Name: modeling and imaging 3-dimensional collective cell invasion
Uploaded: 2011-12-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion at JoVE.com

Finansieringen av denna forskning är från Cancer Research Storbritannien.

1. Retroviral märkning av celler med fluorescerande proteiner <ol><li> Tavla retroviral förpackningar celler (t.ex. Phoenix) ute på 0,25 x 10 6 celler per brunn på en 6-väl skålen i 10% fetalt bovint serum (FBS) / DMEM. </li><li> Transfektera celler med retrovirus DNA 48 timmar senare celler med Effectene enligt tillverkarens instruktioner. </li><li> Skölj brunnar två gånger med medelhög 24 timmar senare, tillsätt sedan 1,5 ml 10% FBS / DMEM per brunn. </li><li> Samla ...

<ol>
	<li>Olson, M. F., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+actin+cytoskeleton+in+cancer+cell+motility.">The actin cytoskeleton in cancer cell motility.</a> Clin. Exp. Metastasis. 26, 273-287 (2008).</li><li>Hoelzinger, D. B., Demuth, T., Berens, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autocrine+factors+that+sustain+glioma+invasion+and+paracrine+biology+in+the+brain+microenvironment.">Autocrine factors that sustain glioma invasion and paracrine biology in the brain microenvironment.</a> J. Natl. Cancer. Inst. 99, 1583-1593 (2007).</li><li>Chaffer, C. L., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perspective+on+cancer+cell+metastasis.">A perspective on cancer cell metastasis.</a> Science. 331, 1559-1564 (2011).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hallmarks+of+Cancer.">The Hallmarks of Cancer.</a> Cell. 100, 57-70 (2000).</li><li>Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+advanced+spontaneous+metastasis+for+experimental+therapeutics.">Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics.</a> Nat. Rev. Cancer. 11, 135-141 (2011).</li><li>Hooper, S., Marshall, J. F., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+cell+migration+in+three+dimensions.">Tumor cell migration in three dimensions.</a> Methods. Enzymol. 406, 625-643 (2006).</li><li>Croft, D. R., Olson, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulating+the+conversion+between+rounded+and+elongated+modes+of+cancer+cell+movement.">Regulating the conversion between rounded and elongated modes of cancer cell movement.</a> Cancer Cell. 14, 349-351 (2008).</li><li>Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-step+pericellular+proteolysis+controls+the+transition+from+individual+to+collective+cancer+cell+invasion.">Multi-step pericellular proteolysis controls the transition from individual to collective cancer cell invasion.</a> Nat. Cell. Biol. 9, 893-904 (2007).</li><li>Hennigan, R. F., Hawker, K. L., Ozanne, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fos-transformation+activates+genes+associated+with+invasion.">Fos-transformation activates genes associated with invasion.</a> Oncogene. 9, 3591-3600 (1994).</li><li>Scott, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LIM+kinases+are+required+for+invasive+path+generation+by+tumor+and+tumor-associated+stromal+cells.">LIM kinases are required for invasive path generation by tumor and tumor-associated stromal cells.</a> J. Cell. Biol. 191, 169-185 (2010).</li></ol>

Matrigel invasionen analyser har traditionellt satts upp med celler placeras på ett lager av extracellulärt matrix protein med chemoattractant-inducerad motilitet mot och genom ett filter i botten. Invasivt var fick som en funktion av hur många celler kunde räknas på undersidan av filtret. Även om praktiskt taget det är liten skillnad med den &quot;omvända&quot; invasion analys som beskrivs ovan, finns det betydligt mer information om processen för invasion som kan bestämmas genom att visualisera invaderande c...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reagensets namn </th><th> Företag </th><th> Katalognummer </th></tr><tr><td> DMEM (Dulbecco ändrade Eagles Medium) </td><td> GIBCO </td><td> 21.969 </td></tr><tr><td> Fetalt bovinserum </td><td> PAA </td><td> A15-101 </td></tr><tr><td> Penicillin Streptomycin </td><td> GIBCO </td><td> 15.140 </td></tr><tr><td> 200 mm L-glutamin (100x) </td><td> GIBCO </td><td> 25050-032 </td></tr><tr><td> Puromycin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P8833 </td></tr><tr><td> 0,05% Trypsin EDTA </td><td> GIBCO </td><td> 25.300 </td></tr><tr><td> Polybrene </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> AL-118 </td></tr><tr><td> Lipofectamine 2000 Reagens </td><td> Invitrogen </td><td> 11668019 </td></tr><tr><td> 6.5mm Transwells, 8,0 ìm porstorlek </td><td> Corning </td><td> 3422 </td></tr><tr><td> Komplett Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 354.234 </td></tr> &lt;tr&gt; <td> Kalcein AM </td><td> Invitrogen </td><td> C1430 </td></tr><tr><td> RNas </td><td> Qiagen </td><td> 19.101 </td></tr><tr><td> Propidiumjodid </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P4864 </td></tr><tr><td> Konfokala microcope </td><td> Leica </td><td> SP2MP </td></tr></tbody></table>

modeling and imaging 3-dimensional collective cell invasion

Ett kännetecken för cancer malignitet invasion och metastasering 1. I vissa cancerformer (e. g. Gliom 2), lokal invasion till omgivande frisk vävnad är den grundläggande orsaken till sjukdom och död. För andra cancerformer (e. g. Bröst-, lung, osv.) Är det processen att metastaser, där tumörceller flytta från en primärtumör massa, kolonisera distala platser och i slutändan bidra till organsvikt, som leder så småningom till sjuklighet och dödlighet 3. Det har uppskattats att invasion och metastasering svarar för 90% av dödsfall i cancer 4. Som ett resultat har det varit intensivt intresse för att identifiera de molekylära processerna och kritiska medlare protein invasion och metastasering i syfte att förbättra diagnos och behandling 5. En utmaning för cancer forskare är att utveckla invasion analyser som är tillräckligt liknar in vivo situationenatt möjliggöra noggrann sjukdom modellering 6. Tvådimensionella cell motilitet analyser är bara informativt om en aspekt av invasion och inte tar hänsyn till extracellulära matrix (ECM) protein ombyggnad som också är ett viktigt inslag. Nyligen har forskning förfinat vår förståelse av tumörcellen invasion och visade att enskilda celler kan gå med avlånga eller runda lägen 7. Dessutom har det funnits en större förståelse för bidrag av kollektiva invasion, där cellerna invaderar i trådar, lakan och kluster, särskilt i högt differentierade tumörer som upprätthåller epiteliala egenskaper, spridning av cancer 8. Vi presenterar en förfinad metod 9 för att pröva bidrag kandidaten proteiner till kollektiva invasionen 10. I synnerhet genom tekniska separata pooler av celler för att uttrycka olika fluorescerande proteiner, är det möjligt att molekylärt dissekera verksamhet och proteins krävs i ledande celler jämfört med de som krävs i följande celler. Användningen av RNAi ger molekylära verktyg för att experimentellt isär processer i enskilda celler invasion samt i olika positioner av kollektiva invasion. I detta förfarande är blandningar av fluorescerande-märkta celler pläterade på botten av en Transwell in tidigare fylld med Matrigel ECM protein, sedan får invadera &quot;uppåt&quot; genom filtret och in i Matrigel. Rekonstruktion av Z-serien bilden stackar, som erhållits genom konfokala bildhantering, till tredimensionella representationer möjliggör visualisering av kollektivt invadera trådar och analys av representation av fluorescerande-märkta celler i ledande kontra följande befattningar.

Watch this Scientific Journal Video about Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion at JoVE.com

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

Modeller av tumörcellen invasion till tredimensionella extracellulära matrix bättre återspegla<em&gt; In vivo</em&gt; Situation än tvådimensionella motilitet analyser. Använda analyser matris invasionen i kombination med konfokal avbildning av fluorescerande-märkta celler, detaljerad information om invasionen lägen och skilda typer av bidrag av ledande kontra följande celler kan erhållas.

Modellering och Imaging 3-dimensionell Kollektiv Cell Invasion

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Multi-photon avbildning av tumörcellen invasion i ett Orthotopic musmodell av oral skivepitelcancer

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Spheroid Assay to Measure TGF-&#946;-induced Invasion

Spheroid Assay to Measure TGF-ÃƒÅ½Ã‚Â²-induced Invasion

Sfäroid analys för att mäta TGF-β-inducerad Invasion

TGF-&beta; has opposing roles in breast cancer progression by acting as a tumor suppressor in the initial phase, but stimulating invasion and metastasis ...

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

3-dimensionell hartsgjutdel och avbildning av mus portvenen eller Intrahepatisk Bile Duct System

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

Molecular Imaging to Target Transplanted Muscle Progenitor Cells

Molecular Imaging till Target transplanterade celler Muscle stamfader

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a severe genetic neuromuscular disorder that affects 1 in 3,500 boys, and is characterized by progressive muscle ...

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

Generation och 3-dimensionell kvantifiering av arteriell Skador i möss med användning av optisk Projection Tomography

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Molekylär profilering av Invasive tumormicroenvironmenten i en 3-dimensionell modell av kolorektal cancer celler och<em&gt; Ex vivo</em&gt; Fibroblaster

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

En modifierad<em&gt; In vitro</em&gt; Invasion analys för att fastställa den potentiella roll Hormoner, cytokiner och / eller tillväxtfaktorer vid medie Cancer Cell Invasion

Blood serum serves as a chemoattractant towards which cancer cells migrate and invade, facilitating their intravasation into microvessels. However, the ...

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Modellering Spontan metastaserad njurcellscancer (MRCC) i möss efter Nefrektomi

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

Isolation and Immortalization of Patient-derived Cell Lines from Muscle Biopsy for Disease Modeling

Isolering och Immortalisering av patientgenererade cellinjer från muskelbiopsi for Disease Modeling

The generation of patient-specific cell lines represents an invaluable tool for diagnostic or translational research, and these cells can be collected ...

A Cancer Cell Spheroid Assay to Assess Invasion in a 3D Setting

En Cancer Cell Spheroid analys för att bedöma invasion i en 3D-inställning

The invasive nature of cancer cell lines is thought to correlate with their metastatic potential.  Most traditional assays, however, do not examine these ...