Name: immunostaining of dissected zebrafish embryonic heart
Uploaded: 2012-01-10T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart at JoVE.com

Biz Beninio Jomok Zebra balığı yetiştiriciliği yaptığı yardım için teşekkür ederim. Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüsü, HL81753 tarafından finanse edilmektedir.

1. Slayt hazırlanması ve nemlendirilmiş odasına <ol><li> Nemlendirilmiş odası boşaltılmış bir ucu kutusu gibi bir kutu yapılabilir. Odası ve örnekleri ışıktan korumak için alüminyum folyo ile kapağı sarın. </li><li> Odanın içinde, kalbinde örnekleri kurumasını önlemek odanın içinde nem, korumak için bir yığın ıslak kağıt havlu koyun. Slaytlar için bir raf olarak kağıt havlu üstüne küçük bir mikroplak ayarlayın. </li><li> Kalp 5x5 mm boyutunda numuneler için kuyu immEdge ka...

<ol>
	<li>Shin, J. T., Fishman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+Zebrafish+to+human:+modular+medical+models.">From Zebrafish to human: modular medical models.</a> Annu. Rev. Genomics Hum. Genet. 3, 311-340 (2002).</li><li>Beis, D., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+cell+biology:+following+the+zebrafish+trend.">In vivo cell biology: following the zebrafish trend.</a> Trends. Cell. Biol. 16, 105-112 (2006).</li><li>Schoenebeck, J. J., Yelon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illuminating+cardiac+development:+Advances+in+imaging+add+new+dimensions+to+the+utility+of+zebrafish+genetics.">Illuminating cardiac development: Advances in imaging add new dimensions to the utility of zebrafish genetics.</a> Semin. Cell. Dev. Biol. 18, 27-35 (2007).</li><li>Nasevicius, A., Ekker, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+targeted+gene+'knockdown'+in+zebrafish.">Effective targeted gene 'knockdown' in zebrafish.</a> Nat. Genet. 26, 216-220 (2000).</li><li>Dahme, T., Katus, H. A., Rottbauer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fishing+for+the+genetic+basis+of+cardiovascular+disease.">Fishing for the genetic basis of cardiovascular disease.</a> Dis. Model Mech. 2, 18-22 (2009).</li><li>Huang, W., Zhang, R., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibrillogenesis+in+the+developing+zebrafish+heart:+A+functional+study+of+tnnt2.">Myofibrillogenesis in the developing zebrafish heart: A functional study of tnnt2.</a> Dev. Biol. 331, 237-249 (2009).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book. , (2007).</li><li>Buckingham, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle:+the+regulation+of+myogenesis.">Muscle: the regulation of myogenesis.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 4, 745-751 (1994).</li><li>Wheelock, M. J., Knudsen, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherins+and+associated+proteins.">Cadherins and associated proteins.</a> Vivo. 5, 505-513 (1991).</li><li>Sun, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+hypertrophy+involves+both+myocyte+hypertrophy+and+hyperplasia+in+anemic+zebrafish.">Cardiac hypertrophy involves both myocyte hypertrophy and hyperplasia in anemic zebrafish.</a> PLoS One. 4, e6596-e6596 (2009).</li><li>Auman, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+modulation+of+cardiac+form+through+regionally+confined+cell+shape+changes.">Functional modulation of cardiac form through regionally confined cell shape changes.</a> PLoS Biol. 5, e53-e53 (2007).</li><li>Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+zebrafish+essential+and+regulatory+myosin+light+chains+reduces+cardiac+function+through+distinct+mechanisms.">Depletion of zebrafish essential and regulatory myosin light chains reduces cardiac function through distinct mechanisms.</a> Cardiovasc. Res. 79, 97-108 (2008).</li></ol>

Klasik tüm montaj immün yöntemleri ile karşılaştırıldığında, yöntem, aşağıdaki avantajları vardır. Öncelikle, çok daha güçlü floresan sinyalleri sürekli olarak geliştirilmiş penetrasyon nedeniyle elde edilebilir. Tüm montaj immün yöntemi, kalp çevresindeki yoğun cilt dokusu, tüm vücut önemli ölçüde yüksek arka planda birçok antikor penetrasyon azalır. Bu sorun özellikle büyük embriyolar için 3 gün sonrası fertilizasyon (dpf) şiddetlidir. Disseke kalpleri aksine, sadece çok ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktifi Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> tricaine </td><td> Araştırma organik </td><td> 3007T </td></tr><tr><td> Formaldehit </td><td> Polysciences </td><td> 04018 </td></tr><tr><td> Insülin enjektörü </td><td> Becton Dickinson </td><td> 329461 </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma </td><td> T8532 </td></tr><tr><td> Anti-β-katenin antikor </td><td> Sigma </td><td> C7207 </td></tr><tr><td> Anti-Mef2c antikor </td><td> Santa Cruz Biotech </td><td> SC313 </td></tr><tr><td> F59 </td><td> Zfin </td><td></td></tr><tr><td> Anti-α-aktinin antikor </td><td> Sigma </td><td> A7811 </td></tr><tr><td> Anti-Ilk antikor </td><td> Hücre içi sinyal </td><td> # 3862 </td></tr><tr><td> Alexa Florlu 568 keçi anti-tavşan IgG </<html> td&gt; <td> Invitrogen </td><td> A11011 </td></tr><tr><td> Alexa Florlu 488 keçi anti-fare IgG1 </td><td> Invitrogen </td><td> A21121 </td></tr><tr><td> Montaj orta floresan </td><td> Vektör </td><td> H-1200 </td></tr><tr><td> ImmEdge kalem </td><td> Vektör </td><td> H-4000 </td></tr><tr><td> Poli-L-Lysin kaplı slaytlar </td><td> Elektron mikroskobu bilimleri </td><td> 63410-01 </td></tr><tr><td> Mikroskop kapak cam </td><td> Balıkçı </td><td> 12-543-D </td></tr><tr><td> Concaved mikroskop kızakları </td><td> Balıkçı </td><td> 7-1305-8 </td></tr><tr><td> Diseksiyon mikroskobu </td><td> Leica MZ95 </td><td></td></tr><tr><td> Bileşik mikroskop </td><td> Zeiss </td><td> Axioplan2 </td></tr><tr><td> ApoTome </td><td> Zeiss </td><td></td></tr></tbody></table> PBST: 1 x PBS % 0.5 &#39;lik Triton-X 100 ent &quot;&gt; 25X Tricaine: 400 mg Tricaine 97.9 ml GKD 2 O 2.1 mL (1M Tris pH9) PH 7.0 &#39;a ayarlayın

immunostaining of dissected zebrafish embryonic heart

Zebra balığı embriyo kalp gelişimi ve avantajlı embriyoloji ve genetik 1,2 nedeniyle insan kalp hastalıkları eğitimi için in vivo omurgalı modeli popüler bir hale gelir. Hakkında 100-200 embriyolar tek bir yetişkin balık çifti her hafta hazır. Eski utero geliştiren şeffaf embriyolar kalp kusurları 3 değerlendirmek için ideal. Herhangi bir gen ifadesi morfolino teknoloji veya RNA enjeksiyon 4 üzerinden manipüle edilebilir . Ayrıca, ileri genetik ekranlar zaten cardiogenesis 5 farklı bakış açılarını etkileyen mutant bir liste yarattı. Tüm montaj immün bu hayvan modelinde belli bir doku 6 hedeflenen protein ifade desenini ortaya çıkarmak için önemli bir tekniktir. Ancak, hücre içi veya hücre yapıları ortaya çıkarabilir yüksek çözünürlüklü görüntüleri, özellikle fiziksel locat nedeniyle olarak zor olmuşturkalp ve antikorların zayıf penetrasyon iyon. Burada, ilk kalp diseksiyon ve sonra bir mikroskop lamı yüzey boyama işlemi yapan bu darboğazları gidermek için bir yöntem sunar. Küçük kalp örneklerinin kaybını önlemek için ve çözüm kullanımını kolaylaştırmak için, bir immEdge kalem ile çizilmiş mikroskop slaytlar yüzey üzerinde bir daire içinde kalp örnekleri kısıtlı. Boyama sonra, floresan sinyalleri doğrudan bir bileşik mikroskop ile gözlemlenebilir. Embriyonik bir balık kalp sadece birkaç hücre tabakalarından oluşan antikorları için yeni bir yöntem, penetrasyon önemli ölçüde artırır. Sağlam kalpleri yüksek kaliteli görüntüler gün 2 gün 6 yaş Zebra balığı embriyolarının için çok daha alayı süre içinde elde edilebilir. Bizim metodumuz, potansiyel olarak diğer organlara ya da Zebra balığı veya diğer küçük hayvanlar disseke leke uzatılabilir.

Watch this Scientific Journal Video about Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart at JoVE.com

Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart

Zebra balığı embriyonik kalp immün yapmak için hızlı bir şekilde açıklanmıştır. Tüm montaj immün yaklaşımı ile karşılaştırıldığında, bu yöntem, çok daha az işlem süresi içinde kalp hücre / hücre içi yapıları ortaya yüksek çözünürlüklü görüntüleri elde sağlayan antikorlar, penetrasyon önemli ölçüde artırır.

Zebra balığı Embriyonik Kalp Dissected, immün

Zebrafish embryo becomes a popular in vivo vertebrate model for studying cardiac development and human heart diseases due to its advantageous embryology ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Konfokal Mikroskop Zebra balığı Embriyonik Beyin Görüntüleme Canlı

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Tissue Targeted Embryonic Chimeras: Zebrafish Gastrula Cell Transplantation

Doku Hedeflenen Embriyonik Chimeras: Zebra balığı Gastrula Hücre Nakli

Certain fundamental questions in the field of developmental biology can only be answered when cells are placed in novel environments or when small groups ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Elektron Mikroskobu için embriyo Hazırlık Drosophila Embriyonik kalp tüpü

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues

Zebra balığı Embriyonik Göz Dokular, Mikrodisseksiyon

Zebrafish is a popular animal model for research on eye development because of its rapid ex utero development and good fecundity. By 3 days post ...

Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo

Embriyonik Ekstremite Cilt damarları Tüm montaj İmmünohistokimyasal Analizi: Embriyo vasküler dallanma Morphogenesis Eğitim Model Sistemi

Whole-mount immunohistochemical analysis for imaging the entire vasculature is pivotal for understanding the cellular mechanisms of branching ...

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Larvaların Kalp Diseksiyon, Çocuk ve Yetişkin Zebra balığı, Danio rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

Için bir sistem<em&gt; Ex vivo</emEmbriyonik Pankreas&gt; ekimi

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle

Zebra balığı Embriyonik İskelet Kası Lazer-yaralama

Various experimental approaches have been used in mouse to induce muscle injury with the aim to study muscle regeneration, including myotoxin injections ...

Analysis of Embryonic and Larval Zebrafish Skeletal Myofibers from Dissociated Preparations

Disosiye Müstahzarlar gelen Embriyonik ve larval Zebra balığı İskelet myofibers Analizi

The zebrafish has  proven to be a valuable model system for exploring skeletal muscle function and  for studying human muscle diseases. Despite  the many ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

Yeni Bir<em&gt; Ex vivo</emEmbriyonik Fare Kalp için&gt; Kültür Yöntemi

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...