Name: modeling and imaging 3-dimensional collective cell invasion
Uploaded: 2011-12-07T13:00:00
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Le financement de cette recherche est de Cancer Research du Royaume-Uni.

1. Étiquetage rétrovirale de cellules avec des protéines fluorescentes <ol><li> Cellules de la plaque d&#39;encapsidation rétrovirale (ex Phoenix) à à 0,25 x 10 6 cellules par puits d&#39;une 6-même plat dans 10% sérum de veau fœtal (FBS) / DMEM. </li><li> Cellules avec un ADN rétroviral Transfecter 48 heures plus tard les cellules en utilisant Effectene conformément aux instructions du fabricant. </li><li> Rincer les puits deux fois avec support 24 heures plus tard, p...

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	<li>Olson, M. F., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+actin+cytoskeleton+in+cancer+cell+motility.">The actin cytoskeleton in cancer cell motility.</a> Clin. Exp. Metastasis. 26, 273-287 (2008).</li><li>Hoelzinger, D. B., Demuth, T., Berens, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autocrine+factors+that+sustain+glioma+invasion+and+paracrine+biology+in+the+brain+microenvironment.">Autocrine factors that sustain glioma invasion and paracrine biology in the brain microenvironment.</a> J. Natl. Cancer. Inst. 99, 1583-1593 (2007).</li><li>Chaffer, C. L., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perspective+on+cancer+cell+metastasis.">A perspective on cancer cell metastasis.</a> Science. 331, 1559-1564 (2011).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hallmarks+of+Cancer.">The Hallmarks of Cancer.</a> Cell. 100, 57-70 (2000).</li><li>Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+advanced+spontaneous+metastasis+for+experimental+therapeutics.">Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics.</a> Nat. Rev. Cancer. 11, 135-141 (2011).</li><li>Hooper, S., Marshall, J. F., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+cell+migration+in+three+dimensions.">Tumor cell migration in three dimensions.</a> Methods. Enzymol. 406, 625-643 (2006).</li><li>Croft, D. R., Olson, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulating+the+conversion+between+rounded+and+elongated+modes+of+cancer+cell+movement.">Regulating the conversion between rounded and elongated modes of cancer cell movement.</a> Cancer Cell. 14, 349-351 (2008).</li><li>Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-step+pericellular+proteolysis+controls+the+transition+from+individual+to+collective+cancer+cell+invasion.">Multi-step pericellular proteolysis controls the transition from individual to collective cancer cell invasion.</a> Nat. Cell. Biol. 9, 893-904 (2007).</li><li>Hennigan, R. F., Hawker, K. L., Ozanne, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fos-transformation+activates+genes+associated+with+invasion.">Fos-transformation activates genes associated with invasion.</a> Oncogene. 9, 3591-3600 (1994).</li><li>Scott, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LIM+kinases+are+required+for+invasive+path+generation+by+tumor+and+tumor-associated+stromal+cells.">LIM kinases are required for invasive path generation by tumor and tumor-associated stromal cells.</a> J. Cell. Biol. 191, 169-185 (2010).</li></ol>

Dosages invasion de Matrigel ont traditionnellement été mis en place avec des cellules placées sur une couche de protéine de la matrice extracellulaire avec chimiotactique induite par la motilité vers et à travers un filtre à la base. Envahissement a été marqué en fonction du nombre de cellules peut être compté sur la partie inférieure du filtre. Bien que pratiquement il ya peu de différence avec le dosage de l&#39;invasion &quot;inverse&quot; décrit ci-dessus, il ya beaucoup plus d&#39;informations sur l...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th></tr><tr><td> DMEM (milieu Dulbecco modifié Eagle) </td><td> GIBCO </td><td> 21969 </td></tr><tr><td> Sérum de veau fœtal </td><td> AAP </td><td> A15-101 </td></tr><tr><td> La streptomycine Pénicilline </td><td> GIBCO </td><td> 15140 </td></tr><tr><td> 200 mM de L-glutamine (100x) </td><td> GIBCO </td><td> 25050-032 </td></tr><tr><td> Puromycine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P8833 </td></tr><tr><td> 0,05% de trypsine EDTA </td><td> GIBCO </td><td> 25300 </td></tr><tr><td> Polybrène </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> AL-118 </td></tr><tr><td> Lipofectamine 2000 Réactif </td><td> Invitrogen </td><td> 11668019 </td></tr><tr><td> Transwells 6.5mm, taille des pores 8,0 um </td><td> Corning </td><td> 3422 </td></tr><tr><td> Remplissez Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 354234 </td></tr> &lt;tr&gt; <td> Calcéine AM </td><td> Invitrogen </td><td> C1430 </td></tr><tr><td> RNase </td><td> Qiagen </td><td> 19101 </td></tr><tr><td> L&#39;iodure de propidium </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P4864 </td></tr><tr><td> Confocale microcope </td><td> Leica </td><td> SP2MP </td></tr></tbody></table>

modeling and imaging 3-dimensional collective cell invasion

Une caractéristique de la malignité du cancer est une invasion et la métastase. Dans certains cancers (e. g. Gliome 2), invasion locale dans les tissus environnants sains est à l&#39;origine de la maladie et la mort. Pour d&#39;autres cancers (e. g. Sein, poumon, etc.), C&#39;est le processus de métastase, dans lequel les cellules tumorales de passer d&#39;une masse tumorale primaire, colonisent les sites distale et finalement contribuer à une défaillance organique, qui mène éventuellement à la morbidité et la de mortalité 3. Il a été estimé que l&#39;invasion et les métastases sont responsables de 90% des décès par cancer 4. En conséquence, il a été un vif intérêt dans l&#39;identification des processus moléculaires et les médiateurs protéiques critique de l&#39;invasion et les métastases à des fins d&#39;améliorer le diagnostic et le traitement 5. Un défi pour les scientifiques est de développer un cancer des dosages invasion qui ressemble plus suffisamment à la situation in vivopour permettre la modélisation des maladies précises 6. Deux dimensions tests de motilité des cellules sont seulement informatifs sur un aspect de l&#39;invasion et ne prennent pas en compte remodelage matriciel protéine extracellulaire (ECM) qui est aussi un élément critique. Récemment, la recherche a affiné notre compréhension de l&#39;invasion des cellules tumorales et des cellules individuelles a révélé que peuvent se déplacer par des modes allongés ou arrondis 7. En outre, il a été plus grande appréciation de la contribution de l&#39;invasion collective, dans laquelle les cellules envahir en brins, les feuilles et les grappes, en particulier dans les tumeurs hautement différenciées qui maintiennent des caractéristiques épithéliales, à la propagation du cancer 8. Nous présentons une méthode raffinée 9 pour examiner les contributions des protéines candidates à l&#39;invasion collective 10. En particulier, par des pools d&#39;ingénierie séparées des cellules d&#39;exprimer différentes protéines fluorescentes, il est possible de disséquer moléculairement les activités et Proteins nécessaires dans les cellules de leader par rapport à ceux requis dans les cellules suivantes. L&#39;utilisation de l&#39;ARNi constitue l&#39;outil moléculaire pour démonter expérimentalement les processus impliqués dans l&#39;invasion des cellules individuelles ainsi que dans différentes positions d&#39;invasion collective. Dans cette procédure, des mélanges de cellules marqué par fluorescence sont plaquées sur le fond d&#39;un insert Transwell préalablement rempli par Matrigel ECM protéines, a ensuite permis d&#39;envahir &quot;par le haut» à travers le filtre et dans le Matrigel. Reconstruction des piles d&#39;images de la série Z, obtenue par imagerie confocale, en trois dimensions des représentations permet de visualiser collectivement brins d&#39;invasion et d&#39;analyse de la représentation de cellules marqué par fluorescence dans les principaux postes suivants par rapport.

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Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

Modèles de l&#39;invasion des cellules tumorales en trois dimensions de la matrice extracellulaire de mieux refléter la<em&gt; In vivo</em&gt; La situation de tests de motilité en deux dimensions. En utilisant des tests d&#39;invasion matrice combinée avec l&#39;imagerie confocale de cellules marqué par fluorescence, des informations détaillées sur les modes d&#39;invasion et les contributions distinctes de leader par rapport suivants cellules peuvent être obtenues.

Modélisation et Imagerie en 3 dimensions l&#39;invasion des cellules collectives

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy ...

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