Name: pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes
Uploaded: 2012-02-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes at JoVE.com

Gli autori ringraziano l&#39;Howard Hughes Medical Institute per una scienza UF per l&#39;aggiudicazione Vita AH

1. Preparare le cassette <ol><li> Anteriore e posteriore Clean piatti di un usato cassette Invitrogen Nupage Novex minigel, o altre cassette minigel commerciale. </li><li> Preparare circa 1-3 ml di resina epossidica di plastica e mescolare bene secondo le istruzioni del produttore. </li><li> Applicare la resina epossidica al bordo interno della piastra frontale, dove le due piastre a contatto quando la cassetta viene assemblato. </li><li> Inserire un pezzo di carta da filtro o cartone attraverso la fessura inferiore d...

<ol>
	<li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4.">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227, 680-685 (1970).</li><li>Raymond, S., Weintraub, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acrylamide+gel+as+a+supporting+medium+for+zone+electrophoresis.">Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis.</a> Science. 130, 711-711 (1959).</li><li>Sch&#228;gger, H., von Jagow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricine-sodium+dodecyl+sulfate-polyacrylamide+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+proteins+in+the+range+from+1+to+100+kDa.">Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa.</a> Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).</li><li>Shapiro, A. L., Vi&#241;uela, E., Maizel, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+weight+estimation+of+polypeptide+chains+by+electrophoresis+in+SDS-polyacrylamide+gels.">Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).</li></ol>

Gel elettroforesi delle proteine ​​è un metodo indispensabile per la maggior parte laboratori di biologia molecolare. Minigels commercialmente disponibili forniscono un elevato livello di comfort, ma può essere costoso. Qui vi mostriamo come riutilizzare le cassette minigel da una popolare marca di minigels disponibili in commercio. Questo metodo mantiene la comodità di avere una pronta fonte di gel, ma ad una frazione del costo di minigels disponibili in commercio. Un passaggio chiave in questo procedimento sta ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome di reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Comments </td></tr><tr><td> Invitrogen Nupage Novex minigel Cassette (1,0 mm) </td><td> Invitrogen </td><td> NC2010 </td><td> Disponibile in 2, 5, 10, 12, 15 e 2D pozzetti </td></tr><tr><td> Epoxy plastica </td><td> Loctite </td><td> 108771 </td><td></td></tr><tr><td> Nastro isolante </td><td> Scotch </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pallone da 125 mL lato del braccio </td><td> Pyrex </td><td> 5360 </td><td></td></tr><tr><td> 4X Tris-Base resolving gel tampone </td><td></td><td></td><td> 1,5 M Tris-base pH 8,7 </td></tr><tr><td> acrilammide </td><td> Fisher Scientific </td><td> 01065-500 </td><td></td></tr><tr><td> Bis-acrilamide </td><td> Biomedicals MP, Inc. </td><td> 800173 </td><td></td></tr><tr><td> Acrilammide soluzione 30,8% </td><td></td><td></td><td> 30:0.8 acrilammide: bis-acrilammide in IRG-H 2 O </td></tr><tr><td> 10% APS </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP179-25 </td><td> 0,1 g di persolfato di ammonio in 1 ml IRG-H 2 O, preparata immediatamente prima dell&#39;uso </td></tr><tr><td> TEMED </td><td> Arcos Organics </td><td> 138450500 </td><td></td></tr><tr><td> 1-butanolo saturato con tampone 1X gel resolving </td><td></td><td></td><td> 05:02 1-butanolo 1X tampone resolving gel </td></tr><tr><td> 4X Tris-Base tampone stacking gel </td><td></td><td></td><td> 1,5 M Tris-base pH 6,8 </td></tr><tr><td> Gel pettine </td><td> Invitrogen </td><td> NC3015 </td><td> Ben 15, 1,0 mm di spessore </td></tr><tr><td> Impulse Sealer </td><td> TEW Elettrico Impianti di riscaldamento </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Calore Pouch sigillabile </td><td> Kapak / Scotchpak </td><td></td><td> 1 pinta dimensioni (6,5 &quot;x 8&quot;) </td></tr><tr><td> Gel di accumulo </td><td></td><td></td><td> 1X buffer di impilamento gel con sodio azide 0,1% </td></tr><tr><td> Novex SDS Tris-Glicina tampone campione (2X) </td><td> Invitrogen </td><td> LC2676 </td><td></td></tr><tr><td> DTT </td><td> FisherBiotech </td><td> BP172-5 </td><td></td></tr><tr><td> 10X Tris-Gylcine tampone di corsa </td><td> Invitrogen </td><td> LC2675 </td><td> 1 litro di brodo 10 volte: 29,0 g di Tris-Base, 144,0 g Glycine, 10,0 g SDS </td></tr><tr><td> XCell SureLock Mini-Cell </td><td> Invitrogen </td><td> EI0001 </td><td></td></tr><tr><td> Gel Knife </td><td> Invitrogen </td><td> EI9010 </td><td></td></tr><tr><td> SimplyBlue sicuro Stain </td><td> Invitrogen </td><td> LC6065 </td&gt; <td></td></tr></tbody></table>

pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes

La valutazione delle proteine ​​che utilizzano sodio dodecil solfato di elettroforesi su gel di poliacrilammide (SDS-PAGE) L&#39;analisi è una tecnica comunemente usata dai ricercatori Biochimica e Biologia Molecolare 1-4. Per i laboratori che eseguono analisi giornaliere di proteine, il costo di gel di poliacrilammide disponibili in commercio (~ $ 10/gel) può essere considerevole nel tempo. Per ridurre questo costo, alcuni ricercatori preparano i loro gel di poliacrilammide propri. I metodi tradizionali di riversare questi gel tipicamente utilizzano attrezzature specializzate e delle lastre di gel di vetro che possono essere costosi e preclude colata gel molti e la loro memorizzazione per un uso futuro. Inoltre, la movimentazione delle lastre di vetro durante la pulizia o gel versando può portare a rotture accidentali creando un pericolo per la sicurezza, che potrebbe precludere il loro uso in laboratorio le classi di laurea. Il nostro protocollo dimostra come versare gel proteici contemporaneamente dal riciclaggio Invitrogen Nupage Novex cassette minigel, e poco costoso materiali acquistato in un negozio di miglioramento domestico. Questo metodo economico e razionale include un modo per memorizzare i gel a 4 ° C per alcune settimane. Per riutilizzare le cassette di plastica da gel gel disponibili in commercio, laboratori che eseguono gel proteici frequenti possono notevoli risparmi sui costi e aiutare l&#39;ambiente. Inoltre, le cassette di plastica gel sono estremamente resistenti alla rottura, che li rende ideali per le aule di laboratorio di laurea.

Watch this Scientific Journal Video about Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes at JoVE.com

Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes

Il nostro protocollo dimostra come versare gel proteici più in un momento di riciclaggio Invitrogen Nupage Novex minigel cassette e materiali a basso costo acquistati in un negozio di miglioramento domestico. Questo metodo economico e razionale include un modo per memorizzare i gel a 4 ° C per alcune settimane. Per riutilizzare le cassette di plastica da gel gel disponibili in commercio, laboratori che eseguono gel proteici frequenti possono notevoli risparmi sui costi e aiutare l&#39;ambiente.

Versando ed esecuzione di un gel proteico riutilizzando Cassettes commerciali

The evaluation of proteins using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis is a common technique used by biochemistry ...

Research

JoVE Journal

Biology

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE)

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis DGGE

Denaturazione gel elettroforesi gradiente (DGGE)

Ricerca

Biologia

Screening for Amyloid Aggregation by Semi-Denaturing Detergent-Agarose Gel Electrophoresis

Lo screening per aggregazione amiloide di semi-denaturazione detergente-Agarosio elettroforesi su gel

Amyloid aggregation is associated with numerous protein misfolding pathologies and underlies the infectious properties of prions, which are ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

La colorazione delle proteine ​​in gel con Coomassie G-250, senza solventi organici acido acetico e

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

Utilizzando il sistema GELFREE 8100 Frazionamento per peso molecolare basata su Frazionamento con recupero della fase liquida

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

Isolamento di Labile Multi-proteina complessi da In vivo Controllato Cellular Cross-Linking e Immuno-magnetica Cromatografia di affinità

The dynamic nature of cellular machineries is frequently built on transient and/or weak protein associations. These low affinity interactions preclude ...

Orthogonal Protein Purification Facilitated by a Small Bispecific Affinity Tag

Purificazione delle proteine ​​ortogonali Facilitato da una piastrina Affinity Bispecific

Due to the high costs associated with purification of recombinant proteins the protocols need to be rationalized. For high-throughput efforts there is a ...

Improving the Success Rate of Protein Crystallization by Random Microseed Matrix Screening

Migliorare il tasso di successo di cristallizzazione della proteina da Random Microseed Matrix Screening

Random microseed matrix screening  (rMMS) is a protein crystallization technique in which seed crystals are added  to random screens. By increasing the ...

Protein-protein Interactions Visualized by Bimolecular Fluorescence Complementation in Tobacco Protoplasts and Leaves

Interazioni proteina-proteina visualizzati tramite bimolecular complementazione fluorescenza in protoplasti di tabacco e foglie

Many proteins interact transiently with other proteins or are integrated into multi-protein complexes to perform their biological function. Bimolecular ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo inseguimento 4-dimensionale di emopoietiche staminali e progenitrici celle di topo adulto cranica di Midollo Osseo

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Green Fluorescent Protein-base Espressione Proiezione di proteine ​​di membrana in<em&gt; Escherichia coli</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...