Name: immunostaining of dissected zebrafish embryonic heart
Uploaded: 2012-01-10T12:00:00
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우리는 zebrafish 축산 그의 도움 Beninio Jomok 주셔서 감사합니다. 이 작품은 NIH HL81753으로 후원됩니다.

1. 슬라이드의 준비 및 humidified 챔버 <ol><li> humidified 챔버는 비운 팁 박스 같은 상자에서 만들 수 있습니다. 챔버와 빛으로부터 샘플을 보호하기 위해 알루미늄 호일로 커버를 모두 넣어. </li><li> 챔버 내부, 건조에서 심장 샘플을 방지할 수 있습니다 챔버 내의 습도를 유지하기 위해 젖은 종이 수건 더미를 넣어. 슬라이드에 선반으로 종이 타월 위에 작은 microplate를 설정합니다. </li><li> 5x5 mm에 대?...

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	<li>Shin, J. T., Fishman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+Zebrafish+to+human:+modular+medical+models.">From Zebrafish to human: modular medical models.</a> Annu. Rev. Genomics Hum. Genet. 3, 311-340 (2002).</li><li>Beis, D., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+cell+biology:+following+the+zebrafish+trend.">In vivo cell biology: following the zebrafish trend.</a> Trends. Cell. Biol. 16, 105-112 (2006).</li><li>Schoenebeck, J. J., Yelon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illuminating+cardiac+development:+Advances+in+imaging+add+new+dimensions+to+the+utility+of+zebrafish+genetics.">Illuminating cardiac development: Advances in imaging add new dimensions to the utility of zebrafish genetics.</a> Semin. Cell. Dev. Biol. 18, 27-35 (2007).</li><li>Nasevicius, A., Ekker, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+targeted+gene+'knockdown'+in+zebrafish.">Effective targeted gene 'knockdown' in zebrafish.</a> Nat. Genet. 26, 216-220 (2000).</li><li>Dahme, T., Katus, H. A., Rottbauer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fishing+for+the+genetic+basis+of+cardiovascular+disease.">Fishing for the genetic basis of cardiovascular disease.</a> Dis. Model Mech. 2, 18-22 (2009).</li><li>Huang, W., Zhang, R., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibrillogenesis+in+the+developing+zebrafish+heart:+A+functional+study+of+tnnt2.">Myofibrillogenesis in the developing zebrafish heart: A functional study of tnnt2.</a> Dev. Biol. 331, 237-249 (2009).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book. , (2007).</li><li>Buckingham, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle:+the+regulation+of+myogenesis.">Muscle: the regulation of myogenesis.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 4, 745-751 (1994).</li><li>Wheelock, M. J., Knudsen, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherins+and+associated+proteins.">Cadherins and associated proteins.</a> Vivo. 5, 505-513 (1991).</li><li>Sun, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+hypertrophy+involves+both+myocyte+hypertrophy+and+hyperplasia+in+anemic+zebrafish.">Cardiac hypertrophy involves both myocyte hypertrophy and hyperplasia in anemic zebrafish.</a> PLoS One. 4, e6596-e6596 (2009).</li><li>Auman, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+modulation+of+cardiac+form+through+regionally+confined+cell+shape+changes.">Functional modulation of cardiac form through regionally confined cell shape changes.</a> PLoS Biol. 5, e53-e53 (2007).</li><li>Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+zebrafish+essential+and+regulatory+myosin+light+chains+reduces+cardiac+function+through+distinct+mechanisms.">Depletion of zebrafish essential and regulatory myosin light chains reduces cardiac function through distinct mechanisms.</a> Cardiovasc. Res. 79, 97-108 (2008).</li></ol>

고전 온 마운트 immunostaining 방법에 비해, 우리의 방법은 다음과 같은 장점이있다. 첫째, 훨씬 강한 형광 신호를 지속적으로 개선 침투력으로 인해 얻을 수 있습니다. 전체 마운트 immunostaining 방법에서 마음을 둘러싼 치밀한 피부 조직이 상당히 전신 높은 배경의 결과로, 많은 항체의 침투를 감소. 이 문제는 3 일 후 수정 (dpf)보다 오래된 배아에 특히 심각합니다. 반대로, 해부하는 마음은 훨씬 더 침...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> tricaine </td><td> 연구 유기물 </td><td> 3007T </td></tr><tr><td> 포름 알데히드 </td><td> Polysciences </td><td> 04,018 </td></tr><tr><td> 인슐린 주사기 </td><td> Becton 디킨슨 </td><td> 329,461 </td></tr><tr><td> 트리톤 - X - 100 </td><td> 시그마 </td><td> T8532 </td></tr><tr><td> 안티 β - catenin 항체 </td><td> 시그마 </td><td> C7207 </td></tr><tr><td> 안티 Mef2c 항체 </td><td> 산타 크루즈 생명 공학 </td><td> SC313 </td></tr><tr><td> F59 </td><td> Zfin </td><td></td></tr><tr><td> 안티 α - actinin 항체 </td><td> 시그마 </td><td> A7811 </td></tr><tr><td> 안티 Ilk 항체 </td><td> 세포 신호 </td><td> # 3862 </td></tr><tr><td> 알렉사 형석 568 염소 안티 토끼 IgG </<html> TD&gt; <td> Invitrogen </td><td> A11011 </td></tr><tr><td> 알렉사 형석 488 염소 안티 마우스 IgG1 </td><td> Invitrogen </td><td> A21121 </td></tr><tr><td> 형광 장착 매체 </td><td> 벡터 </td><td> H - 1200 </td></tr><tr><td> ImmEdge 펜 </td><td> 벡터 </td><td> H - 4000 </td></tr><tr><td> 폴리 - L - lysin 코팅 슬라이드 </td><td> 전자 현미경 과학 </td><td> 63410-01 </td></tr><tr><td> 현미경 덮개 유리 </td><td> 어부 </td><td> 12-543 - D </td></tr><tr><td> Concaved 현미경 슬라이드 </td><td> 어부 </td><td> 7-1305-8 </td></tr><tr><td> 해부 현미경 </td><td> Leica MZ95 </td><td></td></tr><tr><td> 복합 현미경 </td><td> 자이스 혈구 </td><td> Axioplan2 </td></tr><tr><td> ApoTome </td><td> 자이스 혈구 </td><td></td></tr></tbody></table> PBST : 1 X PBS 0.5 % 트리톤 X - 100 엔트 &quot;&gt; 25X Tricaine : 400 밀리그램 Tricaine 97.9 ML ddH 2 O 2.1 ML (1M 트리스 pH9) 7.0 산도를 조정

immunostaining of dissected zebrafish embryonic heart

Zebrafish의 배아는 심장 개발과 유리 발생학 및 유전학 1,2으로 인해 인간의 심장 질환을 공부에 대한 생체내의 척추 모델의 인기가됩니다. 약 100-200 배아는 성인 물고기 한 쌍의에서 매주 쉽게 사용할 수 있습니다. 예 utero을 개발 투명 태아는 심장 결함에게 3 평가에 이상적합니다. 어떤 유전자의 표현은 morpholino 기술 또는 RNA 사출 사를 통해 조작하실 수 있습니다. 또한, 앞으로 유전자 스크린은 이미 cardiogenesis 5 가지 관점에 영향을 미칠 돌연변이의 목록을 생성합니다. 전체 마운트 immunostaining는 특정 조직 6 타겟 단백질의 표현 패턴을 나타내기 위해이 동물 모델에서 중요한 기술입니다. 그러나, 세포 또는 subcellular 구조를 확인할 수 있습니다 고해상도 이미지는 실제 locat으로 인해 주로 어려운되었습니다마음과 항체의 가난한 들어간 이온. 여기, 우리가 먼저 마음을 해부 다음 현미경 슬라이드의 표면에 얼룩 과정을 실시하여 이러한 병목 현상을 해결하기 위해 방법을 제시한다. 작은 마음이 샘플의 손실을 방지하기 위해 및 솔루션 처리를 촉진하기 위해, 우리는 immEdge 펜으로 그려진 현미경의 표면 슬라이드에 동그라미 안에 심장 샘플을 제한. 얼룩 후, 형광 신호를 직접 복합 현미경으로 볼 수 있습니다. 배아 물고기의 마음은 몇 가지 세포 레이어로 구성되어부터 새로운 방법, 항체에 대한 침투를 상당히 향상시킵니다. 그대로 마음의 고품질 이미지는 일 2 일 6 세 zebrafish 배아에 대해 훨씬 감소 행렬 시간 내에 얻을 수 있습니다. 우리의 방법은 잠재적으로 zebrafish이나 다른 작은 동물 중 하나에서 해부하는 다른 장기를 얼룩이 확장될 수 있습니다.

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Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart

zebrafish 배아 심장의 immunostaining를 수행하는 빠른 방법이 설명되어 있습니다. 전체 마운트 immunostaining 접근 방식에 비해,이 방법은 크게 크게 감소 처리 시간 이내에 심장에 세포 / subcellular 구조를 공개 고해상도 이미지를 얻는 수있는 항체의 침투를 증가시킵니다.

해부 Zebrafish 배아 심장의 Immunostaining

Zebrafish embryo becomes a popular in vivo vertebrate model for studying cardiac development and human heart diseases due to its advantageous embryology ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

공촛점 현미경으로 Zebrafish 배아 뇌 영상 라이브

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

연구

생물학

Tissue Targeted Embryonic Chimeras: Zebrafish Gastrula Cell Transplantation

조직 타겟 배아 Chimeras : Zebrafish Gastrula 세포 이식

Certain fundamental questions in the field of developmental biology can only be answered when cells are placed in novel environments or when small groups ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

의 전자 현미경을위한 배아의 준비 Drosophila 태아의 심장 관

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues

Zebrafish 배아 눈 조직의 Microdissection

Zebrafish is a popular animal model for research on eye development because of its rapid ex utero development and good fecundity. By 3 days post ...

Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo

배아 림브 스킨 Vasculature에 대한 전체 마운트 Immunohistochemical 분석 : 엠브료에 혈관 분기 Morphogenesis를 공부하는 모델 시스템

Whole-mount immunohistochemical analysis for imaging the entire vasculature is pivotal for understanding the cellular mechanisms of branching ...

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

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애벌레의 심장 해부, 소년과 성인 Zebrafish, Danio rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

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위한 시스템<em&gt; 예 생체</em배아 췌장의&gt; 배양

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Various experimental approaches have been used in mouse to induce muscle injury with the aim to study muscle regeneration, including myotoxin injections ...

Analysis of Embryonic and Larval Zebrafish Skeletal Myofibers from Dissociated Preparations

해리 된 준비에서 배아와 애벌레 Zebrafish의 골격 근섬유의 분석

The zebrafish has  proven to be a valuable model system for exploring skeletal muscle function and  for studying human muscle diseases. Despite  the many ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

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소설<em&gt; 생체</em배아 마우스 사랑을&gt; 문화 방법

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...