Name: preparation of intact bovine tail intervertebral discs for organ culture
Uploaded: 2012-02-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Intact Bovine Tail Intervertebral Discs for Organ Culture at JoVE.com

Projektet fick stöd av den schweiziska National Science Foundation (SNF # 310030-127586/1).

1. Intervertebral skiva Skörd <ol><li> Hela längden nötkreatur svansen erhålls från ett lokalt slakteri, om möjligt utan skinn eftersom förekomsten av hud ökar risken för kontaminering (Fig. 2). </li><li> Förbered stor skärbräda och förbereda steril arbetsplats och instrument på toppen av en skärbräda (Fig. 2). </li><li> Förbered under sterila laminärt luftflöde huva steril gasbinda fuktad med 0,9% natriumklorid med 55mm natriumcitrat och tas i varje brunn på 6-brunnar. </li><li> Förbered en bass?...

<ol>
	<li>Lee, C. R., Iatridis, J. C., Poveda, L., Alini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+organ+culture+of+the+bovine+intervertebral+disc:+effects+of+vertebral+endplate+and+potential+for+mechanobiology+studies.">In vitro organ culture of the bovine intervertebral disc: effects of vertebral endplate and potential for mechanobiology studies.</a> Spine (Phila Pa 1976). 31, 515-522 (1976).</li><li>Chan, S. C. W., Gantenbein-Ritter, B., Leung, V. Y., Chan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreserved+intervertebral+disc+with+injected+bone+marrow-derived+stromal+cells:+a+feasibility+study+using+organ+culture.">Cryopreserved intervertebral disc with injected bone marrow-derived stromal cells: a feasibility study using organ culture.</a> Spine. J. 10 (6), 486-496 (2010).</li><li>Chan, S. C., Ferguson, S. J., Wuertz, K., Gantenbein-Ritter, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+Response+of+the+Intervertebral+Disc+to+Repetitive+Short+Term+Cyclic+Torsion.">Biological Response of the Intervertebral Disc to Repetitive Short Term Cyclic Torsion.</a> Spine (Phila Pa 1976). , (2011).</li><li>Gantenbein-Ritter, B., Sprecher, C. M., Chan, S., Illien-J&#252;nger, S., Grad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confocal+imaging+protocols+for+live/dead+staining+in+three-dimensional+carriers.">Confocal imaging protocols for live/dead staining in three-dimensional carriers.</a> Methods Mol. Biol. 740, 127-140 (2011).</li><li>Gantenbein-Ritter, B., Potier, E., Zeiter, S., van der Werf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accuracy+of+three+techniques+to+determine+cell+viability+in+3D+tissues+or+scaffolds.">Accuracy of three techniques to determine cell viability in 3D tissues or scaffolds.</a> Tissue Engineering Part C Methods. 14, 353-358 (2008).</li><li>Rasband, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ImageJ. , (1997).</li><li>Haschtmann, D., Stoyanov, J. V., Ettinger, L., Nolte, L. P., Ferguson, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+novel+intervertebral+disc/endplate+culture+model:+analysis+of+an+ex+vivo+in+vitro+whole-organ+rabbit+culture+system.">Establishment of a novel intervertebral disc/endplate culture model: analysis of an ex vivo in vitro whole-organ rabbit culture system.</a> Spine. 31, 2918-2925 (2006).</li><li>Gantenbein, B., Gr&#252;nhagen, T., Lee, C. R., van Donkelaar, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+organ+culturing+system+for+intervertebral+disc+explants+with+vertebral+endplates:+a+feasibility+study+with+ovine+caudal+discs.">An in vitro organ culturing system for intervertebral disc explants with vertebral endplates: a feasibility study with ovine caudal discs.</a> Spine. 31, 2665-2673 (2006).</li><li>Korecki, C. L., Kuo, C. K., Tuan, R. S., Iatridis, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intervertebral+disc+cell+response+to+dynamic+compression+is+age+and+frequency+dependent.">Intervertebral disc cell response to dynamic compression is age and frequency dependent.</a> J. Orthop. Res. 27, 800-806 (2009).</li><li>Korecki, C. L., MacLean, J. J., Iatridis, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+compression+effects+on+intervertebral+disc+mechanics+and+biology.">Dynamic compression effects on intervertebral disc mechanics and biology.</a> Spine (Phila Pa 1976). 33, 1403-1409 (1976).</li><li>Jim, B., Steffen, T., Moir, J., Roughley, P., Haglund, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+intact+intervertebral+disc+organ+culture+system+in+which+degeneration+can+be+induced+as+a+prelude+to+studying+repair+potential.">Development of an intact intervertebral disc organ culture system in which degeneration can be induced as a prelude to studying repair potential.</a> European Spine Journal. , 1-11 (2011).</li></ol>

Det första steget för en lyckad orgel kultur är att se till att Explantation inte ska förorenas. Svansen ska flås innan du börjar med förfarandet. Varje djurhår förs in i en steril labb kan vara problematiska när det gäller föroreningar. Nötkreatur Svansen ska helst vara så färska som möjligt (detta påverkar första cellernas livskraft). Dessutom är Betadine tvätt rekommenderas för att minska risken för smitta vidare. Istället för att använda en skräddarsydd kniv hållare och en hammare för att...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagensets namn </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer (tillval) </td></tr><tr><td colspan="4"> Färskt nötkött intervertebral skiva vävnad från nötkreatur svansar, från lokala slakteri (helst inom timmar efter slakt och utan skinn). </td></tr><tr><td> Pulsavac Plus AC-systemet </td><td> Zimmer inkl., Schweiz </td><td> 00-5150-486-01 </td><td> Bästa prestanda med hip-sprej huvudet och med AC strömförsörjning (den med 8 AA-batteri fungerar också men är mindre bekväm) </td></tr><tr><td> High Capacity Fläkt Spray w / Splash Shield, 12,7 cm längd </td><td> Zimmer inkl., Schweiz </td><td> 00-5150-175-00 </td><td> Det finns flera sprayhuvuden tillgängligt, testade vi detta ett framgångsrikt </td></tr><tr><td> Skalpell blad # 22 och # 10 </td><td> Swann-Mortpå, England </td><td> # 10: 0201 # 22: 0208 </td><td></td></tr><tr><td> Skalpell knivfästet # 3 och # 4 </td><td> Hausmann, Tyskland </td><td> # 3: 06.103.00 # 4: 06.104.00 </td><td></td></tr><tr><td> Lutz industriella blad </td><td> Lutz, Tyskland </td><td> 1022.0884 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfatbuffrad saltlösning (PBS) </td><td> Invitrogen, Schweiz </td><td> 10010-023 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco s Modified Eagle Medium (DMEM) </td><td> Gibco, Schweiz </td><td> 11960-044 </td><td></td></tr><tr><td> Ringer-laktat lösning (utan glukos) </td><td> Bichsel, Schweiz </td><td> 133 0002 </td><td></td></tr><tr><td> 6-och multi-brunnar </td><td> TPP, Schweiz </td><td> 92.006 </td><td></td></tr><tr><td> Betadine lösning </td><td> Mundipharma, Schweiz </tD&gt; <td> 10055025 </td><td></td></tr><tr><td> Kirurgiska hud markör </td><td> Porex Kirurgiska, Schweiz </td><td> 9560 </td><td></td></tr><tr><td> Stor skärbräda </td><td></td><td></td><td> Varje märke är möjligt </td></tr></tbody></table>

preparation of intact bovine tail intervertebral discs for organ culture

Den intervertebral skiva (IVD) är leden mellan ryggraden ansluta kotan till kotan. Det fungerar att överföra belastning på ryggraden och ger flexibilitet att ryggraden. Det komponerar av tre fack: den innersta kärnan pulposus (NP) som omfattar den annulus fibrosus (AF), och två brosk muskeländplattorna ansluter NP och AF till kotkroppen på båda sidor. Discogenic smärta möjligtvis orsakade av degenerativa intervertebral disksjukdom (DDD) och herniations skivan har identifierats som ett stort problem i vårt moderna samhälle. Undersöka tänkbara mekanismer för IVD-degeneration, är in vitro organsystem kultur med live-skiva celler mycket tilltalande. In vitro kultur intakt nötkreatur Svansrotens IVDs har avancerat till en relevant modell, som gör det möjligt att studera redskap för biologiska aspekter i en väl kontrollerad fysiologiska och mekaniska miljö. Bovin svans IVDs kan erhållas relativt lätt i högre siffror end är mycket lik den mänskliga ländryggen IVDs med avseende på celltäthet, cellpopulationen och dimensioner. Dock inte tidigare nötkreatur caudal IVD skördeteknik behålla brosk muskeländplattorna och beniga muskeländplattorna efter 1-2 dagar av kultur eftersom den näring vägar uppenbarligen blockeras av levrat blod. IVDs är den största avaskulär organ, alltså de näringsämnen till cellerna i NP är uteslutande beroende av diffusion via kapillära knopparna från den intilliggande kotkroppen. Förekomst av ben skräp och levrat blod på ändplattan ytor kan hindra näringsämnen diffusion in i mitten av skivan och kompromisser cellernas livskraft. Vår grupp etablerat en relativt snabb protokoll till &quot;crack&quot;-ut IVDs från svansen med en låg risk för smittspridning. Vi kan permeabilize den nyklippt beniga ändplattan ytor med hjälp av ett kirurgiskt systemet jet magsköljning, vilket tar bort blodproppar och skär skräp och mycket effektivt öppnas igen vägen näring spridningtill mitten av IVD. Närvaron av tillväxten plattor på båda sidor av ryggraden ben måste undvikas och att tas bort före kultur. I denna video, disposition vi viktiga steg vid beredning och visa nyckeln till en framgångsrik orgel kultur upprätthålla hög cellviabiliteten i 14 dagar under fria svullnad kultur. Kulturen tiden kan förlängas vid behov mekanisk miljö kan upprätthållas med hjälp av mekanisk belastning bioreaktor. Tekniken visade här kan utvidgas till andra djurarter, såsom svin, får och HAR-stjärt-och ländrygg IVD isolering.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Intact Bovine Tail Intervertebral Discs for Organ Culture at JoVE.com

Preparation of Intact Bovine Tail Intervertebral Discs for Organ Culture

Detta protokoll illustrerar en skörd teknik för Svansrotens nötkreatur diskarna för orgel kultur för<em&gt; In vitro</em&gt; Orgel kultur.

Beredning av Intakt Bovin Tail diskarna för orgel kultur

The intervertebral disc (IVD) is the joint of the spine connecting  vertebra to vertebra. It functions to transmit loading of the spine and give  ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Alginate Hydrogels for Three-Dimensional Organ Culture of Ovaries and Oviducts

Alginat Hydrogeler för tredimensionella Organ Kultur äggstockarna och äggledarna

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer deaths in women and has a 63% mortality rate in the United States1. The cell type of origin for ...

Preparation of 3D Fibrin Scaffolds for Stem Cell Culture Applications

Beredning av 3D Fibrin ställningar för Kultur Stem Cell Applications

Stem cells are found in naturally occurring 3D microenvironments in vivo, which are often referred to as the stem cell niche 1. Culturing stem cells ...

Nonhuman Primate Lung Decellularization and Recellularization Using a Specialized Large-organ Bioreactor

There are an insufficient number of lungs available to meet current and future organ transplantation needs. Bioartificial tissue regeneration is an ...

Sample Preparation Strategies for Mass Spectrometry Imaging of 3D Cell Culture Models

Provberedning Strategier för masspektrometri avbildning av 3D cellodlingsmodeller

Three dimensional cell cultures are attractive models for biological research. They combine the flexibility and cost-effectiveness of cell culture with ...

The Multi-organ Chip - A Microfluidic Platform for Long-term Multi-tissue Coculture

Multi-orgeln Chip - En mikroflödes Plattform för Långsiktig Flervävnads Coculture

The ever growing amount of new substances released onto the market and the limited predictability of current in vitro test systems has led to a high need ...

Studying the Stoichiometry of Epidermal Growth Factor Receptor in Intact Cells using Correlative Microscopy

Studie stökiometrin hos receptorn för epidermal tillväxtfaktor i intakta celler genom att använda Korrelat Mikroskopi

This protocol describes the labeling of epidermal growth factor receptor (EGFR) on COS7 fibroblast cells, and subsequent correlative fluorescence ...

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

En<em&gt; In Vitro</em&gt; Organ Kultur Modell av murina mellankotskivan

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and ...

Fabrication and Validation of an Organ-on-chip System with Integrated Electrodes to Directly Quantify Transendothelial Electrical Resistance

Tillverkning och validering av en orgel-on-chip System med integrerad elektroder direkt kvantifiera Transendothelial resistans

Organs-on-chips, in vitro models involving the culture of (human) tissues inside microfluidic devices, are rapidly emerging and promise to provide useful ...

Fragility Assessment of Bovine Cortical Bone Using Scratch Tests

Bräcklighet bedömning av nötkreatur kortikala benet med hjälp av Scratch tester

Bone is a complex hierarchical material with five distinct levels of organization. Factors like aging and diseases like osteoporosis increase the ...

Scalable Fabrication of Stretchable, Dual Channel, Microfluidic Organ Chips

Skalbar tillverkning av töjbart, Dual Channel, ultrakalla orgel Chips

A significant number of lead compounds fail in the pharmaceutical pipeline because animal studies often fail to predict clinical responses in human ...