Name: preparation of intact bovine tail intervertebral discs for organ culture
Uploaded: 2012-02-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Intact Bovine Tail Intervertebral Discs for Organ Culture at JoVE.com

Dette prosjektet ble støttet av den sveitsiske National Science Foundation (SNF # 310030-127586/1).

1. Mellomvirvelskive Disc Høsting <ol><li> Hele lengden storfe halen er hentet fra et lokalt slakteri, om mulig uten hud ettersom tilstedeværelse av huden øker sjansen for forurensning (fig 2). </li><li> Forbered store skjærebrett og forberede sterile arbeid stasjon og instrumenter på toppen av et skjærebrett (Fig. 2). </li><li> Forbered under sterile laminær hette sterilt gasbind fuktet med 0,9% natriumklorid inneholder 55mm natriumsitrat og satt i hver brønn av de 6-brønnen plate. </li><li> Utarbeide et bas...

<ol>
	<li>Lee, C. R., Iatridis, J. C., Poveda, L., Alini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+organ+culture+of+the+bovine+intervertebral+disc:+effects+of+vertebral+endplate+and+potential+for+mechanobiology+studies.">In vitro organ culture of the bovine intervertebral disc: effects of vertebral endplate and potential for mechanobiology studies.</a> Spine (Phila Pa 1976). 31, 515-522 (1976).</li><li>Chan, S. C. W., Gantenbein-Ritter, B., Leung, V. Y., Chan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreserved+intervertebral+disc+with+injected+bone+marrow-derived+stromal+cells:+a+feasibility+study+using+organ+culture.">Cryopreserved intervertebral disc with injected bone marrow-derived stromal cells: a feasibility study using organ culture.</a> Spine. J. 10 (6), 486-496 (2010).</li><li>Chan, S. C., Ferguson, S. J., Wuertz, K., Gantenbein-Ritter, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+Response+of+the+Intervertebral+Disc+to+Repetitive+Short+Term+Cyclic+Torsion.">Biological Response of the Intervertebral Disc to Repetitive Short Term Cyclic Torsion.</a> Spine (Phila Pa 1976). , (2011).</li><li>Gantenbein-Ritter, B., Sprecher, C. M., Chan, S., Illien-J&#252;nger, S., Grad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confocal+imaging+protocols+for+live/dead+staining+in+three-dimensional+carriers.">Confocal imaging protocols for live/dead staining in three-dimensional carriers.</a> Methods Mol. Biol. 740, 127-140 (2011).</li><li>Gantenbein-Ritter, B., Potier, E., Zeiter, S., van der Werf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accuracy+of+three+techniques+to+determine+cell+viability+in+3D+tissues+or+scaffolds.">Accuracy of three techniques to determine cell viability in 3D tissues or scaffolds.</a> Tissue Engineering Part C Methods. 14, 353-358 (2008).</li><li>Rasband, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ImageJ. , (1997).</li><li>Haschtmann, D., Stoyanov, J. V., Ettinger, L., Nolte, L. P., Ferguson, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+novel+intervertebral+disc/endplate+culture+model:+analysis+of+an+ex+vivo+in+vitro+whole-organ+rabbit+culture+system.">Establishment of a novel intervertebral disc/endplate culture model: analysis of an ex vivo in vitro whole-organ rabbit culture system.</a> Spine. 31, 2918-2925 (2006).</li><li>Gantenbein, B., Gr&#252;nhagen, T., Lee, C. R., van Donkelaar, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+organ+culturing+system+for+intervertebral+disc+explants+with+vertebral+endplates:+a+feasibility+study+with+ovine+caudal+discs.">An in vitro organ culturing system for intervertebral disc explants with vertebral endplates: a feasibility study with ovine caudal discs.</a> Spine. 31, 2665-2673 (2006).</li><li>Korecki, C. L., Kuo, C. K., Tuan, R. S., Iatridis, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intervertebral+disc+cell+response+to+dynamic+compression+is+age+and+frequency+dependent.">Intervertebral disc cell response to dynamic compression is age and frequency dependent.</a> J. Orthop. Res. 27, 800-806 (2009).</li><li>Korecki, C. L., MacLean, J. J., Iatridis, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+compression+effects+on+intervertebral+disc+mechanics+and+biology.">Dynamic compression effects on intervertebral disc mechanics and biology.</a> Spine (Phila Pa 1976). 33, 1403-1409 (1976).</li><li>Jim, B., Steffen, T., Moir, J., Roughley, P., Haglund, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+intact+intervertebral+disc+organ+culture+system+in+which+degeneration+can+be+induced+as+a+prelude+to+studying+repair+potential.">Development of an intact intervertebral disc organ culture system in which degeneration can be induced as a prelude to studying repair potential.</a> European Spine Journal. , 1-11 (2011).</li></ol>

Det første skrittet for vellykket organ kultur er å sørge for at eksplantering ikke skal bli forurenset. Halen skal være flådd før du starter med prosedyren. Eventuelle dyrehår brakt inn et sterilt laboratorium kan være problematiske i forhold til forurensning. Den bovine halen bør ideelt sett være så ferske som mulig (dette påvirker initial celleviabilitet). Videre er betadine vasketrinn anbefales for å redusere risikoen for smitte videre. I stedet for å bruke en skreddersydd blad holderen og en hammer ti...

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagens </td><td> Firma </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer (valgfritt) </td></tr><tr><td colspan="4"> Fresh storfe intervertebral plate vev fra storfe haler, fra lokale slakteriet (helst innen timer post-mortem og uten skinn). </td></tr><tr><td> Pulsavac Plus AC System </td><td> Zimmer mva., Sveits </td><td> 00-5150-486-01 </td><td> Best ytelse med hip-spray hode og med AC strømforsyning (den med 8 AA-batteripakken fungerer også, men er mindre praktisk) </td></tr><tr><td> High Capacity Fan Spray w / Splash Shield, 12.7cm lengde </td><td> Zimmer mva., Sveits </td><td> 00-5150-175-00 </td><td> Det er flere spray hoder tilgjengelig, testet vi dette en vellykket </td></tr><tr><td> Skalpell blader # 22 og # 10 </td><td> Swann-Mortpå, England </td><td> # 10: 0201 # 22: 0208 </td><td></td></tr><tr><td> Skalpell knivfestet # 3 og # 4 </td><td> Hausmann, Tyskland </td><td> # 3: 06.103.00 # 4: 06.104.00 </td><td></td></tr><tr><td> Lutz industriell blad </td><td> Lutz, Tyskland </td><td> 1022.0884 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfatbufret saltvann (PBS) </td><td> Invitrogen, Sveits </td><td> 10010-023 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco modifiserte Eagle Medium (DMEM) </td><td> Gibco, Sveits </td><td> 11960-044 </td><td></td></tr><tr><td> Ringer-laktat (uten glukose) </td><td> Bichsel, Sveits </td><td> 133 0002 </td><td></td></tr><tr><td> 6-godt multi-brønn plate </td><td> TPP, Sveits </td><td> 92006 </td><td></td></tr><tr><td> Betadine løsning </td><td> Mundipharma, Sveits </td&gt; <td> 10055025 </td><td></td></tr><tr><td> Kirurgisk hud markør </td><td> Porex kirurgisk, Sveits </td><td> 9560 </td><td></td></tr><tr><td> Stort skjærebrett </td><td></td><td></td><td> Alle merker er mulig </td></tr></tbody></table>

preparation of intact bovine tail intervertebral discs for organ culture

Den intervertebral plate (IVD) er felles for ryggraden koble vertebra til vertebra. Det fungerer å overføre lasting av ryggraden og gi fleksibilitet til ryggraden. Det komponerer av tre avdelinger: den innerste kjernen pulposus (NP) som omfatter ved ringrommet fibrosus (AF), og to cartilaginous gavlene forbinder NP og AF til vertebralis kroppen på begge sider. Discogenic smerter muligens forårsaket av degenerative intervertebral plate sykdom (DDD) og plate herniations har blitt identifisert som et stort problem i vårt moderne samfunn. For å studere mulige mekanismer for IVD degenerasjon, er in vitro orgelkultur systemer med live-plate cellene svært tiltalende. In vitro kultur intakt storfe Senen ved halebeinet IVDs har avansert til en relevant modell system, som gjør studiet av mekano-biologiske aspekter i et godt kontrollerte fysiologiske og mekaniske miljø. Bovine hale IVDs kan skaffes relativt enkelt i høyere tall end er svært lik den menneskelige lumbar IVDs med hensyn til celle tetthet, celle befolkning og dimensjoner. Imidlertid feilet forrige storfe caudal IVD høsting teknikker beholde cartilaginous gavler og beinete gavlene etter 1-2 dager med kultur siden ernæring banene var tydeligvis blokkert av levret blod. Er IVDs de største avascular organer, og dermed næringsstoffer til cellene i NP er utelukkende avhengig av diffusjon gjennom kapillære knopper fra tilstøtende ryggvirvel kroppen. Tilstedeværelse av bein rusk og levret blod på gavl overflater kan hindre næringsstoffer diffusjon inn i midten av platen og kompromiss celleviabilitet. Vår gruppe etablert en relativt rask protokoll for å &quot;knekke&quot;-ut IVDs fra halen med en lav risiko for forurensning. Vi er i stand til permeabilize den ferske snitt bony gavl overflater ved hjelp av et kirurgisk jet lavage system, som fjerner blodpropper og skjæring rusk og svært effektivt gjenåpner ernæring diffusjon veientil midten av IVD. Tilstedeværelsen av veksten plater på begge sider av ryggvirvel bein må unngås, og må fjernes før til kultur. I denne videoen, skissere vi de viktigste trinnene under forberedelse og demonstrere nøkkelen til en vellykket orgelkultur opprettholde høy celleviabilitet i 14 dager under fri hevelse kultur. Kulturen tiden kan utvides når det er hensiktsmessig mekanisk miljø kan opprettholdes ved bruk av mekanisk belastning bioreaktor. Teknikken vist her kan utvides til andre dyrearter som svin, sau og leporine caudal og lumbar IVD isolasjon.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Intact Bovine Tail Intervertebral Discs for Organ Culture at JoVE.com

Preparation of Intact Bovine Tail Intervertebral Discs for Organ Culture

Denne protokollen illustrerer en høsting teknikk for Senen ved halebeinet bovine intervertebral plater for orgel kultur for<em&gt; In vitro</em&gt; Organ kultur.

Utarbeidelse av Intakt Bovine Tail mellomvirvelskiver for orgel Kultur

The intervertebral disc (IVD) is the joint of the spine connecting  vertebra to vertebra. It functions to transmit loading of the spine and give  ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Alginate Hydrogels for Three-Dimensional Organ Culture of Ovaries and Oviducts

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer deaths in women and has a 63% mortality rate in the United States1. The cell type of origin for ...

Preparation of 3D Fibrin Scaffolds for Stem Cell Culture Applications

Utarbeidelse av 3D Fibrin stillaser for Stem Cell Kultur Applications

Stem cells are found in naturally occurring 3D microenvironments in vivo, which are often referred to as the stem cell niche 1. Culturing stem cells ...

Nonhuman Primate Lung Decellularization and Recellularization Using a Specialized Large-organ Bioreactor

Nonhuman Primate Lung Decellularization og Recellularization Ved hjelp av en Specialized Stor-orgel bioreaktor

There are an insufficient number of lungs available to meet current and future organ transplantation needs. Bioartificial tissue regeneration is an ...

Sample Preparation Strategies for Mass Spectrometry Imaging of 3D Cell Culture Models

Prøvepreparering Strategier for massespektrometri Imaging av 3D-Cell Kultur Modeller

Three dimensional cell cultures are attractive models for biological research. They combine the flexibility and cost-effectiveness of cell culture with ...

The Multi-organ Chip - A Microfluidic Platform for Long-term Multi-tissue Coculture

Multi-orgel Chip - En mikrofluid plattform for langsiktig Multi-vev coculture

The ever growing amount of new substances released onto the market and the limited predictability of current in vitro test systems has led to a high need ...

Studying the Stoichiometry of Epidermal Growth Factor Receptor in Intact Cells using Correlative Microscopy

Studerer Støkiometrien av epidermal vekstfaktor reseptor i intakte celler bruker korrelative Mikros

This protocol describes the labeling of epidermal growth factor receptor (EGFR) on COS7 fibroblast cells, and subsequent correlative fluorescence ...

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

en<em&gt; In Vitro</em&gt; Organ Culture Modell av Murine mellomvirvelskive

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and ...

Fabrication and Validation of an Organ-on-chip System with Integrated Electrodes to Directly Quantify Transendothelial Electrical Resistance

Fabrikasjon og validering av en Organ-on-chip System med integrerte elektrodene direkte kvantifisere Transendothelial elektrisk motstand

Organs-on-chips, in vitro models involving the culture of (human) tissues inside microfluidic devices, are rapidly emerging and promise to provide useful ...

Fragility Assessment of Bovine Cortical Bone Using Scratch Tests

Skjørhet vurdering av bovin kortikalt benvev bruker Scratch tester

Bone is a complex hierarchical material with five distinct levels of organization. Factors like aging and diseases like osteoporosis increase the ...

Scalable Fabrication of Stretchable, Dual Channel, Microfluidic Organ Chips

Skalerbar fabrikasjon av elastisk, dobbelt kanalen, Microfluidic Organ Chips

A significant number of lead compounds fail in the pharmaceutical pipeline because animal studies often fail to predict clinical responses in human ...