Name: visualization of vascular ca2+ signaling triggered by paracrine derived ros
Uploaded: 2011-12-21T13:00:00
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반응 산소 종은 산화에 민감한 염료 (1 &amp; 2)를 사용하거나 공촛점 현미경에 의해 플라스미드 센서를 (3, 4)를 사용하여 라이브 세포 측정할 수 있습니다. 1. J774 세포에서 cytosolic ROS의 시각화 <ol><li> 48 H. 35 - mm 요리 (하버드 장치) 유리 하단에 J774.1 마우스 단핵구 파생 macrophages를 (10 6 세포 / ML) 성장 </li><li> 37 6 H에 대한 ° C. : TLR의 agonists (1 μg / ML의 LPS - TLR4 작용제,, C)...

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	<li>Madesh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+role+for+superoxide+in+InsP3+receptor-mediated+mitochondrial+dysfunction+and+endothelial+apoptosis.">Selective role for superoxide in InsP3 receptor-mediated mitochondrial dysfunction and endothelial apoptosis.</a> J. Cell. Biol. 170, 1079-1090 (2005).</li><li>Droge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+radicals+in+the+physiological+control+of+cell+function.">Free radicals in the physiological control of cell function.</a> Physiol. Rev. 82, 47-95 (2002).</li><li>Hamanaka, R. B., Chandel, N. 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방법은 세포를 살아있는 하나 산화에 민감한 염료 또는 플라스미드 센서를 사용하여 반응 산소 종의 신속하고 양적 측정이 가능합니다 여기에 설명했다. TLRs의 Agonists (수신자 같은 수용체)는 세포 표면에 존재하는 TLRs를 통해 세포를 자극하고 다운 스트림 신호 경로 15 트리거 화합물입니다. 우리의 프로토콜에서는, 우리는 세 가지 다른 TLR의 agonists의 즉 사용, Lipo - teichoic 산 - TLR2 작용제,...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> Attofluor 셀 챔버 </td><td> Invitrogen </td><td> A7816 </td></tr><tr><td> Antimycin </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> A8674 </td></tr><tr><td> DMEM 낮은 포도당 매체 </td><td> Invitrogen </td><td> 10567-014 </td></tr><tr><td> 내피 성장 인자의 보충 (ECGS) </td><td> 북부 </td><td> 02-102 </td></tr><tr><td> 태아 소 혈청 </td><td> Invitrogen </td><td> 12662011 </td></tr><tr><td> G418 </td><td> Invitrogen </td><td> 10131-027 </td></tr><tr><td> 젤라틴 </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> G1393 </td></tr><tr><td> H 2 DCFDA </td><td> Invitrogen </td><td> D - 399 </td></tr><tr><td> LPS </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> L4516 </td></tr><tr><td> LTA </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> L2515 </td></tr><tr><td> MitoSOX 레드 </td><td> Invitrogen </td><td> M36008 </td></tr><tr><td> Opti - 가상 저는 세럼 매체를 감소 </td><td> Invitrogen </td><td> 51985091 </td></tr><tr><td> 펜 / Strep (10X) </td><td> Invitrogen </td><td> 15140163 </td></tr><tr><td> pHyPer - cyto </td><td> Evrogen </td><td> FP941 </td></tr><tr><td> pHyPer - dMito </td><td> Evrogen </td><td> FP942 </td></tr><tr><td> 폴리 (I : C) </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> P0913 </td></tr><tr><td> 프리즘 소프트웨어 5.0 </td><td> GraphPad 소프트웨어, 주식 회사 </td><td></td></tr><tr><td> SigmaPlot 11.0 </td><td> Systat 소프트웨어, 주식 회사 </td><td></td></tr><tr><td> 트립신 - EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) (10X) </td><td> Invitrogen </td><td> 15400054 </td></tr><tr><td> T - 25 Flasks </td><td> 코닝 </td><td> 430,639 </td></tr><tr><td> T - 75 Flasks </td><td> BD 팔콘 </td><td> 353,136 </td></tr><tr><td> T 96 - 웰C 마이크로 잘 플레이트 </td><td> BD 팔콘 </td><td> 353,072 </td></tr><tr><td> 선 (禅) 2009 소프트웨어 </td><td> 칼 자이스 혈구 510 메타 공촛점 현미경 </td><td></td></tr></tbody></table>

visualization of vascular ca2+ signaling triggered by paracrine derived ros

산화 스트레스는 국소 빈혈 / reperfusion 손상과 패혈증을 포함한 pathologic 조건의 숫자에 연루되었습니다. , H 2 O 2, 및 수산기 래디 칼 - 산화 스트레스의 개념은 O 2 • 포함 ROS의 비정상적 형성 (반응 산소 종)를 말합니다. 반응 산소 종은 신호 전달, 세포 증식 및 세포 사망을 포함하여 1-6 세포 프로세스의 다수에 영향을 미칩니다. ROS는 직접 혈관과 장기의 세포를 손상 가능성을 가지고 있고, 궁극적으로 초기 ROS - 인한 조직 손상의 증폭의 결과 보조 화학 반응과 유전자 변경을 시작할 수 있습니다. 돌이킬 수없는 조직의 손상을 exacerbates 증폭 캐스케이드의 핵심 구성 요소는 염증 세포를 순환의 모집 및 활성화됩니다. 염증 동안, 염증 세포는 종양 괴사 인자 - α (TNFα)와 IL - 1 것과 크린 시토킨 생산내피 세포 (EC)와 상피 세포를 활성화하고 추가로 염증 반응 7 확대. 혈관 내피 기능 장애는 급성 염증의 설립 기능입니다. Macrophages가 불분명 메커니즘에 의해 염증 동안 내피 부전에 기여한다. O 2의 세포 릴리스에 macrophages 결과의 활성화 • - 인접 세포에 pathologic 신호 8 트리거 및 다양한 프로 염증성 크린 시토킨. NADPH의 oxidases은 세포 유형의 대부분 ROS의 전공 및 기본 소스입니다. 최근에, 그것은 NADPH의 oxidases에 의해 만들어진 ROS는 많은 pathophysiological 조건 중에 mitochondrial ROS 생산을 유도 것을 우리와 다른 9,10에 의해 표시됩니다. 따라서 mitochondrial ROS 생산을 측정하는 것은 cytosolic ROS를 측정 이외에 똑같이 중요합니다. Macrophages는 염증에 중요한 역할을 담당 flavoprotein의 효소 NADPH 산화 효소에 의해 ROS를 생성합니다. 일단 활성화,phagocytic NADPH 산화 효소는 O 2 •의 풍부한 양의 생산 - 호스트 방어 메커니즘 11,12에 중요하다는 것을. paracrine - 파생 O 2 •이 있지만 - 혈관 질환, CA 2를 포함하여 paracrine ROS 유도된 세포 내 신호의 시각화의 pathogenesis에 중요한 역할을 + 동원은 아직 가설이다. 인접한 내피 세포에 신호를 transduce에 - 우리는 활성화 macrophages는 O 2의 소스 • 사용되는 모델을 개발했습니다. 인접한 내피 세포에 신호 칼슘을 초래할 -이 모델을 사용 우리가 O 2 •이 대식 세포 - 파생 보여줍니다.

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Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS

내피 Ca2 + 신호의 paracrine 파생 ROS 유도를 시각화에 대한 통찰력을 얻기 위해 효율적인 방법이 설명되어 있습니다. 이 방법은 공동의 문화 모델에서 혈관 내피 세포의 Ca2 +의 동원을 촉발 paracrine 파생 ROS 측정을 활용합니다.

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