Name: modeling and imaging 3-dimensional collective cell invasion
Uploaded: 2011-12-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion at JoVE.com

המימון למחקר זה הוא מן לחקר הסרטן בבריטניה.

1. תיוג retroviral של תאים עם חלבוני ניאון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Retroviral פלייט אריזה תאים (למשל פיניקס) לעבר 0.25 x 10 6 תאים לכל טוב של 6-היטב המנה ב 10% בסרום שור עוברית (FBS) / DMEM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים עם DNA Transfect retroviral 48 שעות ?...

<ol>
	<li>Olson, M. F., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+actin+cytoskeleton+in+cancer+cell+motility.">The actin cytoskeleton in cancer cell motility.</a> Clin. Exp. Metastasis. 26, 273-287 (2008).</li><li>Hoelzinger, D. B., Demuth, T., Berens, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autocrine+factors+that+sustain+glioma+invasion+and+paracrine+biology+in+the+brain+microenvironment.">Autocrine factors that sustain glioma invasion and paracrine biology in the brain microenvironment.</a> J. Natl. Cancer. Inst. 99, 1583-1593 (2007).</li><li>Chaffer, C. L., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perspective+on+cancer+cell+metastasis.">A perspective on cancer cell metastasis.</a> Science. 331, 1559-1564 (2011).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hallmarks+of+Cancer.">The Hallmarks of Cancer.</a> Cell. 100, 57-70 (2000).</li><li>Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+advanced+spontaneous+metastasis+for+experimental+therapeutics.">Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics.</a> Nat. Rev. Cancer. 11, 135-141 (2011).</li><li>Hooper, S., Marshall, J. F., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+cell+migration+in+three+dimensions.">Tumor cell migration in three dimensions.</a> Methods. Enzymol. 406, 625-643 (2006).</li><li>Croft, D. R., Olson, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulating+the+conversion+between+rounded+and+elongated+modes+of+cancer+cell+movement.">Regulating the conversion between rounded and elongated modes of cancer cell movement.</a> Cancer Cell. 14, 349-351 (2008).</li><li>Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-step+pericellular+proteolysis+controls+the+transition+from+individual+to+collective+cancer+cell+invasion.">Multi-step pericellular proteolysis controls the transition from individual to collective cancer cell invasion.</a> Nat. Cell. Biol. 9, 893-904 (2007).</li><li>Hennigan, R. F., Hawker, K. L., Ozanne, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fos-transformation+activates+genes+associated+with+invasion.">Fos-transformation activates genes associated with invasion.</a> Oncogene. 9, 3591-3600 (1994).</li><li>Scott, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LIM+kinases+are+required+for+invasive+path+generation+by+tumor+and+tumor-associated+stromal+cells.">LIM kinases are required for invasive path generation by tumor and tumor-associated stromal cells.</a> J. Cell. Biol. 191, 169-185 (2010).</li></ol>

מבחני Matrigel הפלישה מסורתי הוקמו עם תאים להציב על גבי שכבה של חלבון תאי מטריקס עם תנועתיות chemoattractant-Induced לכיוון ועל דרך פילטר בתחתית. הפולשנות היה הבקיע כפונקציה של כמה תאים אפשר לסמוך על החלק התחתון של המסנן. אמנם למעשה יש הבדל קטן עם assay &quot;הפוך&quot; הפלישה שתוארו לעיל, ק...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th></tr><tr><td> DMEM (Medium השתנה Dulbecco של הנשרים) </td><td> GIBCO </td><td> 21969 </td></tr><tr><td> סרום שור עוברית </td><td> PAA </td><td> ת 15-101 </td></tr><tr><td> פניצילין סטרפטומיצין </td><td> GIBCO </td><td> 15140 </td></tr><tr><td> 200 מ&quot;מ L-גלוטמין (100x) </td><td> GIBCO </td><td> 25050-032 </td></tr><tr><td> Puromycin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P8833 </td></tr><tr><td> 0.05% טריפסין EDTA </td><td> GIBCO </td><td> 25300 </td></tr><tr><td> Polybrene </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> AL-118 </td></tr><tr><td> Lipofectamine מגיב 2000 </td><td> Invitrogen </td><td> 11668019 </td></tr><tr><td> Transwells 6.5mm, 8.0 מיקרומטר גודל הנקבוביות </td><td> קורנינג </td><td> 3422 </td></tr><tr><td> השלם Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 354234 </td></tr> &lt;tr&gt; <td> Calcein AM </td><td> Invitrogen </td><td> C1430 </td></tr><tr><td> RNase </td><td> Qiagen </td><td> 19101 </td></tr><tr><td> Propidium יודיד </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P4864 </td></tr><tr><td> Confocal microcope </td><td> לייקה </td><td> SP2MP </td></tr></tbody></table>

modeling and imaging 3-dimensional collective cell invasion

המאפיין המגדיר של ממאירות סרטן הפלישה גרורות 1. בכמה סוגי סרטן (ה g. Glioma 2), פלישה מקומית לתוך הרקמה הבריאה המקיפה אותה היא שורש של מחלות ומוות. עבור סוגי סרטן אחרים (ה g. השד, סרטן ריאות, וכו &#39;.), הוא תהליך של גרורות, שבו תאים סרטניים לנוע ממקום הגידול הראשוני מסה, ליישב אתרי דיסטלי, ובסופו של דבר לתרום כשל איברים, שבסופו של דבר מוביל לתחלואה תמותה 3. ההערכה היא כי הפלישה גרורות אחראים ל -90% ממקרי המוות מסרטן 4. כתוצאה מכך, חלה עניין רב בזיהוי תהליכים מולקולריים המתווכים חלבון קריטית של הפלישה גרורות לצורך אבחון וטיפול בשיפור 5. האתגר העומד בפני החוקרים הוא לפתח סרטן מבחני הפלישה כי די דומה למצב in vivoכדי לאפשר דוגמנות מחלה מדויק 6. דו מימדי תנועתיות מבחני סלולריים הם רק אינפורמטיבי על היבט אחד של הפלישה אינם מביאים בחשבון שיפוץ תאי חלבון מטריקס (ECM) אשר גם הוא אלמנט קריטי. לאחרונה, מחקרים מעודן ההבנה שלנו של הפלישה תא הגידול גילה כי תאים בודדים יכול לנוע על ידי מצבי מוארך או מעוגל 7. בנוסף, חלה הערכה גדולה יותר של התרומה של הפלישה קיבוצי, שבו תאים לפלוש בקווצות, סדינים אשכולות, בעיקר גידולים מובחנים מאוד כי לשמור על המאפיינים אפיתל, להתפשטות סרטן 8. אנו מציגים שיטה מעודן 9 לבחינת תרומתם של חלבונים מועמד לפלישה קולקטיבית 10. בפרט, על ידי הנדסה בריכות נפרדות של תאים לבטא את חלבוני ניאון שונים, אפשר מולקולרי לנתח את הפעילויות proteins הנדרשים בתאים המובילים לעומת אלו הנדרשים בתאים הבאים. השימוש RNAi מספק את הכלי מולקולרית בניסוי לפרק את התהליכים הכרוכים הפלישה תא יחיד, כמו גם עמדות שונות של חדירה קולקטיבית. בהליך זה, תערובות של תאים fluorescently שכותרתו הם מצופה בתחתית להוסיף Transwell מילא בעבר עם חלבון ECM Matrigel, אז מותר לפלוש &quot;כלפי מעלה&quot; דרך המסנן לתוך Matrigel. שחזור של סדרת Z-ערימות התמונה, מתקבל על ידי הדמיה confocal, תוך ייצוג תלת מימדי המאפשר הדמיה של קולקטיבי גדילי הפולש וניתוח של ייצוג של תאים fluorescently שכותרתו מובילים לעומת העמדות הבאות.

Watch this Scientific Journal Video about Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion at JoVE.com

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

מודלים של פלישת תאים סרטניים לתוך מטריצה ​​תלת ממדי תאיים לשקף טוב יותר את<em&gt; In vivo</em&gt; המצב מאשר דו מימדי מבחני תנועתיות. באמצעות פלישה מטריצה ​​מבחני בשילוב עם הדמיה confocal של תאים fluorescently שכותרתו, מידע מפורט על דרכי הפלישה התרומות נפרדות של מוביל לעומת התאים הבאים ניתן להשיג.

מידול והדמיה 3-Dimensional Cell קיבוציים Invasion

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Multi-פוטון הדמיה של הפלישה תאים סרטניים במודל עכבר orthotopic של קרצינומה של תאים קשקשיים אוראלי

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Spheroid Assay to Measure TGF-&#946;-induced Invasion

Spheroid Assay to Measure TGF-ÃƒÅ½Ã‚Â²-induced Invasion

Assay Spheroid למדוד TGF-β-Induced Invasion

TGF-&beta; has opposing roles in breast cancer progression by acting as a tumor suppressor in the initial phase, but stimulating invasion and metastasis ...

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

יציקה והדמיה של וריד שער מאוס או מערכת צינור מרת intrahepatic שרף 3-Dimensional

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

Molecular Imaging to Target Transplanted Muscle Progenitor Cells

מולקולרית והדמיה ליעד בתאים שריר מושתלים

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a severe genetic neuromuscular disorder that affects 1 in 3,500 boys, and is characterized by progressive muscle ...

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

דור וQuantitation 3 ממדים של עורקי פצעים בעכברים באמצעות טומוגרפיה הקרנה אופטית

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

מולקולרי פרופיל של microenvironment הגידול פולש במודל 3 ממדים של תאי סרטן המעי הגס ו<em&gt; Ex vivo</em&gt; פיברובלסטים

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

השתנה<em&gt; במבחנה</em&gt; פלישת Assay כדי לקבוע את התפקיד הפוטנציאלי של הורמונים, ציטוקינים ו / או גורמי גדילה בפלישת תאי הסרטן המתווך

Blood serum serves as a chemoattractant towards which cancer cells migrate and invade, facilitating their intravasation into microvessels. However, the ...

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Nephrectomy דוגמנות קרצינומה ספונטני גרורתי של תאי כליות (mRCC) בעכברים בעקבות

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

Isolation and Immortalization of Patient-derived Cell Lines from Muscle Biopsy for Disease Modeling

בידוד והנצחה של שורות תאים שמקורם בחולה מביופסיה של שריר למחל דוגמנות

The generation of patient-specific cell lines represents an invaluable tool for diagnostic or translational research, and these cells can be collected ...

A Cancer Cell Spheroid Assay to Assess Invasion in a 3D Setting

תאי סרטן ספרואיד Assay להערכת פלישה בסביבת 3D

The invasive nature of cancer cell lines is thought to correlate with their metastatic potential.  Most traditional assays, however, do not examine these ...