Name: pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes
Uploaded: 2012-02-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes at JoVE.com

Författarna tackar Howard Hughes Medical Institute for en UF Science for Life utmärkelsen till AH

1. Förbereda kassetterna <ol><li> Ren fram och bak plattor av en begagnad Invitrogen NuPAGE Novex minigel kassett eller annan kommersiell minigel kassett. </li><li> Förbered cirka 1-3 ml av plast epoxi och blanda väl enligt tillverkarens instruktioner. </li><li> Applicera epoxi till den inre kanten av den främre plattan, där de två plattorna kommer att komma i kontakt när kassetten är monterad. </li><li> Glida ett stycke filterpapper eller kartong genom botten slitsen i den bakre plattan vid montering av kasse...

<ol>
	<li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4.">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227, 680-685 (1970).</li><li>Raymond, S., Weintraub, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acrylamide+gel+as+a+supporting+medium+for+zone+electrophoresis.">Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis.</a> Science. 130, 711-711 (1959).</li><li>Sch&#228;gger, H., von Jagow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricine-sodium+dodecyl+sulfate-polyacrylamide+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+proteins+in+the+range+from+1+to+100+kDa.">Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa.</a> Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).</li><li>Shapiro, A. L., Vi&#241;uela, E., Maizel, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+weight+estimation+of+polypeptide+chains+by+electrophoresis+in+SDS-polyacrylamide+gels.">Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).</li></ol>

Protein gelelektrofores är ett oumbärligt sätt för de flesta molekylärbiologiska laboratorier. Kommersiellt tillgängliga minigeler ge en hög nivå av bekvämlighet, men kan bli kostsamt. Här visar vi hur man återanvända minigel kassetter från ett populärt märke av kommersiellt tillgängliga minigeler. Denna metod behåller bekvämligheten med att ha en färdig källa geler, men till en bråkdel av kostnaden för kommersiellt tillgängliga minigeler. Ett nyckelsteg i denna procedur är att tillämpa den korr...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namn på reagens </td><td> Företaget </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Invitrogen NuPAGE Novex minigel kassett (1,0 mm) </td><td> Invitrogen </td><td> NC2010 </td><td> Finns i 2, 5, 10, 12, 15 och 2D brunnar </td></tr><tr><td> Plast Epoxi </td><td> Loctite </td><td> 108.771 </td><td></td></tr><tr><td> Eltejp </td><td> Scotch </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 125 ml sidoarm kolv </td><td> Pyrex </td><td> 5360 </td><td></td></tr><tr><td> 4X Tris-bas Lösa gelbuffert </td><td></td><td></td><td> 1,5 M Tris-bas pH 8,7 </td></tr><tr><td> akrylamid </td><td> Fisher Scientific </td><td> 01065-500 </td><td></td></tr><tr><td> Bis-akrylamid </td><td> MP Biomedicals, Inc. </td><td> 800.173 </td><td></td></tr><tr><td> 30,8% akrylamidlösning </td><td></td><td></td><td> 30:0.8 akrylamid: bis-akrylamid i IRG-H2O </td></tr><tr><td> 10% APS </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP179-25 </td><td> 0,1 g ammoniumpersulfat i 1 ml IRG-H2O, framställdes omedelbart före användning </td></tr><tr><td> TEMED </td><td> Arcos Organics </td><td> 138450500 </td><td></td></tr><tr><td> 1-butanol mättad med 1X upplösande gel buffert </td><td></td><td></td><td> 05:02 1-butanol att 1X Lösa gelbuffert </td></tr><tr><td> 4X tris bas stackgelen buffert </td><td></td><td></td><td> 1,5 M Tris-bas pH 6,8 </td></tr><tr><td> Gel kam </td><td> Invitrogen </td><td> NC3015 </td><td> 15 bra, 1,0 mm tjocklek </td></tr><tr><td> Impulse Sealer </td><td> TEW Elvärme Equipment </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Värmeförseglingsbar Påse </td><td> KAPAK / Scotchpak </td><td></td><td> 1 pint storlek (6,5 &quot;x 8&quot;) </td></tr><tr><td> Gel lagringsbuffert </td><td></td><td></td><td> 1X stackgelen buffert med 0,1% natriumazid </td></tr><tr><td> Novex SDS Tris-glycin-provbuffert (2X) </td><td> Invitrogen </td><td> LC2676 </td><td></td></tr><tr><td> DTT </td><td> FisherBiotech </td><td> BP172-5 </td><td></td></tr><tr><td> 10X Tris-Gylcine kömingsbuffert </td><td> Invitrogen </td><td> LC2675 </td><td> 1 liter 10X lager: 29,0 g Tris-bas, 144,0 g glycin, 10,0 g SDS </td></tr><tr><td> XCell SureLock Mini-Cell </td><td> Invitrogen </td><td> EI0001 </td><td></td></tr><tr><td> Gel Kniv </td><td> Invitrogen </td><td> EI9010 </td><td></td></tr><tr><td> SimplyBlue Säker Stain </td><td> Invitrogen </td><td> LC6065 </td&gt; <td></td></tr></tbody></table>

pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes

Utvärderingen av proteiner med användning av natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektrofores (SDS-PAGE)-analys är en vanlig teknik som används av biokemi och molekylär biologi forskare 1-4. För laboratorier som utför dagliga analyser av proteiner, kan kostnaden för kommersiellt tillgängliga polyakrylamidgeler (~ $ 10/gel) vara avsevärt över tiden. För att minska denna kostnad, vissa forskare laga sin egen polyakrylamidgeler. Traditionella metoder för att hälla dessa geler använder oftast specialutrustning och glasskivor gel som kan vara dyrt och utesluter hälla många geler och lagra dem för framtida bruk. Dessutom kan hantering av glasskivor under rengöring eller gel hälla resultera i oavsiktlig brott att skapa en säkerhetsrisk, vilket kan förhindra deras användning i grundutbildningen laboratorium klasser. Vår protokoll visar hur man hälla flera proteingeler samtidigt genom återvinning Invitrogen NuPAGE Novex minigel kassetter, och billig MAterial köpas ett hem förbättring butik. Denna ekonomiska och strömlinjeformade metoden innefattar ett sätt att lagra gelerna vid 4 ° C under några veckor. Genom att återanvända plast gel kassetterna från kommersiellt tillgängliga geler, laborationer som kör ofta proteingeler kan spara betydande kostnader och hjälpa miljön. Dessutom, plast gel kassetter är extremt resistenta mot brott, vilket gör dem idealiska för grundutbildningen laboratorium klassrum.

Watch this Scientific Journal Video about Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes at JoVE.com

Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes

Vår protokoll visar hur man hälla flera proteingeler i taget genom återvinning Invitrogen NuPAGE Novex minigel kassetter och billig utrustning som köps in på ett hem förbättring butik. Denna ekonomiska och strömlinjeformade metoden innefattar ett sätt att lagra gelerna vid 4 ° C under några veckor. Genom att återanvända plast gel kassetterna från kommersiellt tillgängliga geler, laborationer som kör ofta proteingeler kan spara betydande kostnader och hjälpa miljön.

Hälla och köra ett protein Gel genom att återanvända Commercial Kassetter

The evaluation of proteins using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis is a common technique used by biochemistry ...

Research

JoVE Journal

Biology

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE)

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis DGGE

Denaturering Gradient gelelektrofores (DGGE)

Screening for Amyloid Aggregation by Semi-Denaturing Detergent-Agarose Gel Electrophoresis

Screening för Amyloid aggregation av Semi-Denaturering Tvättmedel-agarosgelelektrofores

Amyloid aggregation is associated with numerous protein misfolding pathologies and underlies the infectious properties of prions, which are ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Färgning av proteinerna i geler med Coomassie G-250 utan organiska lösningsmedel och ättiksyra

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

Använda GELFREE 8100 Fraktionering System för Molekylär viktbaserad fraktionering med vätskefasen Recovery

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

Isolering av labil Multi-proteinkomplex av In vivo Kontrollerad Cellular tvärbindning och Immuno-magnetiska affinitetskromatografi

The dynamic nature of cellular machineries is frequently built on transient and/or weak protein associations. These low affinity interactions preclude ...

Orthogonal Protein Purification Facilitated by a Small Bispecific Affinity Tag

Ortogonal proteinrening underlättas av en liten Bispecific Affinity Tagg

Due to the high costs associated with purification of recombinant proteins the protocols need to be rationalized. For high-throughput efforts there is a ...

Improving the Success Rate of Protein Crystallization by Random Microseed Matrix Screening

Att förbättra andelen framgångsrika Protein Kristallisering av Random Microseed Matrix Screening

Random microseed matrix screening  (rMMS) is a protein crystallization technique in which seed crystals are added  to random screens. By increasing the ...

Protein-protein Interactions Visualized by Bimolecular Fluorescence Complementation in Tobacco Protoplasts and Leaves

Protein-protein interaktioner visualiseras genom Bimolecular Fluorescens Komplettering i tobaksprotoplaster och Löv

Many proteins interact transiently with other proteins or are integrated into multi-protein complexes to perform their biological function. Bimolecular ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Spårning av Hematopoietic Stem och stamceller i vuxen mus calvarial Benmärg

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Grönt fluorescerande protein-baserad expressions Screening av membranproteiner i<em&gt; Escherichia coli</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...