Name: pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes
Uploaded: 2012-02-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes at JoVE.com

Forfatterne takker Howard Hughes Medical Institute for en UF Science for Life pris til AH

1. Klargjøre kassetter <ol><li> Clean foran og bak plater av en brukt Invitrogen Nupage Novex minigel kassett eller annen kommersiell minigel kassett. </li><li> Forbered ca 1-3 ml av plast epoxy og bland godt i henhold til produsentens anvisninger. </li><li> Påfør epoxy på innsiden kanten av frontplaten, der de to platene kommer i kontakt når kassetten settes sammen. </li><li> Skyv et stykke filter papir eller papp gjennom bunnen splitten av bakplaten ved montering av kassetten for å hindre overflødig epoxy fra...

<ol>
	<li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4.">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227, 680-685 (1970).</li><li>Raymond, S., Weintraub, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acrylamide+gel+as+a+supporting+medium+for+zone+electrophoresis.">Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis.</a> Science. 130, 711-711 (1959).</li><li>Sch&#228;gger, H., von Jagow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricine-sodium+dodecyl+sulfate-polyacrylamide+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+proteins+in+the+range+from+1+to+100+kDa.">Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa.</a> Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).</li><li>Shapiro, A. L., Vi&#241;uela, E., Maizel, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+weight+estimation+of+polypeptide+chains+by+electrophoresis+in+SDS-polyacrylamide+gels.">Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).</li></ol>

Protein elektroforese er en uunnværlig metode for de fleste molekylærbiologiske laboratorier. Kommersielt tilgjengelige minigels gi en høy grad av brukervennlighet, men kan være kostbart. Her viser vi hvordan du gjenbruke de minigel kassettene fra en populær merkevare av kommersielt tilgjengelige minigels. Denne metoden beholder bekvemmeligheten av å ha et ferdig kilde gels, men til en brøkdel av prisen av kommersielt tilgjengelige minigels. Et viktig steg i denne prosedyren er å bruke riktig mengde epoxy å ful...

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagens </td><td> Firma </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Invitrogen Nupage Novex Minigel Kassett (1,0 mm) </td><td> Invitrogen </td><td> NC2010 </td><td> Finnes i 2, 5, 10, 12, 15 og 2D brønner </td></tr><tr><td> Plastic Epoxy </td><td> Loctite </td><td> 108771 </td><td></td></tr><tr><td> Elektrisk Tape </td><td> Skotsk whisky </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 125 mL sidearmen kolbe </td><td> Pyrex </td><td> 5360 </td><td></td></tr><tr><td> 4X Tris-Base Resolving gel buffer </td><td></td><td></td><td> 1,5 M Tris-base pH 8,7 </td></tr><tr><td> akrylamid </td><td> Fisher Scientific </td><td> 01065-500 </td><td></td></tr><tr><td> Bis-akrylamid </td><td> MP Biomedicals, Inc. </td><td> 800173 </td><td></td></tr><tr><td> 30,8% akrylamid løsning </td><td></td><td></td><td> 30:0.8 akrylamid: bis-akrylamid i IRG-H 2 O </td></tr><tr><td> 10% APS </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP179-25 </td><td> 0,1 g ammonium persulfate i 1 ml IRG-H 2 O, tilberedes umiddelbart før bruk </td></tr><tr><td> TEMED </td><td> Arcos Organics </td><td> 138450500 </td><td></td></tr><tr><td> 1-butanol mettet med 1X Resolving gel buffer </td><td></td><td></td><td> 05:02 1-butanol til 1X Resolving gel buffer </td></tr><tr><td> 4X Tris-Base stabling gel buffer </td><td></td><td></td><td> 1,5 M Tris-base pH 6,8 </td></tr><tr><td> Gel kam </td><td> Invitrogen </td><td> NC3015 </td><td> 15 godt, 1,0 mm tykkelse </td></tr><tr><td> Impulse Sealer </td><td> TEW Elektrisk oppvarming Utstyr </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Varmforseglbare Pouch </td><td> Kapak / Scotchpak </td><td></td><td> En halvliter størrelse (6.5 &quot;x 8&quot;) </td></tr><tr><td> Gel lagring buffer </td><td></td><td></td><td> 1X stabling gel buffer med 0,1% natriumazid </td></tr><tr><td> Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X) </td><td> Invitrogen </td><td> LC2676 </td><td></td></tr><tr><td> DTT </td><td> FisherBiotech </td><td> BP172-5 </td><td></td></tr><tr><td> 10X Tris-Gylcine Running buffer </td><td> Invitrogen </td><td> LC2675 </td><td> 1L med 10X variasjon: 29,0 g Tris-Base, 144.0 g glysin, 10,0 g SDS </td></tr><tr><td> XCell SureLock Mini-Cell </td><td> Invitrogen </td><td> EI0001 </td><td></td></tr><tr><td> Gel Knife </td><td> Invitrogen </td><td> EI9010 </td><td></td></tr><tr><td> SimplyBlue Sikker Stain </td><td> Invitrogen </td><td> LC6065 </td&gt; <td></td></tr></tbody></table>

pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes

Evalueringen av proteiner ved hjelp av natrium dodecyl sulfat polyakrylamid gelelektroforese (SDS-PAGE) analyse er en vanlig teknikk som brukes av biokjemi og molekylærbiologi forskere 1-4. For laboratorier som utfører daglige analyser av proteiner, kan kostnadene for kommersielt tilgjengelige polyakrylamid geler (~ $ 10/gel) være betydelig over tid. Å redusere denne kostnaden, noen forskere utarbeider sine egne polyakrylamid geler. Tradisjonelle metoder for å helle disse gels typisk utnytte spesialisert utstyr og glass gel plater som kan være dyrt og utelukker helle mange geleer og lagre dem til senere bruk. Videre kan håndtering av glassplater under rengjøring eller gel helle resultere i utilsiktet brudd skape en sikkerhetsrisiko, som kan utelukke bruken i undergraduate laboratoriet klasser. Vår protokoll demonstrerer hvordan du helle flere protein geler samtidig ved gjenvinning Invitrogen Nupage Novex minigel kassetter, og billig materials kjøpt på et hjem forbedring butikken. Dette økonomiske og strømlinjeformet metode inkluderer en måte å lagre gels ved 4 ° C i noen uker. Ved gjenbruk av plast gel kassettene fra kommersielt tilgjengelige geleer, laboratorier som kjører hyppige protein geler kan spare betydelige kostnader og hjelpe miljøet. I tillegg plast gele kassetter er ekstremt motstandsdyktig mot brudd, noe som gjør dem ideelle for undervisning laboratoriet klasserom.

Watch this Scientific Journal Video about Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes at JoVE.com

Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes

Vår protokoll demonstrerer hvordan du helle flere protein geler gangen ved gjenvinning Invitrogen Nupage Novex minigel kassetter og billige materialer kjøpt på et hjem forbedring butikken. Dette økonomiske og strømlinjeformet metode inkluderer en måte å lagre gels ved 4 ° C i noen uker. Ved gjenbruk av plast gel kassettene fra kommersielt tilgjengelige geleer, laboratorier som kjører hyppige protein geler kan spare betydelige kostnader og hjelpe miljøet.

Helle og kjøre en Protein Gel ved å gjenbruke Kommersielle Kassetter

The evaluation of proteins using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis is a common technique used by biochemistry ...

Research

JoVE Journal

Biology

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE)

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis DGGE

Screening for Amyloid Aggregation by Semi-Denaturing Detergent-Agarose Gel Electrophoresis

Amyloid aggregation is associated with numerous protein misfolding pathologies and underlies the infectious properties of prions, which are ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

The dynamic nature of cellular machineries is frequently built on transient and/or weak protein associations. These low affinity interactions preclude ...

Orthogonal Protein Purification Facilitated by a Small Bispecific Affinity Tag

Ortogonale Protein Purification Tilrettelagt av en Small Bispecific Affinity Tag

Due to the high costs associated with purification of recombinant proteins the protocols need to be rationalized. For high-throughput efforts there is a ...

Improving the Success Rate of Protein Crystallization by Random Microseed Matrix Screening

Forbedre suksessrate på Protein Krystallisering av Random Microseed Matrix Screening

Random microseed matrix screening  (rMMS) is a protein crystallization technique in which seed crystals are added  to random screens. By increasing the ...

Protein-protein Interactions Visualized by Bimolecular Fluorescence Complementation in Tobacco Protoplasts and Leaves

Protein-protein interaksjoner visualisert ved bimolekylær fluorescens complementation i Tobakk Protoplaster og blader

Many proteins interact transiently with other proteins or are integrated into multi-protein complexes to perform their biological function. Bimolecular ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Sporing av Hematopoietiske Stem og stamceller i Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Grønn Fluorescent Protein-baserte Expression Screening av membran proteiner i<em&gt; Escherichia coli</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...