Name: measuring fast calcium fluxes in cardiomyocytes
Uploaded: 2011-11-29T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Fast Calcium Fluxes in Cardiomyocytes at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة والمنح 2R01 GM53132 GM071558 P50.

1. تحميل الخلايا مع مؤشرات الكالسيوم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة الخلايا في 35mm الزجاج أسفل أطباق ماتيك (أو أي أسفل الزجاج الآخرين الذين يشاهدون غرف). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا باستخدام الابتدائي myocytes معطف قبل يوم 1 غرف مع 10μg/ml laminin. myocytes ?...

<ol>
	<li>Cheng, H., Lederer, M. R., Lederer, W. J., Cannell, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+sparks+and+[Ca2+]i+waves+in+cardiac+myocytes.">Calcium sparks and [Ca2+]i waves in cardiac myocytes.</a> Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 270, 148-159 (1996).</li><li>Cheng, H., Lederer, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+Sparks.">Calcium Sparks.</a> Physiol. Rev. 88, 1491-1545 (2008).</li><li>Rebecchi, M. J., Pentyala, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure,+function,+and+control+of+phosphoinositide-specific+phospholipase.">Structure, function, and control of phosphoinositide-specific phospholipase.</a> C. Physiol.Rev. 80, 1291-1335 (2000).</li><li>Suh, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+roles+of+phosphoinositide-specific+phospholipase+C+isozymes.">Multiple roles of phosphoinositide-specific phospholipase C isozymes.</a> BMB reports. 41, 415-434 (2008).</li><li>Schlegel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crowded+little+caves:+structure+and+function+of+caveolae.">Crowded little caves: structure and function of caveolae.</a> Cell. Signal. 10, 457-463 (1998).</li><li>Anderson, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+caveolae+membrane+system.">The caveolae membrane system.</a> Annu. Rev. Biochem. 67, 199-225 (1998).</li><li>Sengupta, P., Philip, F., Scarlata, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caveolin-1+alters+Ca2++signal+duration+through+specific+interaction+with+the+G{alpha}q+family+of+G+proteins.">Caveolin-1 alters Ca2+ signal duration through specific interaction with the G{alpha}q family of G proteins.</a> J. Cell. Sci. 121, 1363-1372 (2008).</li><li>Guo, Y., Golebiewska, U., Scarlata, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+Ca2++Activity+in+Cardiomyocytes+through+Caveolae-G[alpha]q+Interactions.">Modulation of Ca2+ Activity in Cardiomyocytes through Caveolae-G[alpha]q Interactions.</a> Biophysical. Journal. 100, 1599-1607 (1016).</li><li>Rybin, V. O., Xu, X., Lisanti, M. P., Steinberg, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+targeting+of+beta+-adrenergic+receptor+subtypes+and+adenylyl+cyclase+to+cardiomyocyte+caveolae.+A+mechanism+to+functionally+regulate+the+cAMP+signaling+pathway.">Differential targeting of beta -adrenergic receptor subtypes and adenylyl cyclase to cardiomyocyte caveolae. A mechanism to functionally regulate the cAMP signaling pathway.</a> J. Biol. Chem. 275, 41447-41457 (2000).</li><li>Tovey, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+puffs+are+generic+InsP3-activated+elementary+calcium+signals+and+are+downregulated+by+prolonged+hormonal+stimulation+to+inhibit+cellular+calcium+responses.">Calcium puffs are generic InsP3-activated elementary calcium signals and are downregulated by prolonged hormonal stimulation to inhibit cellular calcium responses.</a> J. Cell. Sci. 114, 3979-3989 (2001).</li><li>Lohn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ignition+of+Calcium+Sparks+in+Arterial+and+Cardiac+Muscle+Through+Caveolae.">Ignition of Calcium Sparks in Arterial and Cardiac Muscle Through Caveolae.</a> Circ. Res. 87, 1034-1039 (2000).</li></ol>

طورنا طريقة لعرض وعزل إشارات الكالسيوم العضلية السريعة في الحي. بينما سبق لظروف تجريبية لهذه القياسات المطبقة على نظم خلية أخرى 10 فضلا عن 11 العضلية ، واستخدام رسوم بيانية وتحليل البيانات من بن يسمح كا كثير من 2 إلى الحصول عليها + الأحداث. يمكن أ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> ABCD1234 </td><td></td></tr></tbody></table>

measuring fast calcium fluxes in cardiomyocytes

العضلية لديك عدة كا 2 + تدفقات متفاوتة المدة التي تعمل معا لتحسين 1،2 وظيفة. تغييرات في كا 2 + ينظم النشاط في الغالب استجابة لعوامل خارج الخلية التي مسار فسفوليباز ف Cβ - Gα المترجمة على غشاء البلازما التي تحفزها عوامل مثل أستيل 3،4. لقد وجدنا في الآونة الأخيرة يمكن أن اصطاد تنشيط مجالات البلازما بروتين يسمى الغشاء caveolae 5،6 Gα ف 7. هذا فخ له تأثير في تحقيق استقرار الدولة في تنشيط ف Gα وما ينتج عنها من مدة طويلة في كاليفورنيا في 2 + إشارات العضلية وغيرها من أنواع الخلايا 8. وكشف لنا هذه النتيجة مفاجئة من خلال قياس ردود الكالسيوم الحيوية على نطاق والعضلية السريعة في الحي. لفترة وجيزة ، يتم تحميل خلايا مع مؤشر كا الفلورسنت + 2. في دراساتنا ، استخدمنا كا 2 + الخضراء (Invitrogen ، وفيج) الذي يسلك زيادة في كثافة الانبعاثات مضان على ربط أيونات الكالسيوم. ثم يتم تسجيل كثافة مضان لاستخدام وضع خط مسح ليزر متحد البؤر المسح المجهر. هذا الأسلوب يسمح اقتناء السريع للدوام من كثافة مضان بالبكسل على طول الخط المحدد ، وإنتاج عدة مئات من آثار الزمن على مقياس الوقت ميكروثانية. يتم نقل هذه الآثار سريع جدا في التفوق ومن ثم الى Sigmaplot للتحليل ، ومقارنة آثار حصل للضوضاء الإلكترونية ، وصبغ الحرة ، وضوابط أخرى. تشريح كا 2 + ردود معدلات تدفق مختلفة ، وأجرينا تحليلا الرسم البياني ان اهمال كثافة بكسل مع مرور الوقت. Binning يسمح لنا أكثر من 500 مجموعة آثار بمسح ووضع تصور لنتائج المترجمة مكانيا وزمانيا على قطعة واحدة. وبالتالي ، يمكن للموجات بطيئة الكالسيوم + 2 التي يصعب تمييز عندما يتم مضافين التفحص بسبب التنسيب الذروة المختلفة ، والضوضاء ، وينظر بسهولة فيرسوم بيانية للاهمال. تدفقات سريع جدا في النطاق الزمني لقياس توزيع تظهر ضيقة من شدة في صناديق وقت قصير جدا بينما تعد كا 2 + الموجات تظهر البيانات اهمال مع توزيع واسعة في صناديق لوقت أطول. هذه التوزيعات زمنية مختلفة تسمح لنا بتحليل توقيت كا 2 + الدفقات في الخلايا ، وتحديد تأثيرها على الأحداث الخلوية المختلفة.

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Fast Calcium Fluxes in Cardiomyocytes at JoVE.com

Measuring Fast Calcium Fluxes in Cardiomyocytes

نقدم طريقة سريعة لعزل الأحداث الكالسيوم (ميكروثانية) أبطأ من الدفقات في الخلايا الحية باستخدام ليزر متحد البؤر المجهر. الأسلوب التدابير تقلبات كثافة مضان من المؤشرات التي تفحص الكالسيوم خط بكسل تسجيل عدة مئات في الخلية. تحليل الرسم البياني يسمح لنا عزل جداول زمنية لتدفقات الكالسيوم مختلفة.

قياس الكالسيوم السريع في تدفقاتها العضلية

Cardiomyocytes have multiple Ca2+ fluxes of varying duration that work together to optimize function 1,2. Changes in Ca2+ activity in response to ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Near Plasma Membrane and Global Intracellular Calcium Dynamics in Astrocytes

قياس الأدنى غشاء البلازما والعالمية حيوية الكالسيوم بين الخلايا في الخلايا النجمية

The brain contains glial cells.  Astrocytes, a type of glial cell, have long been known to provide a passive supportive role to neurons. However, ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

كفاءة اشتقاق السلائف القلب البشري وافرة القوة العضلية من خلايا المنشأ الجنينية البشرية التعريفي مع جزيء صغير

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Isolation and Kv Channel Recordings in Murine Atrial and Ventricular Cardiomyocytes

العزلة وتسجيلات قناة كيلو فولت في الفئران Cardiomyocytes الأذيني البطيني و

KCNE genes encode for a small family of Kv channel ancillary subunits that form heteromeric complexes with Kv channel alpha subunits to modify their ...

Isolation and Culture of Neonatal Mouse Cardiomyocytes

العزلة وثقافة الأطفال حديثي الولادة ماوس العضلية

Cultured neonatal cardiomyocytes have long been used to study  myofibrillogenesis and myofibrillar functions. Cultured cardiomyocytes allow  for easy ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

قياس الاستجابة التغذية الناجم عن الجلوتاثيون في حيدرة

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

Voltage and Calcium Dual Channel Optical Mapping of Cultured HL-1 Atrial Myocyte Monolayer

الجهد والكالسيوم مزدوجة القناة البصرية رسم خرائط مثقف HL-1 الرجفان العضلية واحد رقائق

Optical mapping has proven to be a valuable technique to detect cardiac electrical activity on both intact ex vivo hearts and in cultured myocyte ...

Measuring RAN Peptide Toxicity in C. elegans

Measuring RAN Peptide Toxicity in C. elegans

قياس سمية الببتيد RAN في C. elegans

C. elegans is commonly used to model age-related neurodegenerative diseases caused by repeat expansion mutations, such as Amyotrophic Lateral Sclerosis ...

Forward Genetic Screen Using Transgenic Calcium Reporter Aequorin to Identify Novel Targets in Calcium Signaling

إلى الأمام الشاشة الجينية باستخدام المعدلة وراثيا مراسل الكالسيوم أيكورين لتحديد أهداف جديدة في إشارات الكالسيوم

Forward genetic screens have been important tools in the unbiased identification of genetic components involved in several biological pathways. The basis ...

Light Sheet Microscopy of Fast Cardiac Dynamics in Zebrafish Embryos

المجهر ورقة خفيفة من ديناميات القلب السريع في أجنة حمار وحشي

Embryonic cardiac research has greatly benefited from advances in fast in vivo light sheet fluorescence microscopy (LSFM). Combined with the rapid ...

Measuring Mitochondrial Substrate Flux in Recombinant Perfringolysin O-Permeabilized Cells

قياس تدفق الركيزة الميتوكوندريا في الخلايا المتالفة Perfringolysin O-Permeabilized

Mitochondrial substrate flux is a distinguishing characteristic of each cell type, and changes in its components such as transporters, channels, or ...