Name: preparation of intact bovine tail intervertebral discs for organ culture
Uploaded: 2012-02-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Intact Bovine Tail Intervertebral Discs for Organ Culture at JoVE.com

Questo progetto è stato sostenuto dal Fondo Nazionale Svizzero (FNS # 310030-127586/1).

1. Disco intervertebrale raccolta <ol><li> Tutta la lunghezza della coda bovina si ottiene da un mattatoio locale, se possibile senza la pelle in quanto la presenza della pelle aumenta la possibilità di contaminazione (Fig. 2). </li><li> Preparare a bordo di grandi dimensioni di taglio e la preparazione sterile stazione di lavoro e gli strumenti sopra un tagliere (Fig. 2). </li><li> Preparare sotto la garza sterile cappa a flusso laminare sterile imbevuto di cloruro di sodio 0,9% contenente sodio citrato 55mm e mette...

<ol>
	<li>Lee, C. R., Iatridis, J. C., Poveda, L., Alini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+organ+culture+of+the+bovine+intervertebral+disc:+effects+of+vertebral+endplate+and+potential+for+mechanobiology+studies.">In vitro organ culture of the bovine intervertebral disc: effects of vertebral endplate and potential for mechanobiology studies.</a> Spine (Phila Pa 1976). 31, 515-522 (1976).</li><li>Chan, S. C. W., Gantenbein-Ritter, B., Leung, V. Y., Chan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreserved+intervertebral+disc+with+injected+bone+marrow-derived+stromal+cells:+a+feasibility+study+using+organ+culture.">Cryopreserved intervertebral disc with injected bone marrow-derived stromal cells: a feasibility study using organ culture.</a> Spine. J. 10 (6), 486-496 (2010).</li><li>Chan, S. C., Ferguson, S. J., Wuertz, K., Gantenbein-Ritter, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+Response+of+the+Intervertebral+Disc+to+Repetitive+Short+Term+Cyclic+Torsion.">Biological Response of the Intervertebral Disc to Repetitive Short Term Cyclic Torsion.</a> Spine (Phila Pa 1976). , (2011).</li><li>Gantenbein-Ritter, B., Sprecher, C. M., Chan, S., Illien-J&#252;nger, S., Grad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confocal+imaging+protocols+for+live/dead+staining+in+three-dimensional+carriers.">Confocal imaging protocols for live/dead staining in three-dimensional carriers.</a> Methods Mol. Biol. 740, 127-140 (2011).</li><li>Gantenbein-Ritter, B., Potier, E., Zeiter, S., van der Werf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accuracy+of+three+techniques+to+determine+cell+viability+in+3D+tissues+or+scaffolds.">Accuracy of three techniques to determine cell viability in 3D tissues or scaffolds.</a> Tissue Engineering Part C Methods. 14, 353-358 (2008).</li><li>Rasband, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ImageJ. , (1997).</li><li>Haschtmann, D., Stoyanov, J. V., Ettinger, L., Nolte, L. P., Ferguson, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+novel+intervertebral+disc/endplate+culture+model:+analysis+of+an+ex+vivo+in+vitro+whole-organ+rabbit+culture+system.">Establishment of a novel intervertebral disc/endplate culture model: analysis of an ex vivo in vitro whole-organ rabbit culture system.</a> Spine. 31, 2918-2925 (2006).</li><li>Gantenbein, B., Gr&#252;nhagen, T., Lee, C. R., van Donkelaar, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+organ+culturing+system+for+intervertebral+disc+explants+with+vertebral+endplates:+a+feasibility+study+with+ovine+caudal+discs.">An in vitro organ culturing system for intervertebral disc explants with vertebral endplates: a feasibility study with ovine caudal discs.</a> Spine. 31, 2665-2673 (2006).</li><li>Korecki, C. L., Kuo, C. K., Tuan, R. S., Iatridis, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intervertebral+disc+cell+response+to+dynamic+compression+is+age+and+frequency+dependent.">Intervertebral disc cell response to dynamic compression is age and frequency dependent.</a> J. Orthop. Res. 27, 800-806 (2009).</li><li>Korecki, C. L., MacLean, J. J., Iatridis, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+compression+effects+on+intervertebral+disc+mechanics+and+biology.">Dynamic compression effects on intervertebral disc mechanics and biology.</a> Spine (Phila Pa 1976). 33, 1403-1409 (1976).</li><li>Jim, B., Steffen, T., Moir, J., Roughley, P., Haglund, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+intact+intervertebral+disc+organ+culture+system+in+which+degeneration+can+be+induced+as+a+prelude+to+studying+repair+potential.">Development of an intact intervertebral disc organ culture system in which degeneration can be induced as a prelude to studying repair potential.</a> European Spine Journal. , 1-11 (2011).</li></ol>

Il primo passo per la cultura d&#39;organo di successo è quello di assicurarsi che l&#39;espianto non dovrebbe essere contaminato. La coda deve essere scuoiati prima di iniziare la procedura. Qualsiasi peli portato in un laboratorio sterile potrebbe essere problematico in termini di contaminazione. La coda bovina dovrebbe idealmente essere il più fresco possibile (questo influenza la vitalità iniziale delle cellule). Inoltre, la fase di lavaggio betadine si raccomanda di ridurre il rischio di ulteriori contaminazioni...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti (opzionale) </td></tr><tr><td colspan="4"> Fresco tessuti bovini disco intervertebrale da code bovina, da macello locale (idealmente entro le ore post-mortem e senza pelle). </td></tr><tr><td> Pulsavac Inoltre AC Sistema </td><td> Zimmer inc., Svizzera </td><td> 00-5150-486-01 </td><td> Migliori prestazioni con l&#39;hip-spruzzo testa e con alimentatore AC (quello con l&#39;AA 8 batterie fa anche il lavoro, ma è meno conveniente) </td></tr><tr><td> Ad alta capacità Fan Spray w / Splash Shield, lunghezza 12,7 centimetri </td><td> Zimmer inc., Svizzera </td><td> 00-5150-175-00 </td><td> Ci sono teste di spruzzo diversi a disposizione, abbiamo testato con successo questa </td></tr><tr><td> Lame di bisturi # 22 e # 10 </td><td> Swann-Mortsu, l&#39;Inghilterra </td><td> # 10: 0201 # 22: 0208 </td><td></td></tr><tr><td> Porta lama bisturi # 3 e # 4 </td><td> Hausmann, Germania </td><td> # 3: 06.103.00 # 4: 06.104.00 </td><td></td></tr><tr><td> Lutz industriale lama </td><td> Lutz, Germania </td><td> 1022.0884 </td><td></td></tr><tr><td> Tampone fosfato salino (PBS) </td><td> Invitrogen, Svizzera </td><td> 10010-023 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco modificato (DMEM) </td><td> Gibco, Svizzera </td><td> 11960-044 </td><td></td></tr><tr><td> Soluzione di Ringer lattato (senza glucosio) </td><td> Bichsel, Svizzera </td><td> 133 0002 </td><td></td></tr><tr><td> 6-ben più pozzetti </td><td> TPP, Svizzera </td><td> 92006 </td><td></td></tr><tr><td> Betadine soluzione </td><td> Mundipharma, Svizzera </td&gt; <td> 10055025 </td><td></td></tr><tr><td> Pelle marcatore chirurgico </td><td> Porex chirurgica, Svizzera </td><td> 9560 </td><td></td></tr><tr><td> Tagliere grande </td><td></td><td></td><td> Ogni marchio è possibile </td></tr></tbody></table>

preparation of intact bovine tail intervertebral discs for organ culture

Il disco intervertebrale (IVD) è il comune della spina dorsale di collegamento vertebra per vertebra. Funziona per trasmettere carico della colonna vertebrale e dare flessibilità alla colonna vertebrale. Si compone di tre comparti: il nucleo polposo più interno (NP) che comprende dal fibroso (AF), e due placche cartilaginee che collega il NP e AF al corpo vertebrale su entrambi i lati. Dolore discogenico forse causata da malattia degenerativa del disco intervertebrale (DDD) e di ernia del disco è stato identificato come uno dei maggiori problemi della nostra società moderna. Per studiare i possibili meccanismi di degenerazione IVD, nei sistemi d&#39;organo coltura in vitro con le cellule disco dal vivo sono di grande appeal. La coltura in vitro di intatta IVD bovina coccigeo è avanzata ad un sistema modello di rilevante, che permette lo studio di meccano-biologico aspetti in un ambiente ben controllato fisiologiche e meccaniche. IVD coda bovina può essere relativamente facile ottenere numeri più alti in unod sono molto simili ai IVD umano lombare rispetto alla densità cellulare, popolazione di cellule e dimensioni. Tuttavia, le tecniche precedenti bovina caudale raccolta IVD mantenendo piastre laterali di placche ossee e cartilaginee fallito dopo 1-2 giorni di coltura in quanto i percorsi nutrizione erano ovviamente bloccato da sangue coagulato. IVD sono i maggiori organi avascolare, quindi, le sostanze nutritive alle cellule del NP dipendono esclusivamente sulla diffusione capillare attraverso le gemme dal corpo vertebrali adiacenti. Presenza di detriti delle ossa e sangue rappreso sulle superfici placca può ostacolare la diffusione di nutrienti verso il centro del disco e sulla vitalità cellulare compromesso. Il nostro gruppo ha stabilito un protocollo relativamente resoconto di &quot;crack&quot;, la IVD dalla coda con un basso rischio di contaminazione. Siamo in grado di permeabilize l&#39;appena tagliata superfici ossee placca utilizzando un sistema di lavaggio chirurgico jet, che rimuove i coaguli di sangue e detriti di taglio e in modo molto efficiente riapre il percorso di diffusione nutrizioneal centro del DIV. La presenza di placche di crescita su entrambi i lati l&#39;osso vertebrale deve essere evitata e deve essere rimosso prima della cultura. In questo video, abbiamo delineare le fasi cruciali durante la preparazione e dimostrare la chiave per una cultura organo di successo mantenendo alta la vitalità delle cellule per 14 giorni in libera cultura gonfiore. Il tempo della cultura potrebbe essere estesa quando opportuno ambiente meccanico può essere mantenuta utilizzando bioreattore meccanici di carico. La tecnica ha dimostrato qui può essere esteso ad altre specie animali quali suini, ovini e leporino isolamento caudale e lombare IVD.

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Preparation of Intact Bovine Tail Intervertebral Discs for Organ Culture

Questo protocollo illustra una tecnica di raccolta coccigeo dischi intervertebrali bovina per la cultura d&#39;organo per<em&gt; In vitro</em&gt; Organo cultura.

Preparazione del intatto dischi intervertebrali coda bovina per la Cultura d&#39;organo

The intervertebral disc (IVD) is the joint of the spine connecting  vertebra to vertebra. It functions to transmit loading of the spine and give  ...

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