Name: immunostaining of dissected zebrafish embryonic heart
Uploaded: 2012-01-10T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart at JoVE.com

نشكر Beninio Jomok لمساعدته في تربية الزرد. ويتم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة HL81753.

1. إعداد الشرائح وغرفة ترطيب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن جعل غرفة ترطيب من مربع مثل مربع تلميح تفرغ. التفاف كل من الغرفة وتغطية برقائق الألومنيوم لحماية العينات بعيدا عن الضوء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> داخل الغرفة ، ووضع كومة من المناشف ال...

<ol>
	<li>Shin, J. T., Fishman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+Zebrafish+to+human:+modular+medical+models.">From Zebrafish to human: modular medical models.</a> Annu. Rev. Genomics Hum. Genet. 3, 311-340 (2002).</li><li>Beis, D., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+cell+biology:+following+the+zebrafish+trend.">In vivo cell biology: following the zebrafish trend.</a> Trends. Cell. Biol. 16, 105-112 (2006).</li><li>Schoenebeck, J. J., Yelon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illuminating+cardiac+development:+Advances+in+imaging+add+new+dimensions+to+the+utility+of+zebrafish+genetics.">Illuminating cardiac development: Advances in imaging add new dimensions to the utility of zebrafish genetics.</a> Semin. Cell. Dev. Biol. 18, 27-35 (2007).</li><li>Nasevicius, A., Ekker, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+targeted+gene+'knockdown'+in+zebrafish.">Effective targeted gene 'knockdown' in zebrafish.</a> Nat. Genet. 26, 216-220 (2000).</li><li>Dahme, T., Katus, H. A., Rottbauer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fishing+for+the+genetic+basis+of+cardiovascular+disease.">Fishing for the genetic basis of cardiovascular disease.</a> Dis. Model Mech. 2, 18-22 (2009).</li><li>Huang, W., Zhang, R., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibrillogenesis+in+the+developing+zebrafish+heart:+A+functional+study+of+tnnt2.">Myofibrillogenesis in the developing zebrafish heart: A functional study of tnnt2.</a> Dev. Biol. 331, 237-249 (2009).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book. , (2007).</li><li>Buckingham, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle:+the+regulation+of+myogenesis.">Muscle: the regulation of myogenesis.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 4, 745-751 (1994).</li><li>Wheelock, M. J., Knudsen, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherins+and+associated+proteins.">Cadherins and associated proteins.</a> Vivo. 5, 505-513 (1991).</li><li>Sun, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+hypertrophy+involves+both+myocyte+hypertrophy+and+hyperplasia+in+anemic+zebrafish.">Cardiac hypertrophy involves both myocyte hypertrophy and hyperplasia in anemic zebrafish.</a> PLoS One. 4, e6596-e6596 (2009).</li><li>Auman, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+modulation+of+cardiac+form+through+regionally+confined+cell+shape+changes.">Functional modulation of cardiac form through regionally confined cell shape changes.</a> PLoS Biol. 5, e53-e53 (2007).</li><li>Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+zebrafish+essential+and+regulatory+myosin+light+chains+reduces+cardiac+function+through+distinct+mechanisms.">Depletion of zebrafish essential and regulatory myosin light chains reduces cardiac function through distinct mechanisms.</a> Cardiovasc. Res. 79, 97-108 (2008).</li></ol>

بالمقارنة مع الأساليب الكلاسيكية كلها immunostaining جبل ، لدينا وسيلة لديه المزايا التالية. أولا ، يمكن الفلورسنت أقوى بكثير الإشارات التي تم الحصول عليها باستمرار نظرا لتغلغل المحسنة. في أسلوب جبل immunostaining كله ، وأنسجة الجلد الكثيفة المحيطة القلب إلى خفض كبير في اختراق ا?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> tricaine </td><td> البحوث العضوية </td><td> 3007T </td></tr><tr><td> الفورمالديهايد </td><td> Polysciences </td><td> 04018 </td></tr><tr><td> حقنة الانسولين </td><td> بيكتون ديكنسون </td><td> 329461 </td></tr><tr><td> تريتون - X - 100 </td><td> سيغما </td><td> T8532 </td></tr><tr><td> مكافحة β - catenin الأضداد </td><td> سيغما </td><td> C7207 </td></tr><tr><td> الأضداد المضادة للMef2c </td><td> سانتا كروز في مجال التكنولوجيا الحيوية </td><td> SC313 </td></tr><tr><td> F59 </td><td> Zfin </td><td></td></tr><tr><td> مكافحة α - actinin الأضداد </td><td> سيغما </td><td> A7811 </td></tr><tr><td> الأضداد المضادة للأمثاله </td><td> الخلية إشارات </td><td> # 3862 </td></tr><tr><td> ثر اليكسا 568 عنزة المضادة مفتش الأرنب </<html> TD&gt; <td> Invitrogen </td><td> A11011 </td></tr><tr><td> ثر اليكسا 488 عنزة المضادة الماوس IgG1 </td><td> Invitrogen </td><td> A21121 </td></tr><tr><td> تصاعد المتوسطة لمضان </td><td> النواقل </td><td> H - 1200 </td></tr><tr><td> ImmEdge القلم </td><td> النواقل </td><td> H - 4000 </td></tr><tr><td> بولي - L - lysin الشرائح المغلفة </td><td> الإلكترون المجهري العلوم </td><td> 63410-01 </td></tr><tr><td> مجهر الغطاء الزجاجي </td><td> الصياد </td><td> 12-543 - D </td></tr><tr><td> شرائح المجهر Concaved </td><td> الصياد </td><td> 7-1305-8 </td></tr><tr><td> تشريح المجهر </td><td> ايكا MZ95 </td><td></td></tr><tr><td> مجمع المجهر </td><td> زايس </td><td> Axioplan2 </td></tr><tr><td> ApoTome </td><td> زايس </td><td></td></tr></tbody></table> PBST : 1 × PBS 0.5 ٪ تريتون 100 - X الأنف والحنجرة &quot;&gt; 25X Tricaine : 400 ملغ Tricaine 97.9 مل DDH 2 O 2.1 مل (1M تريس pH9) ضبط درجة الحموضة إلى 7.0

immunostaining of dissected zebrafish embryonic heart

الزرد الجنين تصبح شعبية في الفقاريات نموذج الجسم الحي لدراسة التنمية القلب وأمراض القلب البشري بسبب علم الأجنة وعلم الوراثة لها فائدة 1،2. حوالي 100-200 الأجنة متوفرة في كل أسبوع من زوج واحد من السمك الكبار. الأجنة الشفافة التي وضع الرحم السابقين يجعلها مثالية لتقييم عيوب القلب 3. ويمكن التلاعب بها على التعبير عن أي الجينات عبر تقنية الحمض النووي الريبي morpholino أو الحقن 4. علاوة على ذلك ، لقد ولدت قدما شاشات الوراثية بالفعل قائمة من المسوخ التي تؤثر على وجهات نظر مختلفة لتخلق القلب 5. جبل immunostaining كله هو أسلوب هام في هذا النموذج الحيواني للكشف عن نمط التعبير عن هذا البروتين إلى الأنسجة المستهدفة خاصة 6. ومع ذلك ، فقد كانت الصور ذات الدقة العالية التي يمكن أن تكشف عن الهياكل الخلوية أو التحت خلوية الصعبة ، ويرجع ذلك أساسا إلى locat البدنيةايون القلب وتغلغل الفقيرة من الأجسام المضادة. هنا ، نقدم طريقة لمعالجة هذه الاختناقات التي تشريح قلبية للمرة الأولى وإجراء عملية التلوين ثم على سطح شريحة المجهر. لمنع فقدان العينات الصغيرة والقلب لتسهيل التعامل مع حل ، ونحن يقتصر عينات القلب ضمن دائرة على سطح المجهر الشرائح التي رسمها قلم immEdge. بعد التلوين ، ويمكن للاشارات مباشرة عن طريق الملاحظة مضان المجهر المركب. لدينا وسيلة جديدة تحسن كبير في اختراق للأضداد ، لأن القلب من الأسماك الجنينية يتكون فقط من طبقات الخلايا قليلة. ويمكن الحصول على صور ذات جودة عالية من قلوب سليمة ضمن الموكب الكثير من الوقت لخفض الأجنة الزرد الذين تتراوح أعمارهم بين يوم 2 إلى 6 أيام. يمكن أن يكون لدينا وسيلة لتمديد يحتمل صمة تشريح الأجهزة الأخرى سواء من الزرد أو الحيوانات الصغيرة الأخرى.

Watch this Scientific Journal Video about Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart at JoVE.com

Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart

وصفت وسيلة سريعة لإجراء immunostaining القلب الجنينية الزرد. بالمقارنة مع نهج جبل immunostaining كله ، هذا الأسلوب يزيد بشكل كبير من انتشار الأجسام المضادة ، والذي يسمح بالحصول على صور عالية الدقة التي تكشف عن الهياكل الخلوية / التحت خلوية في القلب في غضون فترة زمنية أقل بكثير التجهيز.

Immunostaining تشريح القلب الجنينية اسماك الزرد

Zebrafish embryo becomes a popular in vivo vertebrate model for studying cardiac development and human heart diseases due to its advantageous embryology ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

يعيش تصوير الدماغ الجنينية اسماك الزرد بواسطة الميكروسكوب متحد البؤر

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Tissue Targeted Embryonic Chimeras: Zebrafish Gastrula Cell Transplantation

الأنسجة الجنينية الوهم المستهدفة : اسماك الزرد المعيدة زرع الخلايا

Certain fundamental questions in the field of developmental biology can only be answered when cells are placed in novel environments or when small groups ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

إعداد الأجنة المجهري للإلكترون من ذبابة الفاكهة أنبوب القلب الجنينية

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues

Microdissection من الأنسجة الجنينية العين اسماك الزرد

Zebrafish is a popular animal model for research on eye development because of its rapid ex utero development and good fecundity. By 3 days post ...

Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo

كله يشن التحليل المناعى للالجنينية الاطراف الأوعية الدموية الجلدية : نظام نموذجي لدراسة الأوعية الدموية المتفرعة التشكل في الأجنة

Whole-mount immunohistochemical analysis for imaging the entire vasculature is pivotal for understanding the cellular mechanisms of branching ...

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

تشريح القلب في اليرقات ، اسماك الزرد الأحداث والكبار ، دانيو rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

نظام ل<em&gt; خارج الجسم</em&gt; التثقيف البنكرياس الجنينية

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle

الليزر بإلحاق الضرر من العضلات الهيكلية اسماك الزرد الجنينية

Various experimental approaches have been used in mouse to induce muscle injury with the aim to study muscle regeneration, including myotoxin injections ...

Analysis of Embryonic and Larval Zebrafish Skeletal Myofibers from Dissociated Preparations

تحليل الجنينية واليرقات الزرد الهيكل العظمي Myofibers من الاستعدادات فصلها

The zebrafish has  proven to be a valuable model system for exploring skeletal muscle function and  for studying human muscle diseases. Despite  the many ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

رواية<em&gt; خارج الحي</em&gt; الطريقة الثقافة لالجنينية القلب

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...