Name: skeletal muscle gender dimorphism from proteomics
Uploaded: 2011-12-14T12:00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Skeletal Muscle Gender Dimorphism from Proteomics at JoVE.com

نشكر يوتيان غان لاستخدام الشكل 3. وأيد هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم 0420971 ، وكلية سميث Blakeslee ، Wilens هولمز والصناديق ، ومعهد هوارد هيوز الطبي.

<ol>
	<li>Fehrenbach, E., Mooren, F. C., V&#246;lker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular and Cellular Exercise Physiology. , 199-217 (2005).</li><li>Mooren, F. C., Mooren, F. C., V&#246;lker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Cell.">The Cell.</a> Molecular and Cellular Exercise Physiology. , 3-18 (2005).</li><li>Thompson, H. S., Clarkson, P. M., Scordilis, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+repeated+bout+effect+and+heat+shock+proteins:+intra-muscular+HSP27+and+HSP70+expression+following+two+bouts+of+eccentric+exercise+in+humans.">The repeated bout effect and heat shock proteins: intra-muscular HSP27 and HSP70 expression following two bouts of eccentric exercise in humans.</a> Acta. Physiol. Scand. 174, 47-56 (2002).</li><li>McHugh, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+understanding+of+the+repeated+bout+effect:+the+protective+effect+against+muscle+damage+from+a+single+bout+of+eccentric+exercise.">Recent advances in the understanding of the repeated bout effect: the protective effect against muscle damage from a single bout of eccentric exercise.</a> Scand. J. Med. Sci. Sports. 13, 88-97 (2003).</li><li>Metskas, L. A., Kulp, M., Scordilis, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+Dimorphism+in+the+Exercise-Naïve+Murine+Skeletal+Muscle+Proteome.">Gender Dimorphism in the Exercise-Naïve Murine Skeletal Muscle Proteome.</a> Cell Molec. Biol. Lett. 15, 507-516 (2010).</li><li>Lopez, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-dimensional+electrophoresis+in+proteome+expression+analysis.">Two-dimensional electrophoresis in proteome expression analysis.</a> J. Chromatogr. B. 849, 190-202 (2007).</li><li>Lowry, O. H., Rosenburg, N. J., Farr, A. L., Randall, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+measurement+with+the+Folin+phenol+reagent.">Protein measurement with the Folin phenol reagent.</a> J. Biol. Chem. 193, 265-275 (1951).</li><li>Smith, P. K., Krohn, R. I., Hermanson, G. T., Mallia, A. K., Gartner, F. H., Provenzano, M. D., Fujimoto, E. K., Goeke, N. M., Olson, B. J., Klenk, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+Protein+Using+Bicinchoninic+Acid.">Measurement of Protein Using Bicinchoninic Acid.</a> Anal. Biochem. 150, 76-85 (1985).</li><li>Norton, J. P., Clarkson, P. M., Graves, J. E., Litchfield, P. L., Kirwan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+creatine+kinase+activity+and+body+composition+in+males+and+females.">Serum creatine kinase activity and body composition in males and females.</a> Hum. Biol. 57, 591-598 (1985).</li><li>Amelink, G. J., Kamp, H. H., B&#228;r, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creatine+kinase+isoenzyme+profiles+after+exercise+in+the+rat:+sex-linked+differences+in+leakage+of+CK-MM.">Creatine kinase isoenzyme profiles after exercise in the rat: sex-linked differences in leakage of CK-MM.</a> Pfl&#252;gers. Arch. 412, 417-421 (1988).</li><li>Kendall, B., Eston, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise-induced+muscle+damage+and+the+potential+protective+role+of+estrogen.">Exercise-induced muscle damage and the potential protective role of estrogen.</a> Sports Med. 32 (2), 103-123 (2002).</li><li>Tiidus, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+oestrogen+influence+skeletal+muscle+damage,+inflammation,+and+repair?.">Can oestrogen influence skeletal muscle damage, inflammation, and repair?.</a> Br. J. Sports Med. 39, 251-253 (2005).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

الأسلوب البروتيوميات LC / MS المقدمة هنا هو بروتوكول الأكثر موثوقية وقابلة للتكرار لإجراء تحليل سريع لمستوى الأول للبروتيوم العضلات والهيكل العظمي. فإنه يسمح للمقارنة وسيلة معقولة من الدقة بين الجنسين. والبروتينات وفرة منخفضة تتطلب تجزيء عينة العضلات لإزالة أكبر عدد ممكن من البروتينات مقلص وقت ممكن ، وبالتالي زيادة وفرة البروتينات منخفضة. ويمكن تفصيل ملف بروتيوم أن يتحقق مع اختلاف شرائح الأس الهيدروجيني IPG نطاق والمواد الهلامية بديل نسبة الانحدار اذا شئت. البقع الفلورسنت أكثر حساسية موجودة ، ولكن من المستحسن أن كل مختبر تحديد الخطي من هذه البقع في النظام. لمزيد من التحليل الدقيق لتعبير البروتين نظام DIGE (ثنائي الأبعاد في النظام الكهربائي ، جل ، وجنرال الكتريك للرعاية الصحية علوم الحياة) يمكن استخدامها ، ولكن هذا لا تضيف مستوى من التعقيد إلى المنهجية. كذلك ، يمكن استخدام بروتوكول الموصوفة هنا مع معظم العانيسوء الأنسجة التي تم تسلسل الجينوم ، فضلا عن التسلسل دي نوفو من البروتين من أي مصدر ، ما دام يمكن أن تحل على هلام ثنائي الأبعاد ، حيث يمكن أن تتولد شظايا الأنزيمية تداخل باستخدام أنزيمات عالية النقاء بالإضافة لالتربسين. قد عينات الأنسجة من مصادر أخرى تتطلب بعض التعديلات في منهجية الاستخراج ، وخصوصا اذا يبحث عن بروتينات الغشاء ومسعور ، ومع ذلك ، كانت لدينا نتائج جيدة باستخدام هذا البروتوكول مع القلب والكبد والكلى وأنسجة المخ. قد يتم الكشف عن الأخرى في مرحلة ما بعد متعدية التعديلات عن طريق تعديل قاعدة بيانات الطيف معايير البحث الشامل. باختصار ، لقد قدمنا ​​بروتوكول مفصلة معقول الأولية لتحليل التنميط بروتيوم.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم الكاشف </th><th> نوع </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td> PepClean C - 18 سبين أعمدة </td><td> مستهلكات </td><td> ThermoFisher علمي </td><td> PI - 89870 </td><td></td></tr><tr><td> متآلف Pepswift العمود (100um × 5 سم) </td><td> مستهلكات </td><td> Dionex </td><td> 162348 </td><td></td></tr><tr><td> المعيار مسبقة الصنع 10.5 ٪ -14 ٪ ، حمض الهيدروكلوريك تريس SDS بولي أكريلاميد المواد الهلامية </td><td> مستهلكات </td><td> BioRad </td><td> 345-0106 </td><td></td></tr><tr><td> Readystrip شرائط IPG </td><td> مستهلكات </td><td> BioRad </td><td> تفاوت درجة الحموضة نطاقات </td><td></td></tr><tr><td> حامض الخليك </td><td> الكاشف </td><td> فيشر العلمية </td><td> A465 - 1 </td><td></td></tr><tr><td> الأسيتون </td><td> الكاشف </td><td> Pharmco </td><td> 329000 </td><td></td></tr><tr><td> أسيتونتريل </td><td> الكاشف </td><td> فيشر العلمية </td><td> A955 </td><td></td></tr><tr><td> Agarose </td><td> الكاشف </td><td> BioRad </td><td> 163-2111 </td><td> غطاء حل </td></tr><tr><td> بيكربونات الأمونيوم </td><td> الكاشف </td><td> Fluka </td><td> 40867 </td><td></td></tr><tr><td> زرقة البروموفينول </td><td> الكاشف </td><td> فيشر العلمية </td><td> BP114 </td><td></td></tr><tr><td> الحيوي Lyte Ampholytes </td><td> الكاشف </td><td> BioRad </td><td></td><td> تفاوت درجة الحموضة نطاقات </td></tr><tr><td> الفصول </td><td> الكاشف </td><td> USB </td><td> 13361 </td><td></td></tr><tr><td> Commassie الزرقاء R - 250 </td><td> الكاشف </td><td> ThermoFisher علمي </td><td> 20278 </td><td></td></tr><tr><td> Dithiothreitol (DTT) </td><td> الكاشف </td><td> USB </td><td> 15395 </td><td></td></tr><tr><td> حمض الفورميك </td><td> الكاشف </td><td> ThermoFisher علمي </td><td> 28905 </td><td></td></tr><tr><td> الغليسيرول </td><td> الكاشف </td><td> سيغما الدريخ </td><td> G6279 </td><td></td></tr><tr><td> جليكاين </td><td> الكاشف </td><td> USB </td><td> 16407 </td><td></td&gt; </tr><tr><td> Iodoacetamide </td><td> الكاشف </td><td> سيغما الدريخ </td><td> I6125 </td><td></td></tr><tr><td> الميثانول </td><td> الكاشف </td><td> فيشر العلمية </td><td> A452 </td><td></td></tr><tr><td> الزيوت المعدنية </td><td> الكاشف </td><td> BioRad </td><td> 163-2129 </td><td></td></tr><tr><td> كبريتات الصوديوم دوديسيل </td><td> الكاشف </td><td> سيغما الدريخ </td><td> L6026 </td><td></td></tr><tr><td> قاعدة تريس </td><td> الكاشف </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 93349 </td><td></td></tr><tr><td> تريس [2 - carboexyethyl] الفوسفين </td><td> الكاشف </td><td> ThermoFisher علمي </td><td> 77720 </td><td></td></tr><tr><td> التربسين Endoproteinase ، TPCK يعامل الصف MS ، </td><td> الكاشف </td><td> ثقب </td><td> 90055 </td><td> تعديل </td></tr><tr><td> اليوريا </td><td> الكاشف </td><td> USB </td><td> 75826 </td><td></td></tr><tr><td> ماء </td><td> الكاشف </td><td> وBurdick جاكسون </td><td> 365 </td><td></td></tr><tr><td> Centrivap المكثف </td><td> Tool </td><td> Labconco </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Exquest بقعة القاطع </td><td> أداة </td><td> BioRad </td><td></td><td></td></tr><tr><td> LCQ عشاري XP ماكس أيون فخ مطياف الكتلة </td><td> أداة </td><td> ThermoFisher علمي </td><td></td><td></td></tr><tr><td> بمحركات مدقة </td><td> أداة </td><td> Kontes كورب </td><td></td><td></td></tr><tr><td> البولي بروبلين التحريك </td><td> أداة </td><td> BioSpec برود </td><td></td><td></td></tr><tr><td> قضبان </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> متلون IEF الخلية </td><td> أداة </td><td> BioRad </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sonicator </td><td> أداة </td><td> برانسون </td><td></td><td></td></tr><tr><td> مساح بلس HPLC نظام </td><td> أداة </td><td> ThermoFisher علمي </td><td></td><td></td></tr><tr><td> VersaDoc التصوير نظام </td><td> أداة </td><td> BioRad </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

skeletal muscle gender dimorphism from proteomics

ويتحدد في المقام الأول تقلص العضلات والهيكل العظمي الإجمالي في عدد صغير نسبيا من البروتينات مقلص ، ولكن هذا النسيج هو أيضا قابل للتكيف بشكل ملحوظ إلى عوامل بيئية مثل تضخم 1 التي تمارس المقاومة وضمور بواسطة الترك. وبالتالي فإنه يسلك إعادة عرض والتكيف مع الضغوطات (الحرارة ، ونقص التروية ، والمعادن الثقيلة ، الخ.) 2،3. يمكن أن يحدث ضرر لعضلة من قبل قوة العضلات في حين تبذل التطويل ، ما يسمى ب 4 انكماش غريب الأطوار. يمكن أن تتلف البروتينات مقلص في مثل الاجهاد وتحتاج إلى إصلاح ، المتردية و / أو resynthesized ، وهذه المهام ليست جزءا من البروتينات مقلص ، ولكن من البروتينات الأخرى أقل توافرا في الخلية. لتحديد ما ينطوي فرعية من البروتينات في تحسين هذا النوع من الضرر ، لا بد من إنشاء بروتيوم العالمية قبل التمرين 5 ثم تبعها بعد ذلك إلى ممارسة لتحديد الفرقتعبير البروتين وبالتالي تسليط الضوء على البروتينات مرشح في التكيف مع الأضرار وإصلاحها. وعلاوة على ذلك ، أجريت معظم الدراسات من الهيكل العظمي والعضلات على الذكور من الأنواع ، وبالتالي قد لا تكون ممثلة للعضلة الإناث. في هذه المقالة نقدم طريقة لاستخراج البروتينات بتكاثر من عضلات الذكور والإناث ، والتي تفصلها عن طريق الكهربائي للهلام ثنائي الأبعاد تليها عالية التصوير الرقمي القرار 6. وهذا يوفر بروتوكول للبقع (والبروتينات التي تم تحديدها لاحقا) التي تظهر إحصائيا (P &lt;0.05) شقين زيادة أو نقصان ، تظهر أو تختفي من سيطرة الدولة. ثم يتم استئصال هذه ، ويتفاعل مع التربسين ومفصولة اللوني السائل ذات الضغط العالي بالإضافة إلى مطياف الكتلة (LC / MS) لتحديد البروتين (LC / MS / MS) 5. ويمكن استخدام هذه المنهجية (الشكل 1) في العديد من الأنسجة مع قليل من دون تعديل (الكبد والمخ ، والاستماعر الخ).

Watch this Scientific Journal Video about Skeletal Muscle Gender Dimorphism from Proteomics at JoVE.com

Skeletal Muscle Gender Dimorphism from Proteomics

مجموعة مباشرة إلى الأمام من الأساليب لعزل وتحديد هوية من البروتينات الأكثر وفرة وأعرب في العضلات والهيكل العظمي. ويستشف حوالي 800 البقع على هلام ثنائي الأبعاد من العضلات 10 ملغ ، وهذا يسمح لتحديد نوع الجنس تعبير البروتين. هذه الأساليب سوف تعطي نتائج تعادل في معظم الأنسجة.

الهيكل العظمي مثنوية الشكل الجنس العضلات من البروتين

Gross contraction in skeletal muscle is primarily determined by a relatively small number of contractile proteins, however this tissue is also remarkably ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Myo-mechanical Analysis of Isolated Skeletal Muscle

ميو الميكانيكية وتحليل الهيكل العظمي والعضلات المعزولة

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force ...

Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice

الظنبوب عانى من قطع العصب - نموذج موحد لإزالة التعصيب الناجم عن ضمور العضلات الهيكلية في الفئران

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. ...

Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergstr&#246;m Technique

Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified BergstrÃƒÆ’Ã‚Â¶m Technique

الهيكل العظمي إجراءات خزعة العضلات البشرية باستخدام تقنية التعديل بيرجستروم

The percutaneous biopsy technique enables researchers and clinicians to collect skeletal muscle tissue samples. The technique is safe and highly ...

Preparation and Respirometric Assessment of Mitochondria Isolated from Skeletal Muscle Tissue Obtained by Percutaneous Needle Biopsy

تقييم إعداد وRespirometric من الميتوكوندريا المعزولة من الأنسجة العضلية الهيكلية التي تحصل عليها عن طريق الجلد إبرة الخزعة

Respirometric profiling of isolated mitochondria is commonly used to investigate electron transport chain function. We describe a method for obtaining ...

Quantitative Magnetic Resonance Imaging of Skeletal Muscle Disease

الكمي التصوير بالرنين المغناطيسي من مرض العضلات والهيكل العظمي

Quantitative magnetic resonance imaging (qMRI) describes the development and use of MRI to quantify physical, chemical, and/or biological properties of ...

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

الانسان<em&gt; المتسعة الوحشية</em&gt; الهيكل العظمي خزعة العضلات باستخدام ويل Blakesley مبضع المحارات

Percutaneous muscle biopsy using the Weil-Blakesley conchotome is well established in both clinical and research practice. It is a safe, effective and ...

Induction and Assessment of Exertional Skeletal Muscle Damage in Humans

الاستقراء وتقييم الأضرار الجهدي الهيكل العظمي والعضلات في البشر

Contraction-induced muscle damage via voluntary eccentric (lengthening) contractions offers an excellent model for studying muscle adaptation and recovery ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

الفوسفور 31 الرنين المغناطيسي الطيفي: أداة لقياس<em&gt; في فيفو</em&gt; القدرة الميتوكوندريا الفسفرة التأكسدية في العضلات الهيكلية البشرية

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Semi-automated Analysis of Mouse Skeletal Muscle Morphology and Fiber-type Composition

تحليل شبه الآلي للماوس الهيكل العظمى والعضلات مورفولوجيا وتكوين نوع الألياف

For years, distinctions between skeletal muscle fiber types were best visualized by myosin-ATPase staining. More recently, immunohistochemical staining of ...

Skeletal Muscle Neurovascular Coupling, Oxidative Capacity, and Microvascular Function with 'One Stop Shop' Near-infrared Spectroscopy

اقتران نيوروفاسكولار الهيكل العظمى والعضلات والقدرات الأكسدة والدالة ميكروفاسكولار مع 'واحد وقف متجر' القريبة من الأشعة تحت الحمراء الطيفي

Exercise represents a major hemodynamic stress that demands a highly coordinated neurovascular response in order to match oxygen delivery to metabolic ...