Name: modeling and imaging 3-dimensional collective cell invasion
Uploaded: 2011-12-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion at JoVE.com

Bu araştırma için fon Cancer Research UK.

1. Floresan proteinleri ile hücre retroviral etiketleme <ol><li> 0.25 x 10 6 hücre ortalama 6-iyi Plaka retroviral ambalaj hücreleri (örneğin Phoenix) % 10 fetal sığır serumu (FBS) / DMEM çanak. </li><li> Retroviral DNA Transfect hücrelerin 48 saat sonra hücrelerin üreticinin talimatlarına göre Effectene kullanarak. </li><li> Kuyu daha sonra orta 24 saat ile iki kez durulayın, daha sonra 1.5 ml% 10 de ortalama FBS / DMEM ekleyin. </li><li> Pipetleme ve 2 ml mikrosa...

<ol>
	<li>Olson, M. F., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+actin+cytoskeleton+in+cancer+cell+motility.">The actin cytoskeleton in cancer cell motility.</a> Clin. Exp. Metastasis. 26, 273-287 (2008).</li><li>Hoelzinger, D. B., Demuth, T., Berens, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autocrine+factors+that+sustain+glioma+invasion+and+paracrine+biology+in+the+brain+microenvironment.">Autocrine factors that sustain glioma invasion and paracrine biology in the brain microenvironment.</a> J. Natl. Cancer. Inst. 99, 1583-1593 (2007).</li><li>Chaffer, C. L., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perspective+on+cancer+cell+metastasis.">A perspective on cancer cell metastasis.</a> Science. 331, 1559-1564 (2011).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hallmarks+of+Cancer.">The Hallmarks of Cancer.</a> Cell. 100, 57-70 (2000).</li><li>Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+advanced+spontaneous+metastasis+for+experimental+therapeutics.">Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics.</a> Nat. Rev. Cancer. 11, 135-141 (2011).</li><li>Hooper, S., Marshall, J. F., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+cell+migration+in+three+dimensions.">Tumor cell migration in three dimensions.</a> Methods. Enzymol. 406, 625-643 (2006).</li><li>Croft, D. R., Olson, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulating+the+conversion+between+rounded+and+elongated+modes+of+cancer+cell+movement.">Regulating the conversion between rounded and elongated modes of cancer cell movement.</a> Cancer Cell. 14, 349-351 (2008).</li><li>Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-step+pericellular+proteolysis+controls+the+transition+from+individual+to+collective+cancer+cell+invasion.">Multi-step pericellular proteolysis controls the transition from individual to collective cancer cell invasion.</a> Nat. Cell. Biol. 9, 893-904 (2007).</li><li>Hennigan, R. F., Hawker, K. L., Ozanne, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fos-transformation+activates+genes+associated+with+invasion.">Fos-transformation activates genes associated with invasion.</a> Oncogene. 9, 3591-3600 (1994).</li><li>Scott, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LIM+kinases+are+required+for+invasive+path+generation+by+tumor+and+tumor-associated+stromal+cells.">LIM kinases are required for invasive path generation by tumor and tumor-associated stromal cells.</a> J. Cell. Biol. 191, 169-185 (2010).</li></ol>

Matrigel işgali testleri geleneksel ve alt kısmında bir filtre aracılığıyla doğru kemoatraktan indüklenen motilite ile ekstraselüler matriks proteini bir tabaka üzerine yerleştirilen hücreleri ile kurulmuştur. Invazivlik filtrenin alt kısmında kaç hücre olabilir sayılır bir fonksiyonu olarak gol oldu. Çok az bir fark ile, yukarıda açıklanan &quot;ters&quot; işgal tahlil pratik olmasına rağmen, Matrigel ile yukarı taşımak ve işgalci hücreleri görselleştirme tarafından tespit edilebilir ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifi Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th></tr><tr><td> DMEM (Dulbecco&#39;nun Modifiye Kartal Orta) </td><td> Gibco </td><td> 21969 </td></tr><tr><td> Fetal sığır serumu </td><td> PAA </td><td> A15-101 </td></tr><tr><td> Penisilin Streptomisin </td><td> Gibco </td><td> 15140 </td></tr><tr><td> 200 mM L-Glutamine (100x) </td><td> Gibco </td><td> 25050-032 </td></tr><tr><td> Puromycin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P8833 </td></tr><tr><td> % 0.05 tripsin EDTA </td><td> Gibco </td><td> 25300 </td></tr><tr><td> Polybrene </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> AL-118 </td></tr><tr><td> Lipofectamine 2000 Reaktif </td><td> Invitrogen </td><td> 11668019 </td></tr><tr><td> 6.5mm Transwells, 8.0 mikron gözenek boyutu </td><td> Corning </td><td> 3422 </td></tr><tr><td> Komple Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 354234 </td></tr> &lt;tr&gt; <td> Calcein AM </td><td> Invitrogen </td><td> C1430 </td></tr><tr><td> RNaz </td><td> Qiagen </td><td> 19101 </td></tr><tr><td> Propidium İyodür </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P4864 </td></tr><tr><td> Konfokal microcope </td><td> Leica </td><td> SP2MP </td></tr></tbody></table>

modeling and imaging 3-dimensional collective cell invasion

Kanser malignite tanımlayan ayırt edici özelliği, invazyon ve metastaz 1 . Bazı kanser türleri (E. G glioma 2), çevredeki sağlıklı doku içine lokal invazyon, hastalık ve ölüm kök nedenidir . Diğer kanserler için (e. g meme, akciğer, vb.), Tümör hücrelerinin primer tümör kitlesi hareket distal siteleri kolonize ve sonuçta organ yetmezliğine katkıda metastaz süreci, sonunda morbidite ve ölüm 3. Invazyon ve metastaz, kanser ölümlerinin 4% 90 oranında sorumlu olduğu tahmin edilmektedir . Sonuç olarak, gelişen tanı ve tedavi 5 amaçları için moleküler süreçler ve invazyon ve metastaz kritik protein arabulucular tespit yoğun ilgi olmuştur. Kanser bilim adamları için bir meydan okuma in vivo durumu yeterince benzer işgali testleri geliştirmek içindoğru hastalığı modelleme 6 etkinleştirin. İki boyutlu hücre motilite testleri işgali yalnızca bilgilendirme yaklaşık bir yönü vardır ve aynı zamanda önemli bir unsurudur hesap ekstraselüler matriks (ECM) protein remodeling yapmayız. Son zamanlarda, tümör hücresi invazyonu anlayışımız araştırma rafine ve tek tek hücreler, uzatılmış veya yuvarlak modları 7 hareket etmiş olabileceğini göstermiştir . Buna ek olarak, özellikle epitel özellikleri korumak son derece farklılaşmış tümörler kanser 8 yayılmasını hücreleri lifler, çarşaf ve kümeler halinde işgal toplu işgali katkısı büyük takdir,, olmuştur. Biz kolektif işgali 10 katkıları aday proteinlerin incelenmesi için zarif bir yöntem 9 sunuyoruz. Özellikle, farklı floresan proteinleri ifade hücreleri mühendislik ayrı havuzları, moleküler faaliyetler ve protei incelemek mümkünns aşağıdaki hücreleri gerekli olan karşı önde gelen hücreleri gereklidir. RNAi kullanımı deneysel yanı sıra toplu işgalinin farklı pozisyonlarda bireysel hücre invazyonu ilgili işlemleri sökmeye moleküler bir araç sağlar. Bu prosedürde, floresan etiketli hücrelerinin karışımları Matrigel ECM protein ile dolu bir transwell eklemek altındaki kaplama, daha sonra, filtre ve Matrigel içine &quot;yukarı&quot; işgal izin. Konfokal görüntüleme ile elde edilen üç boyutlu gösterimleri içine z serisi görüntü yığınlar, İmar lideri konumunu karşı aşağıdaki floresan etiketli hücrelerinin temsil toplu işgalci iplikçikleri ve analiz görselleştirme sağlar.

Watch this Scientific Journal Video about Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion at JoVE.com

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

Üç boyutlu hücre dışı matriks içine tümör hücresi invazyonu modelleri daha iyi yansıtacak<em&gt; In vivo</em&gt; Iki boyutlu motilite testleri daha durum. Floresan etiketli hücreleri, işgali modları ve önde gelen karşı aşağıdaki hücreleri farklı katkıları hakkında detaylı bilgi konfokal görüntüleme ile birlikte matris işgali testleri kullanılarak elde edilebilir.

Modelleme ve Görüntüleme 3-Boyutlu Toplu Hücre Invasion

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Oral Skuamöz Hücre Karsinomu Ortotopik Fare Modeli Tümör Hücre Invasion Multi-foton Görüntüleme

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Spheroid Assay to Measure TGF-&#946;-induced Invasion

Spheroid Assay to Measure TGF-ÃƒÅ½Ã‚Â²-induced Invasion

TGF-β-kaynaklı Invasion Tedbir Sfero Testi

TGF-&beta; has opposing roles in breast cancer progression by acting as a tumor suppressor in the initial phase, but stimulating invasion and metastasis ...

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

3-Boyutlu Reçine Döküm ve Fare Portal Ven veya intrahepatik safra Sisteminin Görüntüleme

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

Molecular Imaging to Target Transplanted Muscle Progenitor Cells

Nakledilen Muscle Progenitör Hücreler Hedefleyecek Moleküler Görüntüleme

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a severe genetic neuromuscular disorder that affects 1 in 3,500 boys, and is characterized by progressive muscle ...

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

Üretim ve Farelerde arteriyel Lezyonlarının 3-Boyutlu kantitasyonu Optik Projeksiyon Tomografi ile

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Moleküler Kolorektal Kanser Hücrelerinin bir 3-Boyutlu Modeli İnvaziv tümör mikro Profili ve<em&gt; Ex vivo</em&gt; Fibroblastlar

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

Bir Modifiye<em&gt; In vitro</em&gt; Invasion Deneyi Hormonlar, Açan Kanser Hücre Invasion Sitokinlerin ve / veya Büyüme Faktörleri Potansiyel Rolü belirlemek için

Blood serum serves as a chemoattractant towards which cancer cells migrate and invade, facilitating their intravasation into microvessels. However, the ...

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Farelerde spontan metastatik renal hücreli karsinom (MRCC) modelleme ardından nefrektomi

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

Isolation and Immortalization of Patient-derived Cell Lines from Muscle Biopsy for Disease Modeling

Hastalık Modelleme için kas biyopsisi Hasta türetilmiş Hücre Hatları İzolasyonu ve Ölümsüzleştirme

The generation of patient-specific cell lines represents an invaluable tool for diagnostic or translational research, and these cells can be collected ...

A Cancer Cell Spheroid Assay to Assess Invasion in a 3D Setting

Bir Kanseri Hücre Sfero Testi 3D ortamda Invasion Değerlendirmek için

The invasive nature of cancer cell lines is thought to correlate with their metastatic potential.  Most traditional assays, however, do not examine these ...