Name: preparation of intact bovine tail intervertebral discs for organ culture
Uploaded: 2012-02-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Intact Bovine Tail Intervertebral Discs for Organ Culture at JoVE.com

Dette projekt blev støttet af den schweiziske National Science Foundation (SNF # 310030-127586/1).

1. Intervertebral Disc Høst <ol><li> Hele længden, kvæg hale er fremstillet af et lokalt slagteri, hvis det er muligt uden skind da tilstedeværelsen af ​​hud øger risikoen for forurening (figur 2). </li><li> Forbered store skærebræt og forberede sterilt arbejde station og instrumenter oven på et skærebræt (fig. 2). </li><li> Forbered under sterile laminar flow hætte steril gaze fugtet med 0,9% natriumklorid indeholdende 55mm natriumcitrat og lagt i hver brønd af 6-brønds plade. </li><li> Forbered en b...

<ol>
	<li>Lee, C. R., Iatridis, J. C., Poveda, L., Alini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+organ+culture+of+the+bovine+intervertebral+disc:+effects+of+vertebral+endplate+and+potential+for+mechanobiology+studies.">In vitro organ culture of the bovine intervertebral disc: effects of vertebral endplate and potential for mechanobiology studies.</a> Spine (Phila Pa 1976). 31, 515-522 (1976).</li><li>Chan, S. C. W., Gantenbein-Ritter, B., Leung, V. Y., Chan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreserved+intervertebral+disc+with+injected+bone+marrow-derived+stromal+cells:+a+feasibility+study+using+organ+culture.">Cryopreserved intervertebral disc with injected bone marrow-derived stromal cells: a feasibility study using organ culture.</a> Spine. J. 10 (6), 486-496 (2010).</li><li>Chan, S. C., Ferguson, S. J., Wuertz, K., Gantenbein-Ritter, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+Response+of+the+Intervertebral+Disc+to+Repetitive+Short+Term+Cyclic+Torsion.">Biological Response of the Intervertebral Disc to Repetitive Short Term Cyclic Torsion.</a> Spine (Phila Pa 1976). , (2011).</li><li>Gantenbein-Ritter, B., Sprecher, C. M., Chan, S., Illien-J&#252;nger, S., Grad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confocal+imaging+protocols+for+live/dead+staining+in+three-dimensional+carriers.">Confocal imaging protocols for live/dead staining in three-dimensional carriers.</a> Methods Mol. Biol. 740, 127-140 (2011).</li><li>Gantenbein-Ritter, B., Potier, E., Zeiter, S., van der Werf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accuracy+of+three+techniques+to+determine+cell+viability+in+3D+tissues+or+scaffolds.">Accuracy of three techniques to determine cell viability in 3D tissues or scaffolds.</a> Tissue Engineering Part C Methods. 14, 353-358 (2008).</li><li>Rasband, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ImageJ. , (1997).</li><li>Haschtmann, D., Stoyanov, J. V., Ettinger, L., Nolte, L. P., Ferguson, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+novel+intervertebral+disc/endplate+culture+model:+analysis+of+an+ex+vivo+in+vitro+whole-organ+rabbit+culture+system.">Establishment of a novel intervertebral disc/endplate culture model: analysis of an ex vivo in vitro whole-organ rabbit culture system.</a> Spine. 31, 2918-2925 (2006).</li><li>Gantenbein, B., Gr&#252;nhagen, T., Lee, C. R., van Donkelaar, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+organ+culturing+system+for+intervertebral+disc+explants+with+vertebral+endplates:+a+feasibility+study+with+ovine+caudal+discs.">An in vitro organ culturing system for intervertebral disc explants with vertebral endplates: a feasibility study with ovine caudal discs.</a> Spine. 31, 2665-2673 (2006).</li><li>Korecki, C. L., Kuo, C. K., Tuan, R. S., Iatridis, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intervertebral+disc+cell+response+to+dynamic+compression+is+age+and+frequency+dependent.">Intervertebral disc cell response to dynamic compression is age and frequency dependent.</a> J. Orthop. Res. 27, 800-806 (2009).</li><li>Korecki, C. L., MacLean, J. J., Iatridis, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+compression+effects+on+intervertebral+disc+mechanics+and+biology.">Dynamic compression effects on intervertebral disc mechanics and biology.</a> Spine (Phila Pa 1976). 33, 1403-1409 (1976).</li><li>Jim, B., Steffen, T., Moir, J., Roughley, P., Haglund, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+intact+intervertebral+disc+organ+culture+system+in+which+degeneration+can+be+induced+as+a+prelude+to+studying+repair+potential.">Development of an intact intervertebral disc organ culture system in which degeneration can be induced as a prelude to studying repair potential.</a> European Spine Journal. , 1-11 (2011).</li></ol>

Det første skridt for en vellykket orgel kulturen er at sikre, at eksplantation ikke burde være forurenet. Halen bør være flået, inden du starter med proceduren. Enhver dyrehår kørt ind i et sterilt laboratorium kan være problematisk i forhold til forurening. Kvæg Halen bør ideelt set være så friske som muligt (dette påvirker første celle levedygtighed). Desuden er betadine vasketrin anbefales at reducere risikoen for forurening yderligere. I stedet for at bruge en custom-made kniv indehaveren og en hammer...

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagenset </td><td> Firma </td><td> Katalog nummer </td><td> Kommentarer (valgfri) </td></tr><tr><td colspan="4"> Fersk okse-intervertebral disc væv fra oksehaler, fra lokale slagteri (helst inden for få timer post mortem-og uden skind). </td></tr><tr><td> Pulsavac Plus AC System </td><td> Zimmer inc., Schweiz </td><td> 00-5150-486-01 </td><td> Den bedste præstation med den hip-spray hoved og med AC strømforsyning (den ene med 8 AA batteri gør også arbejde, men er mindre bekvemt) </td></tr><tr><td> High Capacity Fan Spray m / Splash Shield, 12.7cm længde </td><td> Zimmer inc., Schweiz </td><td> 00-5150-175-00 </td><td> Der er flere spray hoveder til rådighed, vi har testet denne ene succes </td></tr><tr><td> Skalpel knive # 22 og # 10 </td><td> Swann-Mortom, England </td><td> # 10: 0201 # 22: 0208 </td><td></td></tr><tr><td> Skalpelblad indehaveren # 3 og # 4 </td><td> Hausmann, Tyskland </td><td> # 3: 06.103.00 # 4: 06.104.00 </td><td></td></tr><tr><td> Lutz industrielle klinge </td><td> Lutz, Tyskland </td><td> 1022.0884 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfatbufferet saltopløsning (PBS) </td><td> Invitrogen, Schweiz </td><td> 10010-023 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco ændrede Eagle Medium (DMEM) </td><td> Gibco, Schweiz </td><td> 11960-044 </td><td></td></tr><tr><td> Ringer-opløsning (uden glukose) </td><td> Bichsel, Schweiz </td><td> 133 0002 </td><td></td></tr><tr><td> 6-godt multi-brønds plade </td><td> TPP, Schweiz </td><td> 92006 </td><td></td></tr><tr><td> Betadine løsning </td><td> Mundipharma, Schweiz </td&gt; <td> 10055025 </td><td></td></tr><tr><td> Kirurgisk huden markør </td><td> Porex Kirurgisk, Schweiz </td><td> 9560 </td><td></td></tr><tr><td> Stort skærebræt </td><td></td><td></td><td> Alle mærker er muligt </td></tr></tbody></table>

preparation of intact bovine tail intervertebral discs for organ culture

Det intervertebral disk (IVD) er fælles i rygsøjlen forbinder ryghvirvel til ryghvirvel. Den fungerer til at overføre belastning af rygsøjlen og give fleksibilitet til rygsøjlen. Det komponerer af tre rum: den inderste kerne pulposus (NP) og omfatter af annulus fibrosus (AF), og to bruskspidserne endeplader forbinder NP og AF til vertebrale kroppen på begge sider. Discogenic smerter, muligvis forårsaget af degenerative intervertebrale disc disease (DDD) og disk herniations er blevet identificeret som et stort problem i vores moderne samfund. For at undersøge mulige mekanismer IVD-degeneration, er in vitro-orgel kultur systemer med live-disk celler yderst tiltalende. In vitro kultur intakt kvæg halebenshvirvel IVDs er avanceret til en relevant model system, der tillader studiet af mekanisk-biologiske aspekter i en velkontrolleret fysiologiske og mekaniske miljø. Bovin hale IVDs kan fås relativt let i højere tal end er meget lig den menneskelige lumbal IVDs med hensyn til celletæthed, cellepopulation og dimensioner. Men tidligere kvæg caudale IVD Høstningen fastholde bruskspidserne endeplader og benet endeplader mislykkedes efter 1-2 dage i kultur siden ernæring veje tydeligvis var blokeret af størknet blod. IVDs er de største avascular organer dermed de næringsstoffer til cellerne i NP er udelukkende afhængig diffusion via kapillar knopper fra det tilstødende vertebrale kroppen. Tilstedeværelse af knogle-rester og størknet blod på gavl overflader kan hindre næringsstoffer diffusion ind i midten af ​​disken og kompromis cellernes levedygtighed. Vores gruppe etableret en relativt hurtig protokol til &quot;crack&quot;-ud IVDs fra halen med en lav risiko for forurening. Vi er i stand til at permeabilize af nyslået knoklet gavl overflader ved hjælp af en kirurgisk jet lavage system, der fjerner blodpropper og opskæring snavs og meget effektivt genåbner ernæring diffusion vejtil midten af ​​IVD. Tilstedeværelsen af ​​vækst plader på begge sider af vertebrale knogle skal undgås, og skal fjernes forud for kultur. I denne video, skitsere vi det afgørende trin under tilberedningen og demonstrere nøglen til en vellykket orgel kultur opretholde en høj cellelevedygtighed i 14 dage under fri hævelse kultur. Kulturen tid kunne udvides når det er hensigtsmæssigt mekaniske miljø kan opretholdes ved hjælp af mekaniske laste bioreaktor. Teknikken viste her, kan udvides til andre dyrearter såsom svin, får og leporine caudale og lumbalt IVD isolation.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Intact Bovine Tail Intervertebral Discs for Organ Culture at JoVE.com

Preparation of Intact Bovine Tail Intervertebral Discs for Organ Culture

Denne protokol illustrerer en høst teknik til halebenshvirvel kvæg intervertebrale skiver for orgel kultur for<em&gt; In vitro</em&gt; Orgel kultur.

Udarbejdelse af intakt Bovin Tail intervertebrale skiver for orgel Kultur

The intervertebral disc (IVD) is the joint of the spine connecting  vertebra to vertebra. It functions to transmit loading of the spine and give  ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Alginate Hydrogels for Three-Dimensional Organ Culture of Ovaries and Oviducts

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer deaths in women and has a 63% mortality rate in the United States1. The cell type of origin for ...

Preparation of 3D Fibrin Scaffolds for Stem Cell Culture Applications

Udarbejdelse af 3D Fibrin stilladser til Stem celledyrkningsapplikationer

Stem cells are found in naturally occurring 3D microenvironments in vivo, which are often referred to as the stem cell niche 1. Culturing stem cells ...

Nonhuman Primate Lung Decellularization and Recellularization Using a Specialized Large-organ Bioreactor

Human primat Lung Decellularization og Recellularization bruge en specialiseret Large-orgel bioreaktor

There are an insufficient number of lungs available to meet current and future organ transplantation needs. Bioartificial tissue regeneration is an ...

Sample Preparation Strategies for Mass Spectrometry Imaging of 3D Cell Culture Models

Prøve Forberedelse Strategier for massespektrometri Imaging af 3D cellekulturmodeller

Three dimensional cell cultures are attractive models for biological research. They combine the flexibility and cost-effectiveness of cell culture with ...

The Multi-organ Chip - A Microfluidic Platform for Long-term Multi-tissue Coculture

Multi-orgel Chip - En Mikrofluid platform for langsigtet Multi-væv cokultur

The ever growing amount of new substances released onto the market and the limited predictability of current in vitro test systems has led to a high need ...

Studying the Stoichiometry of Epidermal Growth Factor Receptor in Intact Cells using Correlative Microscopy

Undersøgelse af støkiometrien af ​​epidermal vækstfaktor receptor i intakte celler ved hjælp af korrelative Microscopy

This protocol describes the labeling of epidermal growth factor receptor (EGFR) on COS7 fibroblast cells, and subsequent correlative fluorescence ...

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

en<em&gt; In vitro</em&gt; Orgel Kultur Model af muse diskusprolaps

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and ...

Fabrication and Validation of an Organ-on-chip System with Integrated Electrodes to Directly Quantify Transendothelial Electrical Resistance

Fabrikation og validering af et orgel-on-chip-System med integreret elektroder til direkte kvantificere Transendothelial elektrisk modstand

Organs-on-chips, in vitro models involving the culture of (human) tissues inside microfluidic devices, are rapidly emerging and promise to provide useful ...

Fragility Assessment of Bovine Cortical Bone Using Scratch Tests

Skrøbelighed vurdering af kvæg kortikale knogle ved hjælp af Scratch Tests

Bone is a complex hierarchical material with five distinct levels of organization. Factors like aging and diseases like osteoporosis increase the ...

Scalable Fabrication of Stretchable, Dual Channel, Microfluidic Organ Chips

Skalerbar fabrikation af elastisk, Dual Channel, mikrofluid orgel Chips

A significant number of lead compounds fail in the pharmaceutical pipeline because animal studies often fail to predict clinical responses in human ...