight+estimation+of+polypeptide+chains+by+electrophoresis+in+SDS-polyacrylamide+gels.">Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).</li></ol>

Électrophorèse sur gel des protéines est une méthode indispensable pour les laboratoires de biologie moléculaire les plus. Minigels disponibles dans le commerce de fournir un niveau élevé de confort, mais peuvent être coûteux. Ici, nous montrons comment réutiliser les cassettes MiniGel à partir d&#39;une marque populaire de minigels disponibles dans le commerce. Cette méthode conserve la commodité d&#39;avoir une source prête à l&#39;emploi de gels, mais à une fraction du coût de minigels disponibles da...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom de réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Invitrogen NuPAGE Novex minigel cassette (1,0 mm) </td><td> Invitrogen </td><td> NC2010 </td><td> Disponible en 2, 5, 10, 12, 15 et 2D puits </td></tr><tr><td> Epoxy plastique </td><td> Loctite </td><td> 108771 </td><td></td></tr><tr><td> Ruban électrique </td><td> Scotch </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 125 ml flacon bras latéral </td><td> Pyrex </td><td> 5360 </td><td></td></tr><tr><td> 4X Tris-Base gel de résolution du tampon </td><td></td><td></td><td> 1,5 M Tris-base pH 8,7 </td></tr><tr><td> acrylamide </td><td> Fisher Scientific </td><td> 01065-500 </td><td></td></tr><tr><td> Bis-acrylamide </td><td> MP Biomedicals, Inc </td><td> 800173 </td><td></td></tr><tr><td> Solution d&#39;acrylamide 30,8% </td><td></td><td></td><td> 30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide dans les GRI-H 2 O </td></tr><tr><td> APS 10% </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP179-25 </td><td> 0,1 g de persulfate d&#39;ammonium dans 1 ml O GRI-H 2, préparée immédiatement avant utilisation </td></tr><tr><td> TEMED </td><td> Organics Arcos </td><td> 138450500 </td><td></td></tr><tr><td> 1-butanol saturé avec un tampon 1X gel de résolution </td><td></td><td></td><td> 05:02 1-butanol à 1X gel de résolution du tampon </td></tr><tr><td> 4X Tris-Base tampon de gel d&#39;empilement </td><td></td><td></td><td> 1,5 M Tris-base pH 6,8 </td></tr><tr><td> Gel peigne </td><td> Invitrogen </td><td> NC3015 </td><td> 15 bien, 1,0 mm d&#39;épaisseur </td></tr><tr><td> Scellant Impulse </td><td> Equipement TEW Chauffage électrique </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pochette de chaleur plombable </td><td> Kapak / Scotchpak </td><td></td><td> 1 taille pinte (6,5 &quot;x 8&quot;) </td></tr><tr><td> Tampon de stockage Gel </td><td></td><td></td><td> 1X tampon de gel d&#39;empilement avec de l&#39;azoture de sodium à 0,1% </td></tr><tr><td> Novex SDS tampon d&#39;échantillon Tris-Glycine (2X) </td><td> Invitrogen </td><td> LC2676 </td><td></td></tr><tr><td> TNT </td><td> FisherBiotech </td><td> BP172-5 </td><td></td></tr><tr><td> 10X tampon de migration Tris-Gylcine </td><td> Invitrogen </td><td> LC2675 </td><td> 1L de bouillon 10X: 29,0 g de Tris-Base, 144,0 g de glycine, 10,0 g de SDS </td></tr><tr><td> XCell SureLock Mini-Cell </td><td> Invitrogen </td><td> EI0001 </td><td></td></tr><tr><td> Couteau Gel </td><td> Invitrogen </td><td> EI9010 </td><td></td></tr><tr><td> SimplyBlue Safe Stain </td><td> Invitrogen </td><td> LC6065 </td&gt; <td></td></tr></tbody></table>

pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes

L&#39;évaluation des protéines à l&#39;aide de sodium dodécyl polyacrylamide gel de sulfate de l&#39;électrophorèse (SDS-PAGE) l&#39;analyse est une technique couramment utilisée par les chercheurs en biologie moléculaire et de biochimie 1-4. Pour les laboratoires qui effectuent des analyses quotidiennes de protéines, le coût de gels de polyacrylamide disponibles dans le commerce (~ $ 10/gel) peuvent être considérables au fil du temps. Pour atténuer ce coût, certains chercheurs à préparer leurs propres gels de polyacrylamide. Les méthodes traditionnelles de verser ces gels utilisent généralement l&#39;équipement spécialisé et des plaques de gel de verre qui peuvent être coûteux et s&#39;oppose versant gels de nombreuses et de les stocker pour une utilisation future. En outre, la manipulation de plaques de verre pendant le nettoyage ou le gel versant peut se traduire par un bris accidentel de créer un danger pour la sécurité, ce qui peut empêcher leur utilisation dans les classes de premier cycle en laboratoire. Notre protocole montre comment verser gels de protéines multiples simultanément par recyclage Invitrogen cassettes NuPAGE MiniGel Novex, et peu coûteux mariaux achetés à un magasin de rénovation domiciliaire. Cette méthode économique et rationalisé comprend un moyen de stocker les gels à 4 ° C pendant quelques semaines. En réutilisant les cassettes de gel en plastique à partir de gels disponibles dans le commerce, les laboratoires qui exécutent des gels de protéine fréquents peuvent réduire les coûts importants et aider l&#39;environnement. En outre, cassettes de gel en plastique sont extrêmement résistants à la rupture, ce qui les rend idéal pour les salles de classe en laboratoire de premier cycle.

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Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes

Notre protocole montre comment verser gels de protéines multiples à la fois par le recyclage Invitrogen cassettes NuPAGE MiniGel Novex, et des matériaux peu coûteux achetés dans un magasin de rénovation domiciliaire. Cette méthode économique et rationalisé comprend un moyen de stocker les gels à 4 ° C pendant quelques semaines. En réutilisant les cassettes de gel en plastique à partir de gels disponibles dans le commerce, les laboratoires qui exécutent des gels de protéine fréquents peuvent réduire les coûts importants et aider l&#39;environnement.

Verser et exécution d&#39;un gel de protéine en réutilisant Cassettes commerciaux

The evaluation of proteins using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis is a common technique used by biochemistry ...

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Électrophorèse sur gel dénaturant Dégradé (DGGE)

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