Name: pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes
Uploaded: 2012-02-12T14:00:00
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著者らは、AHに生命​​賞のUF科学ハワードヒューズ医学研究所に感謝

1。カセットの準備<ol><li>クリーン前面と背面に使用インビトロジェンNupage NOVEXミニゲルカセット、またはその他の商業ミニゲルカセットのプレート。 </li><li>プラスチックエポキシの約1-3 mlを準備し、製造元の指示に従って、よく混ぜます。 </li><li>カセットがアセンブルされたときに2つのプレートが接触する前面板の内側にエポキシ樹脂を適用します。 </li><li>開口部を封止するから余分な...

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	<li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4.">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227, 680-685 (1970).</li><li>Raymond, S., Weintraub, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acrylamide+gel+as+a+supporting+medium+for+zone+electrophoresis.">Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis.</a> Science. 130, 711-711 (1959).</li><li>Sch&#228;gger, H., von Jagow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricine-sodium+dodecyl+sulfate-polyacrylamide+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+proteins+in+the+range+from+1+to+100+kDa.">Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa.</a> Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).</li><li>Shapiro, A. L., Vi&#241;uela, E., Maizel, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+weight+estimation+of+polypeptide+chains+by+electrophoresis+in+SDS-polyacrylamide+gels.">Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).</li></ol>

タンパク質のゲル電気泳動は、ほとんどの分子生物学研究所のために不可欠な方法です。市販のミニゲルでは、利便性の高いレベルを提供していますが、コストがかかる場合があります。ここでは、市販のミニゲルの人気ブランドからミニゲルカセットを再利用する方法を示しています。このメソッドは、ゲルの既製のソースを持つことの利便性を保持しますが、市販のミニゲルの数分の一?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td>インビトロジェンNupage NOVEXミニゲルカセット（1.0ミリメートル） </td><td>インビトロジェン</td><td> NC2010 </td><td> 2、5、10、12、15、2次元の井戸で利用可能</td></tr><tr><td>プラスチックエポキシ</td><td>ロックタイト</td><td> 108771 </td><td></td></tr><tr><td>電気テープ</td><td>スコットランドの</td><td></td><td></td></tr><tr><td> 125mlのサイドアームフラスコ</td><td>パイレックス</td><td> 5360 </td><td></td></tr><tr><td> 4Xトリス·ベース分離ゲルバッファー</td><td></td><td></td><td> 1.5 M Tris塩基のpH 8.7 </td></tr><tr><td>アクリルアミド</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 01065-500 </td><td></td></tr><tr><td>ビスアクリルアミド</td><td> MPバイオメディカル株式会社</td><td> 800173 </td><td></td></tr><tr><td> 30.8％アクリルアミド溶液</td><td></td><td></td><td> 30:0.8アクリルアミド：ビスアクリルアミドIRG-H 2 Oで</td></tr><tr><td> 10％のAPS </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> BP179-25 </td><td>使用直前に調製した1ミリリットルIRG-H 2 O、0.1 gの過硫酸アンモニウム</td></tr><tr><td> TEMED </td><td>アルコスオーガニック</td><td> 138450500 </td><td></td></tr><tr><td> 1X分離ゲル用緩衝液で飽和1 - ブタノール</td><td></td><td></td><td>午前5時02分1X分離ゲルバッファーに1 - ブタノール</td></tr><tr><td> 4X Tris塩基スタッキングゲルバッファー</td><td></td><td></td><td> 1.5 M Tris塩基のpH 6.8 </td></tr><tr><td>ゲルの櫛</td><td>インビトロジェン</td><td> NC3015 </td><td> 15よく、1.0 mm厚</td></tr><tr><td>インパルスシーラー</td><td> TEW電気暖房機器</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ヒートシール可能なポーチ</td><td> Kapak / Scotchpak </td><td></td><td> 1パイントサイズ（6.5 &quot;×8&quot;） </td></tr><tr><td>ゲル格納バッファ</td><td></td><td></td><td> 0.1％アジ化ナトリウムを含む1Xスタッキングゲルバッファー</td></tr><tr><td> NOVEX SDSトリス - グリシンサンプルバッファー（2X） </td><td>インビトロジェン</td><td> LC2676 </td><td></td></tr><tr><td> DTT </td><td> FisherBiotech </td><td> BP172-5 </td><td></td></tr><tr><td> 10XトリスGylcineランニングバッファー</td><td>インビトロジェン</td><td> LC2675 </td><td> 10X株式の1L：29.0グラムのトリスベース、144.0グラムグリシン、10.0グラムSDS </td></tr><tr><td> X細胞SureLockミニ細胞</td><td>インビトロジェン</td><td> EI0001 </td><td></td></tr><tr><td>ゲルナイフ</td><td>インビトロジェン</td><td> EI9010 </td><td></td></tr><tr><td>ステインSimplyBlue安全</td><td>インビトロジェン</td><td> LC6065 </tD&gt; <td></td></tr></tbody></table>

pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes

ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）分析を用いたタンパク質の評価は、生化学や分子生物学の研究者が1から4で使用される一般的な手法です。タンパク質の毎日の分析を行う研究室では、市販のポリアクリルアミドゲル（〜$ 10/gel）のコストは、時間の経過とともにかなりのことができます。このコストを軽減するために、いくつかの研究者が独自のポリアクリルアミドゲルを準備します。これらのゲルを注ぐの伝統的な方法は、通常、特殊な装置で高価になると多くのゲルを注ぎ、将来の使用のためにそれらを格納し排除することができるガラスゲルプレートを利用しています。また、クリーニングや注入ゲル中のガラスプレートの処理は、学部研究室の授業での使用を排除することが安全上の問題を作成、偶発的破損が発生することがあります。我々のプロトコルは、Invitrogen Nupage NOVEXミニゲルカセットをリサイクルして、同時に複数の蛋白質ゲルを注ぐ方法を示していますし、安価なミリアンペアterialsは、ホームセンターで購入。この経済的かつ合理化された方法は、数週間のために4℃でゲルを保存する方法が含まれています。市販のゲル、頻繁な蛋白質のゲルを実行ラボからプラスチック製のゲルカセットを再利用することで大幅にコストを節約し、環境を助けることができます。さらに、プラスチック製のゲルカセットは、学部研究室の教室のために理想的破損、非常に耐性があります。

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Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes

我々のプロトコルは、ホームセンターで購入インビトロジェンNupage NOVEXミニゲルカセット、そして安価な材料をリサイクルして、一度に複数のタンパク質ゲルを注ぐ方法を示しています。この経済的かつ合理化された方法は、数週間のために4℃でゲルを保存する方法が含まれています。市販のゲル、頻繁な蛋白質のゲルを実行ラボからプラスチック製のゲルカセットを再利用することで大幅にコストを節約し、環境を助けることができます。

商業カセットを再利用することでタンパク質ゲルを注ぐと実行

The evaluation of proteins using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis is a common technique used by biochemistry ...

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