Name: pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes
Uploaded: 2012-02-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes at JoVE.com

Авторы благодарят Медицинского института Говарда Хьюза для UF науки для жизни награду AH

1. Подготовка кассеты <ol><li> Чистая передняя и задняя пластины использовали Invitrogen Nupage Novex minigel кассету или другие коммерческие кассеты minigel. </li><li> Подготовка примерно 1-3 мл пластиковых эпоксидных и хорошо перемешать в соответствии с инструкциями производителя. </li><li> Применение эпоксидны...

<ol>
	<li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4.">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227, 680-685 (1970).</li><li>Raymond, S., Weintraub, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acrylamide+gel+as+a+supporting+medium+for+zone+electrophoresis.">Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis.</a> Science. 130, 711-711 (1959).</li><li>Sch&#228;gger, H., von Jagow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricine-sodium+dodecyl+sulfate-polyacrylamide+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+proteins+in+the+range+from+1+to+100+kDa.">Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa.</a> Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).</li><li>Shapiro, A. L., Vi&#241;uela, E., Maizel, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+weight+estimation+of+polypeptide+chains+by+electrophoresis+in+SDS-polyacrylamide+gels.">Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).</li></ol>

Электрофорез белков гель является незаменимым методом для большинства лабораторий молекулярной биологии. Коммерчески доступные minigels обеспечивают высокий уровень удобства, но может быть дорогостоящим. Здесь мы покажем, как повторное использование minigel кассет с популярной маркой ком?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Invitrogen Nupage Novex Minigel кассеты (1,0 мм) </td><td> Invitrogen </td><td> NC2010 </td><td> Выпускается в 2, 5, 10, 12, 15 и 2D скважин </td></tr><tr><td> Пластиковые эпоксидной </td><td> Локтайт </td><td> 108771 </td><td></td></tr><tr><td> Изоленты </td><td> Скотч </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 125 мл стороне руки колбу </td><td> Пирекс </td><td> 5360 </td><td></td></tr><tr><td> 4X Трис-Base разрешающей гель буфер </td><td></td><td></td><td> 1,5 М Трис-основание рН 8,7 </td></tr><tr><td> акриламид </td><td> Fisher Scientific </td><td> 01065-500 </td><td></td></tr><tr><td> Бис-акриламида </td><td> MP Biomedicals, Inc </td><td> 800173 </td><td></td></tr><tr><td> 30,8% раствор акриламида </td><td></td><td></td><td> 30:0.8 акриламид: бис-акриламид в IRG-H 2 O </td></tr><tr><td> 10% APS </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP179-25 </td><td> 0,1 г персульфата аммония в 1 мл IRG-H 2 O, готовят непосредственно перед употреблением </td></tr><tr><td> TEMED </td><td> Аркос Organics </td><td> 138450500 </td><td></td></tr><tr><td> 1-бутанол насыщенный 1X буфере гель разрешающей </td><td></td><td></td><td> 5:02 1-бутанол в 1X буфере разрешающей гель </td></tr><tr><td> 4X Трис-Base концентрирующий гель буфер </td><td></td><td></td><td> 1,5 М Трис-основание рН 6,8 </td></tr><tr><td> Гель гребень </td><td> Invitrogen </td><td> NC3015 </td><td> 15 хорошо, 1.0 мм толщиной </td></tr><tr><td> Импульс Sealer </td><td> TEW Электрические отопительного оборудования </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Термосвариваемые Чехол </td><td> Kapak / Scotchpak </td><td></td><td> 1 пинта размера (6,5 &quot;х 8&quot;) </td></tr><tr><td> Гель для хранения буфера </td><td></td><td></td><td> 1X концентрирующий гель буфера с 0,1% азида натрия </td></tr><tr><td> Novex SDS Трис-Глицин буфера образца (2X) </td><td> Invitrogen </td><td> LC2676 </td><td></td></tr><tr><td> DVB-T </td><td> FisherBiotech </td><td> BP172-5 </td><td></td></tr><tr><td> 10Х трис-буфера Gylcine Running </td><td> Invitrogen </td><td> LC2675 </td><td> 1 л 10X складе: 29,0 г трис-Base, 144,0 г глицина, 10,0 г SDS </td></tr><tr><td> XCell SureLock мини-Cell </td><td> Invitrogen </td><td> EI0001 </td><td></td></tr><tr><td> Гель для ножей </td><td> Invitrogen </td><td> EI9010 </td><td></td></tr><tr><td> SimplyBlue Безопасный пятна </td><td> Invitrogen </td><td> LC6065 </tг&gt; <td></td></tr></tbody></table>

pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes

Оценка белков с использованием додецилсульфата натрия полиакриламидном геле (SDS-PAGE) анализ общих техника, используемая биохимии и молекулярной биологии исследователи 1-4. Для лабораторий, которые выполняют ежедневный анализ белков, стоимость коммерчески доступных полиакриламидном геле (~ $ 10/gel) может быть значительным с течением времени. Для снижения этой стоимости, некоторые исследователи готовят свои гели полиакриламида. Традиционные методы заливки этих гелей обычно используют специализированное оборудование и стеклянные пластины геля, который может быть дорогим и исключает многие заливки гелей и хранить их для дальнейшего использования. Кроме того, обработка стеклянных пластин во время чистки или гель заливка может привести к случайной поломки создании угрозы безопасности, которые могут препятствовать их использованию для студентов лабораторные занятия. Наш протокол свидетельствует о том, как влить несколько гелей белков одновременно по переработке Invitrogen Nupage Novex кассеты minigel и недорогой маterials приобрести в магазине товаров для дома. Этот экономичный и упорядочить метод включает в себя способ хранения гели при температуре 4 ° С в течение нескольких недель. По повторное использование пластиковых кассет геля из имеющихся в продаже гели, лабораторий, которые работают часто гели белков может существенно сэкономить затраты и помочь окружающей среде. Кроме того, пластиковые кассеты гель чрезвычайно устойчивы к разрушению, что делает их идеальными для студентов классах лаборатории.

Watch this Scientific Journal Video about Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes at JoVE.com

Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes

Наш протокол свидетельствует о том, как влить несколько гелей белка на время переработки Invitrogen Nupage Novex кассеты minigel и недорогие материалы, приобретенные в магазине товаров для дома. Этот экономичный и упорядочить метод включает в себя способ хранения гели при температуре 4 ° С в течение нескольких недель. По повторное использование пластиковых кассет геля из имеющихся в продаже гели, лабораторий, которые работают часто гели белков может существенно сэкономить затраты и помочь окружающей среде.

Заливка и запуск Белки гель за счет повторного использования коммерческих Кассеты

The evaluation of proteins using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis is a common technique used by biochemistry ...

Research

JoVE Journal

Biology

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE)

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis DGGE

Денатурирующих Электрофорез Градиент гель (DGGE)

Screening for Amyloid Aggregation by Semi-Denaturing Detergent-Agarose Gel Electrophoresis

Скрининг на агрегации амилоида по Полу-денатурирующих моюще-электрофореза в агарозном геле

Amyloid aggregation is associated with numerous protein misfolding pathologies and underlies the infectious properties of prions, which are ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Окрашивание белков в гелях Кумасси G-250 без органических растворителей и уксусной кислоты

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

Использование GELFREE 8100 Фракционирование Система Молекулярный вес основе фракционирования с жидким этапе восстановления

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

Выделение лабильной Multi-белковые комплексы по В естественных условиях Контролируемые Сотовая сшивания и иммуно-магнитного аффинной хроматографии

The dynamic nature of cellular machineries is frequently built on transient and/or weak protein associations. These low affinity interactions preclude ...

Orthogonal Protein Purification Facilitated by a Small Bispecific Affinity Tag

Ортогональные очистки белков Ведущий: Малый Биспецифичные тегов Affinity

Due to the high costs associated with purification of recombinant proteins the protocols need to be rationalized. For high-throughput efforts there is a ...

Improving the Success Rate of Protein Crystallization by Random Microseed Matrix Screening

Улучшение Шанс белка кристаллизации случайным Microseed Matrix скрининга

Random microseed matrix screening  (rMMS) is a protein crystallization technique in which seed crystals are added  to random screens. By increasing the ...

Protein-protein Interactions Visualized by Bimolecular Fluorescence Complementation in Tobacco Protoplasts and Leaves

Белок-белковых взаимодействий визуализируется бимолекулярного флуоресценции комплементации табачными протопластов и листья

Many proteins interact transiently with other proteins or are integrated into multi-protein complexes to perform their biological function. Bimolecular ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

В Vivo 4-мерном Tracking гемопоэтических стволовых и клеток-предшественников в взрослой мыши свода черепа костного мозга

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Зеленый флуоресцентный белок на основе Expression Скрининг мембранных белков в<em&gt; Кишечная палочка</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...