Name: visualization of vascular ca2+ signaling triggered by paracrine derived ros
Uploaded: 2011-12-21T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS at JoVE.com

Работа выполнена при поддержке Национального института здоровья гранта (R01 HL086699, HL086699-01A2S1, 1S10RR027327-01) в ММ. Наша статья частично поддержана Carl Zeiss Microimaging LLC.

Активные формы кислорода могут быть измерены в живых клеток с использованием окисления чувствительных красителей (1 &amp; 2) или с помощью плазмиды датчиков (3 и 4) с помощью конфокальной микроскопии. 1. Визуализация цитозольного АФК в клетках J774 <ol><li> Расти J774.1 мыши моноцита...

<ol>
	<li>Madesh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+role+for+superoxide+in+InsP3+receptor-mediated+mitochondrial+dysfunction+and+endothelial+apoptosis.">Selective role for superoxide in InsP3 receptor-mediated mitochondrial dysfunction and endothelial apoptosis.</a> J. Cell. Biol. 170, 1079-1090 (2005).</li><li>Droge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+radicals+in+the+physiological+control+of+cell+function.">Free radicals in the physiological control of cell function.</a> Physiol. Rev. 82, 47-95 (2002).</li><li>Hamanaka, R. B., Chandel, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+reactive+oxygen+species+regulate+cellular+signaling+and+dictate+biological+outcomes.">Mitochondrial reactive oxygen species regulate cellular signaling and dictate biological outcomes.</a> Trends Biochem. Sci. 35, 505-513 .</li><li>Hawkins, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=S-glutathionylation+activates+STIM1+and+alters+mitochondrial+homeostasis.">S-glutathionylation activates STIM1 and alters mitochondrial homeostasis.</a> J. Cell. Biol. 190, 391-405 (2010).</li><li>Madesh, M., Hajnoczky, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VDAC-dependent+permeabilization+of+the+outer+mitochondrial+membrane+by+superoxide+induces+rapid+and+massive+cytochrome+c+release.">VDAC-dependent permeabilization of the outer mitochondrial membrane by superoxide induces rapid and massive cytochrome c release.</a> J. Cell Biol. 155, 1003-1015 (2001).</li><li>Finkel, T., Holbrook, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidants+oxidative+stress+and+the+biology+of+ageing.">Oxidants oxidative stress and the biology of ageing.</a> Nature. 408, 239-247 (2000).</li><li>Rittirsch, D., Flierl, M. A., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Harmful+molecular+mechanisms+in+sepsis.">Harmful molecular mechanisms in sepsis.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 776-787 (2008).</li><li>Sanlioglu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide+induces+Rac1-dependent+reactive+oxygen+species+formation+and+coordinates+tumor+necrosis+factor-alpha+secretion+through+IKK+regulation+of+NF-kappa.">Lipopolysaccharide induces Rac1-dependent reactive oxygen species formation and coordinates tumor necrosis factor-alpha secretion through IKK regulation of NF-kappa.</a> 276, 30188-30198 (2001).</li><li>Hawkins, B. J., Madesh, M., Kirkpatrick, C. J., Fisher, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+flux+in+endothelial+cells+via+the+chloride+channel-3+mediates+intracellular+signaling.">Superoxide flux in endothelial cells via the chloride channel-3 mediates intracellular signaling.</a> Mol. Biol. Cell. 18, 2002-2012 (2007).</li><li>Vliet, A. v. a. n. d. e. r. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NADPH+oxidases+in+lung+biology+and+pathology:+host+defense+enzymes+and+more.">NADPH oxidases in lung biology and pathology: host defense enzymes and more.</a> Free Radic. Biol. Med. 44, 938-955 (2008).</li><li>Babior, B. M., Kipnes, R. S., Curnutte, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+defense+mechanisms.+The+production+by+leukocytes+of+superoxide,+a+potential+bactericidal+agent.">Biological defense mechanisms. The production by leukocytes of superoxide, a potential bactericidal agent.</a> J. Clin. Invest. 52, 741-744 (1973).</li><li>Lambeth, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOX+enzymes+and+the+biology+of+reactive+oxygen.">NOX enzymes and the biology of reactive oxygen.</a> Nat. Rev. Immunol. 4, 181-189 (2004).</li><li>Mukhopadhyay, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+detection+of+apoptosis+and+mitochondrial+superoxide+production+in+live+cells+by+flow+cytometry+and+confocal+microscopy.">Simultaneous detection of apoptosis and mitochondrial superoxide production in live cells by flow cytometry and confocal microscopy.</a> Nat. Protoc. 2, 2295-2301 (2007).</li><li>Niethammer, P., Grabher, C., Look, A. T., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+tissue-scale+gradient+of+hydrogen+peroxide+mediates+rapid+wound+detection+in+zebrafish.">A tissue-scale gradient of hydrogen peroxide mediates rapid wound detection in zebrafish.</a> Nature. 459, 996-999 (2009).</li><li>Medzhitov, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptors+and+innate+immunity.">Toll-like receptors and innate immunity.</a> Nat. Rev. Immunol. 1, 135-145 (2001).</li></ol>

Описанный здесь метод позволяет быстро и количественного измерения активных форм кислорода в живых клетках, либо с помощью окисления чувствительных красителей или плазмиды датчиков. Агонисты TLRs (звонок-подобных рецепторов) являются соединениями, которые стимулируют клетки через TLRs ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Реагент </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td></tr><tr><td> Attofluor ячейке камеры </td><td> Invitrogen </td><td> A7816 </td></tr><tr><td> Антимицином </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A8674 </td></tr><tr><td> DMEM низкий средний глюкозы </td><td> Invitrogen </td><td> 10567-014 </td></tr><tr><td> Эндотелиальная дополнением фактора роста (ЭКГ) </td><td> Северная часть штата </td><td> 02-102 </td></tr><tr><td> Эмбриональной бычьей сыворотки </td><td> Invitrogen </td><td> 12662011 </td></tr><tr><td> G418 </td><td> Invitrogen </td><td> 10131-027 </td></tr><tr><td> Желатин </td><td> Sigma Aldrich </td><td> G1393 </td></tr><tr><td> H 2 DCFDA </td><td> Invitrogen </td><td> D-399 </td></tr><tr><td> LPS </td><td> Sigma Aldrich </td><td> L4516 </td></tr><tr><td> LTA </td><td> Sigma Aldrich </td><td> L2515 </td></tr><tr><td> MitoSOX Красный </td><td> Invitrogen </td><td> M36008 </td></tr><tr><td> Opti-MEM я Уменьшение среднего сыворотки </td><td> Invitrogen </td><td> 51985091 </td></tr><tr><td> Pen / Strep (10x) </td><td> Invitrogen </td><td> 15140163 </td></tr><tr><td> pHyPer-цито </td><td> Евроген </td><td> FP941 </td></tr><tr><td> pHyPer-dMito </td><td> Евроген </td><td> FP942 </td></tr><tr><td> Поли (I: C) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P0913 </td></tr><tr><td> Призма программного обеспечения 5,0 </td><td> GraphPad Software, Inc </td><td></td></tr><tr><td> SigmaPlot 11,0 </td><td> Systat Software, Inc </td><td></td></tr><tr><td> Трипсин-EDTA (10x) </td><td> Invitrogen </td><td> 15400054 </td></tr><tr><td> Т-25 Колбы </td><td> Гранулирование </td><td> 430639 </td></tr><tr><td> Т-75 Колбы </td><td> BD Сокол </td><td> 353136 </td></tr><tr><td> 96-и ТС микро-луночного планшета </td><td> BD Сокол </td><td> 353072 </td></tr><tr><td> Дзен 2009 программное обеспечение </td><td> Carl Zeiss 510 Мета конфокальной микроскопии </td><td></td></tr></tbody></table>

visualization of vascular ca2+ signaling triggered by paracrine derived ros

Окислительный стресс был замешан в целом ряде патологических состояний, в том числе при ишемии / реперфузионного повреждения и сепсис. Концепция окислительного стресса относится к аберрантных образования АФК (активные формы кислорода), которые включают O 2 • -, Н 2 О 2, и гидроксильные радикалы. Активные формы кислорода влияет множество клеточных процессов, включая передачу сигналов, клеточной пролиферации и гибели клеток 1-6. АФК имеют потенциал для повреждения сосудов и клеток непосредственно органом, и может инициировать вторичных химических реакций и генетических изменений, которые в конечном итоге привести к усилению начальной РОС-опосредованного повреждения тканей. Ключевым компонентом усиления каскад, который усиливает необратимое повреждение ткани найма и активации циркулирующих воспалительных клеток. Во время воспаления, воспалительные клетки вырабатывают цитокины, такие как фактор некроза опухоли-α (ФНО) и ИЛ-1, чтоактивации эндотелиальных клеток (ЭК) и эпителиальных клеток и дальнейшего расширения воспалительного ответа 7. Сосудистой дисфункции эндотелия является признанным особенностью острого воспаления. Макрофаги способствуют дисфункции эндотелия при воспалении с помощью механизмов, остаются неясными. Активация макрофагов приводит к внеклеточной выпуск O 2 • - и различных провоспалительных цитокинов, который вызывает патологические сигнализации в соседние ячейки 8. NADPH оксидазы являются основным и главным источником АФК в большинстве типов клеток. В последнее время показано нами и другими 9,10, что АФК производства NADPH оксидазы вызвать митохондриальную производства АФК в течение многих патофизиологических условиях. Поэтому измерения митохондриальной производства АФК не менее важно в дополнение к оценке цитозольного АФК. Макрофаги производства АФК по NADPH флавопротеидом фермент который играет главную роль в воспалении. После активации,фагоцитарной NADPH оксидазы производит обильное количество O 2 • - которые имеют важное значение в механизме защиты организма 11,12. Хотя паракринной производных O 2 • - играет важную роль в патогенезе сосудистых заболеваний, визуализация паракринной РОС-индуцированных внутриклеточных сигнальных том числе Са 2 + мобилизации до сих пор гипотезы. Мы разработали модель, в которой активированными макрофагами используются в качестве источника O 2 • - для трансдукции сигнала на соседние эндотелиальные клетки. Используя эту модель, мы показываем, что макрофаг происхождения O 2 • - привести к кальциевой сигнализации в соседних эндотелиальных клеток.

Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS at JoVE.com

Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS

Эффективный способ получить представление о визуализации паракринной полученных АФК индукцию эндотелиальной Ca2 + сигнализация описано. Этот метод использует измерения паракринной производных АФК вызвало мобилизацию Са 2 + в сосудистых эндотелиальных клеток в культуре со-модели.

Визуализация сосудистой Са 2 + Сигнализация Срабатывание паракринной Производные ROS

Oxidative stress has been implicated in a number of pathologic conditions including ischemia/reperfusion damage and sepsis. The concept of oxidative ...

Research

JoVE Journal

Biology

Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Методы для работы с изображениями Ca 2 + Сигнализация в человеческой спермы

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in ...

Visualization of ATP Synthase Dimers in Mitochondria by Electron Cryo-tomography

Визуализация АТФ-синтазы димеров в митохондриях с помощью электронной Cryo-томографии

Electron cryo-tomography is a powerful tool in structural biology, capable of visualizing the three-dimensional structure of biological samples, such as ...

Automated Analysis of Dynamic Ca2+ Signals in Image Sequences

Automated Analysis of Dynamic Ca2+ Signals in Image Sequences

Автоматизированный анализ динамических Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Сигналы в последовательности изображений

Intracellular Ca2+ signals are commonly studied with fluorescent Ca2+ indicator dyes and microscopy techniques. However, quantitative analysis of Ca2+ ...

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

Фекальные глюкокортикоиды Анализ: безоперационная Надпочечная Мониторинг в Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

DiI Perfusion as a Method for Vascular Visualization in Ambystoma mexicanum

DiI Perfusion as a Method for Vascular Visualization in Ambystoma mexicanum

Перфузия DiI как метод сосудистой визуализации в<em&gt; Разное</em

Perfusion techniques have been used for centuries to visualize the circulation of tissues. Axolotl (Ambystoma mexicanum) is a species of salamander that ...

Visualization of DNA Compaction in Cyanobacteria by High-voltage Cryo-electron Tomography

Визуализация ДНК уплотнения в цианобактерий, томография высокого напряжения крио электрон

This protocol describes how to visualize the transient DNA compaction in cyanobacteria. DNA compaction is a dramatic cytoplasmic event recently found to ...

Retinal Cryo-sections, Whole-Mounts, and Hypotonic Isolated Vasculature Preparations for Immunohistochemical Visualization of Microvascular Pericytes

Сетчатки крио секции, целом кронштейны и гипотонический изолированных сосудистую подготовка к визуализации иммуногистохимических микрососудистой Pericytes

Retinal pericytes play an important role in many diseases of the eye. Immunohistochemical staining techniques of retinal vessels and microvascular ...

A Proximal Culture Method to Study Paracrine Signaling Between Cells

Проксимальный культуры метод для изучения паракринными сигнализации между ячейками

Intercellular interactions play an important role in many biological processes, including tumor progression, immune responses, angiogenesis, and ...

Myeloid Innate Signaling Pathway Regulation by MALT1 Paracaspase Activity

Миелоидных врожденной сигнальный путь регулирование MALT1 Paracaspase деятельности

Besides its function in lymphoid cells, which has been addressed by numerous studies, the paracaspase MALT1 also plays an important role in innate cells ...

Applications of Spatio-temporal Mapping and Particle Analysis Techniques to Quantify Intracellular Ca2+ Signaling In Situ

Applications of Spatio-temporal Mapping and Particle Analysis Techniques to Quantify Intracellular Ca2+ Signaling In Situ

Приложения пространственно временных карт и методы анализа частиц для количественного определения внутриклеточных Ca2 + сигнализации в Situ

Ca2+ imaging of isolated cells or specific types of cells within intact tissues often reveals complex patterns of Ca2+ signaling. This activity requires ...