Name: pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes
Uploaded: 2012-02-12T14:00:00
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लेखकों मुख्यालय हॉवर्ड ह्यूजेस मेडिकल इंस्टीट्यूट जीवन पुरस्कार के लिए एक UF विज्ञान के लिए धन्यवाद

1. कैसेट की तैयारी <ol><li> साफ़ सामने और एक प्रयोग किया Invitrogen Nupage NOVEX minigel कैसेट, या अन्य वाणिज्यिक minigel के कैसेट की प्लेटें वापस. </li><li> प्लास्टिक epoxy के लगभग 1-3 मिलीग्राम तैयार और निर्माता के निर्देशों के अनुसार मिश्रण...

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	<li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4.">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227, 680-685 (1970).</li><li>Raymond, S., Weintraub, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acrylamide+gel+as+a+supporting+medium+for+zone+electrophoresis.">Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis.</a> Science. 130, 711-711 (1959).</li><li>Sch&#228;gger, H., von Jagow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricine-sodium+dodecyl+sulfate-polyacrylamide+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+proteins+in+the+range+from+1+to+100+kDa.">Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa.</a> Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).</li><li>Shapiro, A. L., Vi&#241;uela, E., Maizel, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+weight+estimation+of+polypeptide+chains+by+electrophoresis+in+SDS-polyacrylamide+gels.">Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).</li></ol>

प्रोटीन जेल वैद्युतकणसंचलन सबसे आणविक जीव विज्ञान प्रयोगशालाओं के लिए एक अनिवार्य विधि है. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध minigels सुविधा के एक उच्च स्तर प्रदान करते हैं, लेकिन महंगा हो सकता है. यहां हम बताते है?...

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक का नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूचीपत्र संख्या </td><td> टिप्पणियाँ </td></tr><tr><td> Invitrogen Nupage NOVEX Minigel कैसेट (1.0 मिमी) </td><td> Invitrogen </td><td> NC2010 </td><td> 2, 5, 10, 12, 15, और 2 डी कुओं में उपलब्ध </td></tr><tr><td> प्लास्टिक Epoxy </td><td> लॉकटाइट </td><td> 108,771 </td><td></td></tr><tr><td> बिजली के टेप </td><td> स्कॉच </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 125 एमएल की ओर हाथ कुप्पी </td><td> Pyrex </td><td> 5360 </td><td></td></tr><tr><td> 4X Tris बेस हल जेल बफर </td><td></td><td></td><td> 1.5 एम Tris आधार 8.7 पीएच </td></tr><tr><td> acrylamide </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 01065-500 </td><td></td></tr><tr><td> बीआईएस - acrylamide </td><td> सांसद Biomedicals, Inc </td><td> ८००१७३ </td><td></td></tr><tr><td> 30.8% acrylamide समाधान </td><td></td><td></td><td> : 30:0.8 acrylamide IRG एच 2 हे में बीआईएस acrylamide </td></tr><tr><td> 10% ए पी एस </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> BP179 - 25 </td><td> 1 मिलीग्राम IRG एच 2 हे में 0.1 ग्राम अमोनियम persulfate, उपयोग से पहले तुरंत तैयार </td></tr><tr><td> TEMED </td><td> आर्कोस ऑर्गेनिक्स </td><td> 138450500 </td><td></td></tr><tr><td> 1 - butanol 1X हल जेल बफर के साथ संतृप्त </td><td></td><td></td><td> 05:02 1X हल जेल बफर 1 butanol </td></tr><tr><td> 4X Tris बेस स्टैकिंग जेल बफर </td><td></td><td></td><td> 1.5 एम Tris आधार 6.8 पीएच </td></tr><tr><td> जेल कंघी </td><td> Invitrogen </td><td> NC3015 </td><td> 15 अच्छी तरह से, 1.0 मिमी मोटाई </td></tr><tr><td> आवेग मुहर </td><td> TEW इलेक्ट्रिक हीटिंग उपकरण </td><td></td><td></td></tr><tr><td> गर्मी sealable पाउच </td><td> / Kapak Scotchpak है </td><td></td><td> 1 पिंट आकार (6.5 &quot;x 8&quot;) </td></tr><tr><td> जेल भंडारण बफर </td><td></td><td></td><td> 1X 0.1% सोडियम azide के साथ जेल बफर स्टैकिंग </td></tr><tr><td> NOVEX एसडीएस Tris-Glycine नमूना बफर (2x) </td><td> Invitrogen </td><td> LC2676 </td><td></td></tr><tr><td> डीटीटी </td><td> FisherBiotech </td><td> BP172 - 5 </td><td></td></tr><tr><td> 10X रनिंग बफर Tris - Gylcine </td><td> Invitrogen </td><td> LC2675 </td><td> 10X स्टॉक की 1L: 29.0 ग्राम Tris - बेस, 144.0 ग्राम Glycine, 10.0 छ एसडीएस </td></tr><tr><td> XCell मिनी सेल SureLock </td><td> Invitrogen </td><td> EI0001 </td><td></td></tr><tr><td> जेल चाकू </td><td> Invitrogen </td><td> EI9010 </td><td></td></tr><tr><td> SimplyBlue सुरक्षित दाग </td><td> Invitrogen </td><td> LC6065 </tघ&gt; <td></td></tr></tbody></table>

pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes

प्रोटीन का मूल्यांकन dodecyl सोडियम सल्फेट polyacrylamide जेल विश्लेषण वैद्युतकणसंचलन (एसडीएस पेज) का उपयोग एक आम तकनीक जैव रसायन और आणविक जीव विज्ञान 1-4 शोधकर्ताओं द्वारा प्रयोग किया जाता है. प्रयोगशालाओं है कि प्रोटीन की दैनिक विश्लेषण करने के लिए, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध polyacrylamide जैल (~ 10/gel डॉलर) की लागत पर काफी समय हो सकता है. इस लागत को कम करने के लिए, कुछ शोधकर्ताओं ने अपने स्वयं के polyacrylamide जैल तैयार करते हैं. इन जैल घनघोर के पारंपरिक तरीकों आमतौर पर विशेष उपकरणों और गिलास जेल प्लेटें कि महंगा हो सकता है और कई जैल डालने के लिये और उन्हें भविष्य के उपयोग के लिए भंडारण रोकना कर सकते हैं का उपयोग. इसके अलावा, सफाई या जेल में डालने का कार्य के दौरान गिलास प्लेट की हैंडलिंग आकस्मिक टूटना एक सुरक्षा के लिए खतरा है, जो स्नातक प्रयोगशाला कक्षाओं में उनके उपयोग छीन कर सकते हैं बनाने में परिणाम कर सकते हैं. हमारा प्रोटोकॉल दर्शाता है कि कैसे कई प्रोटीन जैल डाल करने के लिए एक साथ रीसाइक्लिंग Invitrogen Nupage NOVEX minigel कैसेट के द्वारा, और सस्ती माterials एक घर सुधार की दुकान पर खरीदा है. यह किफायती और सुव्यवस्थित विधि 4 डिग्री सेल्सियस पर एक कुछ हफ्तों के लिए जैल की दुकान भी शामिल है. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध जैल, प्रयोगशालाओं कि अक्सर प्रोटीन जैल चलाने से प्लास्टिक जेल कैसेट फिर से का उपयोग करके महत्वपूर्ण लागत बचाने के लिए और पर्यावरण की मदद कर सकते हैं. इसके अलावा, प्लास्टिक जेल कैसेट अत्यंत टूटना है, जो उन्हें स्नातक प्रयोगशाला की कक्षाओं के लिए आदर्श बनाता है के लिए प्रतिरोधी रहे हैं.

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Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes

हमारे प्रोटोकॉल को दर्शाता है कैसे रीसाइक्लिंग Invitrogen Nupage NOVEX minigel कैसेट, और कम खर्चीली सामग्री एक घर सुधार की दुकान में खरीदा द्वारा एक समय में कई प्रोटीन जैल डाल. यह किफायती और सुव्यवस्थित विधि 4 डिग्री सेल्सियस पर एक कुछ हफ्तों के लिए जैल की दुकान भी शामिल है. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध जैल, प्रयोगशालाओं कि अक्सर प्रोटीन जैल चलाने से प्लास्टिक जेल कैसेट फिर से का उपयोग करके महत्वपूर्ण लागत बचाने के लिए और पर्यावरण की मदद कर सकते हैं.

घनघोर और वाणिज्यिक कैसेट reusing द्वारा एक प्रोटीन जेल रनिंग

The evaluation of proteins using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis is a common technique used by biochemistry ...

Research

JoVE Journal

Biology

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE)

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis DGGE

Denaturing ढाल जेल वैद्युतकणसंचलन (DGGE)

Screening for Amyloid Aggregation by Semi-Denaturing Detergent-Agarose Gel Electrophoresis

अर्ध denaturing डिटर्जेंट - agarose जेल वैद्युतकणसंचलन द्वारा Amyloid एकत्रीकरण के लिए स्क्रीनिंग

Amyloid aggregation is associated with numerous protein misfolding pathologies and underlies the infectious properties of prions, which are ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

कार्बनिक सॉल्वेंट और एसिटिक एसिड के बिना जी 250 Coomassie के साथ जैल में प्रोटीन की धुंधला

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

आण्विक Fractionation वजन के आधार के लिए तरल चरण रिकवरी के साथ GELFREE 8100 Fractionation प्रणाली का उपयोग

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

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अस्थिर मल्टी प्रोटीन परिसर के अलगाव द्वारा Vivo में नियंत्रित पार से जोड़ने और इम्यूनो - चुंबकीय आत्मीयता क्रोमैटोग्राफी सेलुलर

The dynamic nature of cellular machineries is frequently built on transient and/or weak protein associations. These low affinity interactions preclude ...

Orthogonal Protein Purification Facilitated by a Small Bispecific Affinity Tag

विषयेतर प्रोटीन एक लघु bispecific आत्मीयता टैग द्वारा सुविधा शोधन

Due to the high costs associated with purification of recombinant proteins the protocols need to be rationalized. For high-throughput efforts there is a ...

Improving the Success Rate of Protein Crystallization by Random Microseed Matrix Screening

रैंडम Microseed मैट्रिक्स स्क्रीनिंग द्वारा प्रोटीन crystallization की सफलता की दर में सुधार

Random microseed matrix screening  (rMMS) is a protein crystallization technique in which seed crystals are added  to random screens. By increasing the ...

Protein-protein Interactions Visualized by Bimolecular Fluorescence Complementation in Tobacco Protoplasts and Leaves

तंबाकू protoplasts और पत्तियों में Bimolecular प्रतिदीप्ति complementation द्वारा कल्पना प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत

Many proteins interact transiently with other proteins or are integrated into multi-protein complexes to perform their biological function. Bimolecular ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

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वयस्क माउस Calvarial अस्थि मज्जा में hematopoietic स्टेम और पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के Vivo 4 आयामी ट्रैकिंग में

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

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झिल्ली प्रोटीन की हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन आधारित अभिव्यक्ति स्क्रीनिंग में<em&gt; Escherichia कोलाई</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...