Name: modeling and imaging 3-dimensional collective cell invasion
Uploaded: 2011-12-07T13:00:00
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El financiamiento para esta investigación es de Cancer Research del Reino Unido.

1. Etiquetado retroviral de células con proteínas fluorescentes <ol><li> Células de la placa de embalaje retrovirales (por ejemplo, Phoenix) de un total de 0,25 x 10 6 células por pocillo de una 6-y plato fetal al 10% de suero bovino (FBS) / DMEM. </li><li> Transfectar las células con el ADN retroviral 48 horas después, las células con Effectene de acuerdo a las instrucciones del fabricante. </li><li> Enjuague pocillos dos veces con medio de 24 horas después, a continuaci...

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	<li>Olson, M. F., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+actin+cytoskeleton+in+cancer+cell+motility.">The actin cytoskeleton in cancer cell motility.</a> Clin. Exp. Metastasis. 26, 273-287 (2008).</li><li>Hoelzinger, D. B., Demuth, T., Berens, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autocrine+factors+that+sustain+glioma+invasion+and+paracrine+biology+in+the+brain+microenvironment.">Autocrine factors that sustain glioma invasion and paracrine biology in the brain microenvironment.</a> J. Natl. Cancer. Inst. 99, 1583-1593 (2007).</li><li>Chaffer, C. L., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perspective+on+cancer+cell+metastasis.">A perspective on cancer cell metastasis.</a> Science. 331, 1559-1564 (2011).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hallmarks+of+Cancer.">The Hallmarks of Cancer.</a> Cell. 100, 57-70 (2000).</li><li>Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+advanced+spontaneous+metastasis+for+experimental+therapeutics.">Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics.</a> Nat. Rev. Cancer. 11, 135-141 (2011).</li><li>Hooper, S., Marshall, J. F., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+cell+migration+in+three+dimensions.">Tumor cell migration in three dimensions.</a> Methods. Enzymol. 406, 625-643 (2006).</li><li>Croft, D. R., Olson, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulating+the+conversion+between+rounded+and+elongated+modes+of+cancer+cell+movement.">Regulating the conversion between rounded and elongated modes of cancer cell movement.</a> Cancer Cell. 14, 349-351 (2008).</li><li>Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-step+pericellular+proteolysis+controls+the+transition+from+individual+to+collective+cancer+cell+invasion.">Multi-step pericellular proteolysis controls the transition from individual to collective cancer cell invasion.</a> Nat. Cell. Biol. 9, 893-904 (2007).</li><li>Hennigan, R. F., Hawker, K. L., Ozanne, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fos-transformation+activates+genes+associated+with+invasion.">Fos-transformation activates genes associated with invasion.</a> Oncogene. 9, 3591-3600 (1994).</li><li>Scott, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LIM+kinases+are+required+for+invasive+path+generation+by+tumor+and+tumor-associated+stromal+cells.">LIM kinases are required for invasive path generation by tumor and tumor-associated stromal cells.</a> J. Cell. Biol. 191, 169-185 (2010).</li></ol>

Los ensayos de invasión Matrigel tradicionalmente han sido establecidos con células colocadas sobre una capa de proteína de matriz extracelular con quimiotáctica inducida por la movilidad hacia ya través de un filtro en la parte inferior. La invasión se calificó como una función de cuántas células se podía contar en la parte inferior del filtro. Aunque en la práctica hay poca diferencia con el ensayo &quot;inversa&quot; invasión se ha descrito anteriormente, hay mucha más información sobre el proceso de i...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nombre del reactivo </th><th> Empresa </th><th> Número de catálogo </th></tr><tr><td> DMEM (Dulbecco Modificado Medio Eagle) </td><td> GIBCO </td><td> 21969 </td></tr><tr><td> El suero fetal bovino </td><td> PAA </td><td> A15-101 </td></tr><tr><td> Penicilina-estreptomicina </td><td> GIBCO </td><td> 15140 </td></tr><tr><td> 200 mM L-glutamina (100 veces) </td><td> GIBCO </td><td> 25050-032 </td></tr><tr><td> Puromicina </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P8833 </td></tr><tr><td> 0,05% de tripsina EDTA </td><td> GIBCO </td><td> 25300 </td></tr><tr><td> Polybrene </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> AL-118 </td></tr><tr><td> Lipofectamine 2000 reactivo </td><td> Invitrogen </td><td> 11668019 </td></tr><tr><td> Transwells 6,5 mm, 8,0 micras de tamaño de poro </td><td> Corning </td><td> 3422 </td></tr><tr><td> Completar Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 354234 </td></tr> &lt;tr&gt; <td> Calceína AM </td><td> Invitrogen </td><td> C1430 </td></tr><tr><td> RNasa </td><td> Qiagen </td><td> 19101 </td></tr><tr><td> Yoduro de propidio </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P4864 </td></tr><tr><td> Confocal microcope </td><td> Leica </td><td> SP2MP </td></tr></tbody></table>

modeling and imaging 3-dimensional collective cell invasion

Una característica definitoria de la malignidad del cáncer es una invasión y metástasis. En algunos tipos de cáncer (e. g. Glioma 2), invasión local en el tejido sano circundante es la causa de la enfermedad y la muerte. Para otros tipos de cáncer (e. g. De mama, pulmón, etc.), Es el proceso de metástasis, en el que las células tumorales pasan de una masa tumoral primaria, colonizar los sitios distales y en última instancia, contribuir a la insuficiencia de órganos, que finalmente conduce a la morbilidad y la mortalidad a los 3. Se ha estimado que la invasión y las metástasis son responsables del 90% de las muertes por cáncer 4. Como resultado, ha habido un gran interés en la identificación de los procesos moleculares y mediadores críticos de proteínas de invasión y metástasis a los efectos de mejorar el diagnóstico y tratamiento 5. Un reto para los científicos es desarrollar cáncer de ensayos de invasión que se asemejan bastante a la situación in vivo enpara permitir el modelado preciso enfermedad 6. Dos dimensiones ensayos motilidad celular son sólo informativos acerca de un aspecto de la invasión y no tienen en cuenta la remodelación de proteínas de matriz extracelular (ECM), que es también un elemento crítico. Recientemente, la investigación ha mejorado nuestra comprensión de la invasión de células tumorales, y reveló que las células individuales pueden moverse por los modos de forma alargada o redondeada 7. Además, ha habido un mayor reconocimiento de la contribución de la invasión colectiva, en la que las células invaden en filamentos, hojas y racimos, sobre todo en tumores altamente diferenciadas que mantienen las características del epitelio, a la propagación del cáncer 8. Se presenta un método refinado 9 para examinar los aportes de proteínas candidatas a la invasión de colectivos 10. En particular, por las piscinas de ingeniería independiente de las células para expresar diferentes proteínas fluorescentes, es posible analizar molecularmente las actividades y proteinurians requerido en las células principales en comparación con los requeridos en las celdas siguientes. El uso de ARNi proporciona la herramienta molecular para desmontar experimentalmente los procesos involucrados en la invasión de células individuales, así como en diferentes posiciones de la invasión colectiva. En este procedimiento, las mezclas de las células con fluorescencia etiquetados se colocan en la parte inferior de un inserto de Transwell Matrigel previamente llena de proteínas ECM, luego se deja invadir &quot;hacia arriba&quot; a través del filtro y en el Matrigel. La reconstrucción de las pilas de la imagen de la serie Z, que se obtiene por la imagen confocal, en representaciones tridimensionales permite la visualización de forma colectiva hilos invadir y análisis de la representación de las células con fluorescencia marcado en la dirección frente a las siguientes posiciones.

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Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

Los modelos de la invasión de células tumorales en tres dimensiones de la matriz extracelular para reflejar mejor la<em&gt; En vivo</em&gt; Situación de los ensayos de la motilidad de dos dimensiones. Utilizando los ensayos de invasión de la matriz combinada con la imagen confocal de las células con fluorescencia etiquetado, información detallada sobre los modos de invasión y las diferentes contribuciones de los líderes frente a las siguientes células se pueden obtener.

Modelado y de imagen de 3 dimensiones invasión celular colectiva

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy ...

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Medicine

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