Name: pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes
Uploaded: 2012-02-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes at JoVE.com

המחברים מודים הווארד יוז רפואי במכון למדע UF לפרס החיים על AH

1. הכנת קלטות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מול נקי ובחזרה צלחות קלטת שימוש Invitrogen Nupage minigel Novex או minigel אחר קלטת מסחרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכין 1-3 מ&quot;ל של כ אפוקסי פלסטיק ומערבבים היטב על פי הוראות היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל אפוקסי...

<ol>
	<li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4.">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227, 680-685 (1970).</li><li>Raymond, S., Weintraub, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acrylamide+gel+as+a+supporting+medium+for+zone+electrophoresis.">Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis.</a> Science. 130, 711-711 (1959).</li><li>Sch&#228;gger, H., von Jagow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricine-sodium+dodecyl+sulfate-polyacrylamide+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+proteins+in+the+range+from+1+to+100+kDa.">Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa.</a> Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).</li><li>Shapiro, A. L., Vi&#241;uela, E., Maizel, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+weight+estimation+of+polypeptide+chains+by+electrophoresis+in+SDS-polyacrylamide+gels.">Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).</li></ol>

ג&#39;ל אלקטרופורזה חלבון היא שיטה הכרחית עבור מעבדות ביולוגיה מולקולרית ביותר. Minigels זמינים מסחרית לספק רמה גבוהה של נוחות, אבל יכול להיות יקר. כאן אנו מראים כיצד לעשות שימוש חוזר בקלטות minigel של המותג הפופולרי של minigels זמינים מסחרית. שיטה זו שומרת על הנוחות של בעל מקור המ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Invitrogen Nupage Novex Minigel קלטת (1.0 מ&quot;מ) </td><td> Invitrogen </td><td> NC2010 </td><td> ניתן להשיג 2, 5, 10, 12, 15 ו - 2 ד בארות </td></tr><tr><td> פלסטיק אפוקסי </td><td> Loctite </td><td> 108771 </td><td></td></tr><tr><td> חשמל Tape </td><td> סקוטש </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 125 מ&quot;ל הזרוע בצד הבקבוק </td><td> פיירקס </td><td> 5360 </td><td></td></tr><tr><td> 4X-טריס בסיס פתרון של מאגר ג&#39;ל </td><td></td><td></td><td> 1.5 מ &#39;טריס בסיס pH 8.7 </td></tr><tr><td> acrylamide </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 01065-500 </td><td></td></tr><tr><td> BIS-acrylamide </td><td> Biomedicals מגה פיקסל, Inc </td><td> 800173 </td><td></td></tr><tr><td> Acrylamide 30.8% הפתרון </td><td></td><td></td><td> 30:0.8 acrylamide: BIS-acrylamide ב IRG-H 2 O </td></tr><tr><td> 10% APS </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> BP179-25 </td><td> 0.1 persulfate גרם אמוניום ב 1 מ&quot;ל IRG-H 2 O, מוכנים מיד לפני השימוש </td></tr><tr><td> TEMED </td><td> Arcos Organics </td><td> 138450500 </td><td></td></tr><tr><td> 1-butanol רווי חיץ ג&#39;ל פתרון של 1X </td><td></td><td></td><td> 05:02 1-butanol למאגר 1X ג&#39;ל פתרון של </td></tr><tr><td> ג&#39;ל טריס 4X-Base לערום חיץ </td><td></td><td></td><td> 1.5 מ &#39;טריס בסיס pH 6.8 </td></tr><tr><td> ג&#39;ל מסרק </td><td> Invitrogen </td><td> NC3015 </td><td> 15 ובכן, 1.0 מ&quot;מ עובי </td></tr><tr><td> הדחף אוטם </td><td> TEW אלקטריק ציוד חימום </td><td></td><td></td></tr><tr><td> פאוץ סגר חום </td><td> Kapak / Scotchpak </td><td></td><td> 1 ליטר בגודל (6.5 &quot;x 8&quot;) </td></tr><tr><td> ג&#39;ל למאגר אחסון </td><td></td><td></td><td> 1X לערום חיץ ג&#39;ל עם אזיד הנתרן 0.1% </td></tr><tr><td> Novex SDS טריס-גליצין מדגם חיץ (2X) </td><td> Invitrogen </td><td> LC2676 </td><td></td></tr><tr><td> DTT </td><td> FisherBiotech </td><td> BP172-5 </td><td></td></tr><tr><td> ריצה 10X טריס-Gylcine חיץ </td><td> Invitrogen </td><td> LC2675 </td><td> 1 ליטר של המניה 10X: 29.0 גרם טריס-Base, 144.0 גרם גליצין, 10.0 גרם SDS </td></tr><tr><td> XCell SureLock Mini-Cell </td><td> Invitrogen </td><td> EI0001 </td><td></td></tr><tr><td> ג&#39;ל סכין </td><td> Invitrogen </td><td> EI9010 </td><td></td></tr><tr><td> SimplyBlue בטוח כתמים </td><td> Invitrogen </td><td> LC6065 </tד&gt; <td></td></tr></tbody></table>

pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes

הערכה של חלבונים באמצעות סולפט dodecyl נתרן polyacrylamide ג&#39;ל אלקטרופורזה (SDS-PAGE) ניתוח היא טכניקה נפוצה בשימוש על ידי חוקרים לביוכימיה וביולוגיה מולקולרית 1-4. עבור מעבדות המבצעות בדיקות יומיות של חלבונים, העלות של ג&#39;ל polyacrylamide זמינים מסחרית (~ $ 10/gel) יכול להיות משמעותי לאורך זמן. כדי להקטין את העלות, כמה חוקרים להכין ג&#39;ל שלהם polyacrylamide. השיטות המסורתיות של לשפוך את הג&#39;לים בדרך כלל לנצל ציוד מיוחד ו ג &#39;ל זכוכית צלחות כי יכול להיות יקר למנוע לשפוך ג&#39;ל רבים ואחסונם לשימוש עתידי. יתר על כן, טיפול של לוחות הזכוכית במהלך ניקוי או ג&#39;ל לשפוך יכול לגרום שבירה בשוגג יצירת מפגע בטיחותי, אשר עשוי למנוע את השימוש בהם בשיעורי מעבדה לתואר ראשון. פרוטוקול שלנו מדגים כיצד לשפוך ג&#39;ל חלבונים רבים בו זמנית על ידי מיחזור Invitrogen Nupage קלטות Novex minigel, ותואר שני זולterials לרכוש בחנות שיפוץ הבית. שיטה זו חסכונית יעילה כולל דרך לאחסן את הג&#39;לים על 4 מעלות צלזיוס במשך כמה שבועות. על ידי מחדש באמצעות קלטות ג&#39;ל פלסטיק של ג&#39;ל זמינים מסחרית, מעבדות הפועלות ג&#39;ל חלבון תכופים יכול לחסוך בעלויות משמעותיות לעזור לסביבה. בנוסף, קלטות ג&#39;ל פלסטיק עמידים מאוד שבירה, מה שהופך אותם אידיאליים עבור כיתות מעבדה לתואר ראשון.

Watch this Scientific Journal Video about Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes at JoVE.com

Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes

פרוטוקול שלנו מדגים כיצד למזוג ג &#39;ל חלבון מרובים בכל פעם על ידי מיחזור Invitrogen Nupage קלטות Novex minigel וחומרים זולים שנרכשו בחנות שיפוץ הבית. שיטה זו חסכונית יעילה כולל דרך לאחסן את הג&#39;לים על 4 מעלות צלזיוס במשך כמה שבועות. על ידי מחדש באמצעות קלטות ג&#39;ל פלסטיק של ג&#39;ל זמינים מסחרית, מעבדות הפועלות ג&#39;ל חלבון תכופים יכול לחסוך בעלויות משמעותיות לעזור לסביבה.

לשפוך והפעלה Gel חלבון על ידי שימוש חוזר קלטות מסחריים

The evaluation of proteins using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis is a common technique used by biochemistry ...

Research

JoVE Journal

Biology

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE)

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis DGGE

Denaturing ג&#39;ל אלקטרופורזה Gradient (DGGE)

Screening for Amyloid Aggregation by Semi-Denaturing Detergent-Agarose Gel Electrophoresis

הקרנת עבור צבירת עמילואיד על ידי חצי Denaturing אלקטרופורזה דטרגנט-agarose ג&#39;ל

Amyloid aggregation is associated with numerous protein misfolding pathologies and underlies the infectious properties of prions, which are ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

הכתמה של חלבונים עם ג&#39;ל Coomassie G-250 ללא חומצה אצטית ממס אורגני

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

באמצעות מערכת GELFREE 8100 ההיפוך חלוקה על ההיפוך חלוקה משקל מבוסס מולקולרית עם שלב החילוץ נוזלי

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

בידוד יציב Multi-חלבון על ידי תסביכים In vivo מבוקר נייד חוצה קישור חיסונית מגנטי כרומטוגרפיה זיקה

The dynamic nature of cellular machineries is frequently built on transient and/or weak protein associations. These low affinity interactions preclude ...

Orthogonal Protein Purification Facilitated by a Small Bispecific Affinity Tag

חלבון טיהור אורתוגונלית בהנחיית תג זיקה קטנים Bispecific

Due to the high costs associated with purification of recombinant proteins the protocols need to be rationalized. For high-throughput efforts there is a ...

Improving the Success Rate of Protein Crystallization by Random Microseed Matrix Screening

שיפור שיעור ההצלחה של התגבשות חלבון על ידי Microseed מטריקס אקראי הקרנה

Random microseed matrix screening  (rMMS) is a protein crystallization technique in which seed crystals are added  to random screens. By increasing the ...

Protein-protein Interactions Visualized by Bimolecular Fluorescence Complementation in Tobacco Protoplasts and Leaves

חלבונים אינטראקציות דמיינו ידי bimolecular הקרינה complementation בProtoplasts הטבק ועלים

Many proteins interact transiently with other proteins or are integrated into multi-protein complexes to perform their biological function. Bimolecular ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

הקרנה ירוקה פלורסנט מבוסס חלבון ביטוי של החלבונים ממברנה ב<em&gt; Coli Escherichia</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...