Name: detection of protein interactions in plant using a gateway compatible bimolecular fluorescence complementation (bifc) system
Uploaded: 2011-09-16T13:00:00
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हम पांडुलिपि और सामान्य प्रयोगशाला सहायता पढ़ने के लिए Vi गुयेन धन्यवाद.

1. Agrobacterium संस्कृति की तैयारी <ol><li> Agrobacterium तनाव GV3101 पहले गेटवे संगत BiFC वेक्टर pEarleyGate201 - YC और pEarleyGate202 YN, प्रत्येक युक्त एक संलयन भारत सरकार के निर्माण के साथ बदल दिया . </li><li> BiFC संलयन प्रोटीन का एक 5 मिलीलीटर YEB संस्कृ?...

<ol>
	<li>Ohad, N., Yalovsky, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilizing+bimolecular+fluorescence+complementation+(BiFC)+to+assay+protein-protein+interaction+in+plants.">Utilizing bimolecular fluorescence complementation (BiFC) to assay protein-protein interaction in plants.</a> Methods in molecular biology. 655, 347-358 (2010).</li><li>Fang, Y., Spector, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BiFC+imaging+assay+for+plant+protein-protein+interactions.">BiFC imaging assay for plant protein-protein interactions.</a> Cold Spring Harbor protocols. 2, (2010).</li><li>Schutze, K., Harter, K., Chaban, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bimolecular+fluorescence+complementation+(BiFC)+to+study+protein-protein+interactions+in+living+plant+cells.">Bimolecular fluorescence complementation (BiFC) to study protein-protein interactions in living plant cells.</a> Methods in molecular biology. 479, 189-202 (2009).</li><li>Hiatt, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bimolecular+fluorescence+complementation+(BiFC)+analysis+of+protein+interactions+in+Caenorhabditis+elegans.">Bimolecular fluorescence complementation (BiFC) analysis of protein interactions in Caenorhabditis elegans.</a> Methods. 45, 185-191 (2008).</li><li>Barnard, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+implementation+of+split-GFP-based+bimolecular+fluorescence+complementation+(BiFC)+assays+in+yeast.">Development and implementation of split-GFP-based bimolecular fluorescence complementation (BiFC) assays in yeast.</a> Biochemical Society Transactions. 36, 479-482 (2008).</li><li>Kerppola, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+implementation+of+bimolecular+fluorescence+complementation+(BiFC)+assays+for+the+visualization+of+protein+interactions+in+living+cells.">Design and implementation of bimolecular fluorescence complementation (BiFC) assays for the visualization of protein interactions in living cells.</a> Nature. 1, 1278-1286 (2006).</li><li>Hu, C. D., Grinberg, A. V., Kerppola, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+protein+interactions+in+living+cells+using+bimolecular+fluorescence+complementation+(BiFC)+analysis.">Visualization of protein interactions in living cells using bimolecular fluorescence complementation (BiFC) analysis.</a> Current protocols in cell biology. 21, 3-3 (2006).</li><li>Earley, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gateway-compatible+vectors+for+plant+functional+genomics+and+proteomics.">Gateway-compatible vectors for plant functional genomics and proteomics.</a> The Plant journal : for cell and molecular biology. 45, 616-629 (2006).</li><li>Karimi, M., Inze, D., Depicker, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GATEWAY+vectors+for+Agrobacterium-mediated+plant+transformation.">GATEWAY vectors for Agrobacterium-mediated plant transformation.</a> Trends in Plant Science. 7, 193-195 (2002).</li><li>Lu, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+homolog+of+the+yeast+TREX-2+mRNA+export+complex:+components+and+anchoring+nucleoporin.">Arabidopsis homolog of the yeast TREX-2 mRNA export complex: components and anchoring nucleoporin.</a> The Plant journal : for cell and molecular biology. 61, 259-270 (2010).</li><li>Sparkes, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=transient+expression+of+fluorescent+fusion+proteins+in+tobacco+plants+and+generation+of+stably+transformed+plants.">transient expression of fluorescent fusion proteins in tobacco plants and generation of stably transformed plants.</a> Nature protocols. 1, 2019-2025 (2006).</li><li>Rackham, O., Brown, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+RNA-protein+interactions+in+living+cells:+FMRP+and+IMP1+interact+on+mRNAs.">Visualization of RNA-protein interactions in living cells: FMRP and IMP1 interact on mRNAs.</a> The EMBO journal. 23, 3346-3355 (2004).</li><li>Demidov, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+complementation+of+split+fluorescent+protein+triggered+by+DNA+hybridization.">Fast complementation of split fluorescent protein triggered by DNA hybridization.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 2052-2056 (2006).</li><li>Shyu, Y. J., Suarez, C. D., Hu, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+ternary+complexes+in+living+cells+by+using+a+BiFC-based+FRET+assay.">Visualization of ternary complexes in living cells by using a BiFC-based FRET assay.</a> Nature. 3, 1693-1702 (2008).</li></ol>

BiFC परख प्रोटीन बातचीत के अध्ययन के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है. पारंपरिक Y2H परख के विपरीत, BiFC न केवल प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत के दृश्य की अनुमति देता है, लेकिन यह भी उप सेलुलर स्थानीयकरण के रूप में इस तरह के जट?...

<table border='1'>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of the reagent</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetosyringone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D134406</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2933</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL slip-tip tuberculin syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309602</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of protein interactions in plant using a gateway compatible bimolecular fluorescence complementation (bifc) system

हम एक BiFC vivo में दो प्रोटीनों के बीच बातचीत का परीक्षण करने के लिए तकनीक विकसित की है. यह दो गैर अतिव्यापी टुकड़ों में एक पीला फ्लोरोसेंट प्रोटीन (YFP) के बंटवारे के द्वारा पूरा किया है. प्रत्येक टुकड़ा फ्रेम ब्याज की एक जीन में क्लोन है. इन constructs तो Agrobacterium मध्यस्थता परिवर्तन के माध्यम से कर सकते हैं Nicotiana benthamiana में सह तब्दील, संलयन प्रोटीन की पारगमन अभिव्यक्ति की अनुमति. YFP संकेत के पुनर्गठन केवल तब होता है जब तहकीकात प्रोटीन 1-7 बातचीत. परीक्षण और प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत को मान्य करने के लिए, BiFC खमीर दो संकर परख (Y2H) के साथ एक साथ इस्तेमाल किया जा सकता है. यह अप्रत्यक्ष बातचीत जो Y2H में अनदेखा किया जा सकता का पता लगाने सकता है. गेटवे प्रौद्योगिकी एक सार्वभौमिक मंच है कि ब्याज की जीन (भारत सरकार) के शटल शोधकर्ताओं में सक्षम बनाता है कई अभिव्यक्ति और 8,9 संभव के रूप में कार्यात्मक विश्लेषण प्रणाली के रूप में. दोनों अभिविन्यास और पढ़ने फ्रेम प्रतिबंध एंजाइमों या ligation का उपयोग करने के लिए अभिव्यक्ति तैयार क्लोन बनाने के बिना रखा जा सकता है. एक परिणाम के रूप में, एक पुनः अनुक्रमण कदम प्रयोगों भर में लगातार परिणाम सुनिश्चित समाप्त कर सकते हैं. हम गेटवे संगत BiFC और Y2H वैक्टर जो आसान उपयोग उपकरणों के साथ शोधकर्ताओं प्रदान दोनों BiFC और Y2H assays 10 प्रदर्शन की एक श्रृंखला बनाई है. यहाँ, हम हमारे BiFC प्रणाली का उपयोग करने के लिए एन में प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत का परीक्षण करने में आसानी प्रदर्शित benthamiana पौधों.

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Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC System

हम एक संयंत्र में प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत का परीक्षण करने के लिए तकनीक विकसित की है. एक पीला फ्लोरोसेंट प्रोटीन (YFP) गैर अतिव्यापी दो टुकड़ों में विभाजित है. प्रत्येक टुकड़ा फ्रेम गेटवे प्रणाली के माध्यम से ब्याज की एक जीन में क्लोन है, संलयन प्रोटीन की अभिव्यक्ति को सक्रिय करने के. YFP संकेत के पुनर्गठन केवल तब होता है जब तहकीकात प्रोटीन बातचीत.

संयंत्र में प्रोटीन बातचीत एक गेटवे संगत bimolecular प्रतिदीप्ति (BiFC) complementation सिस्टम का उपयोग की जांच

We have developed a BiFC technique to test the interaction between two proteins in vivo. This is accomplished by splitting a yellow fluorescent protein ...

Research

JoVE Journal

Biology

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) System

Rapid Homogeneous Detection of Biological Assays Using Magnetic Modulation Biosensing System

जैविक चुंबकीय मॉडुलन biosensing प्रणाली का उपयोग Assays रैपिड सजातीय जांच

A magnetic modulation biosensing system (MMB) [1,2] rapidly and homogeneously detected biological targets at low concentrations without any washing or ...

Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

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Bimolecular प्याज जीन Helios गन का उपयोग कक्ष में प्रतिदीप्ति complementation (BiFC) प्रोटीन प्रोटीन सहभागिता के लिए परख

Investigation of gene function in diverse organisms relies on knowledge of how the gene products interact with each other in their normal cellular ...

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में vivo माइक्रो नमूनों सतहों पर प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत की जांच

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प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत की पहचान के लिए एक प्रोटोकॉल के आधार पर<sup&gt; 15</sup&gt; एन मेटाबोलिक लेबलिंग, immunoprecipitation, मात्रात्मक मास स्पेक्ट्रोमेट्री और आत्मीयता मॉडुलन

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