Name: isolation of mouse lung dendritic cells
Uploaded: 2011-11-22T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells at JoVE.com

De auteurs willen graag naar Marilyn Dietrich danken aan het LSU Flow Cytometry Core Faciliteit voor haar hulp met de cel sorteer-en Peter Mottram voor zijn hulp bij de microfoto&#39;s. Dit werk werd gefinancierd door de Flight Attendant Medical Research Institute, het LSU-Competitive Research Program Award, en de NIH / NIAID Subsidies P20 RR020159 en R03AI081171.

1. Longperfusie en enkele celsuspensie <ol><li> Euthanaseren van de muis met een intraperitoneale injectie van ketamine / xylazine anesthesiemengsel (in mg / muis ketamine 1,8, xylazine 0,19) en verbloeding via de lies </li><li> Expose de borstholte door het snijden en voorzichtig terug te trekken de buitenste schil van het buikvlies. Ga verder naar het membraan openen door het snijden van de ribbenkast aan zowel het hart en de longen bloot te leggen. </li><li> Perfuseren zachtjes de longen met behulp van een 5 ml inj...

<ol>
	<li>Pulendran, B., Palucka, K., Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensing+pathogens+and+tuning+immune+responses.">Sensing pathogens and tuning immune responses.</a> Science. 293, 253-256 (2001).</li><li>Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunobiology+of+dendritic+cells.">Immunobiology of dendritic cells.</a> Annual Review of Immunology. 18, 767-811 (2000).</li><li>Manicassamy, S., Pulendran, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cell+control+of+tolerogenic+responses.">Dendritic cell control of tolerogenic responses.</a> Immunol. Rev. 241, 206-227 (2011).</li><li>Steinman, R. M., Cohn, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+novel+cell+type+in+peripheral+lymphoid+organs+of+mice.+I.+Morphology,+quantitation,+tissue+distribution.">Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution.</a> J. Exp. Med. 137, 1142-1162 (1973).</li><li>Asselin-Paturel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+type+I+IFN-producing+cells+are+immature+APCs+with+plasmacytoid+morphology.">Mouse type I IFN-producing cells are immature APCs with plasmacytoid morphology.</a> Nat. Immunol. 2, 1144-1150 (2001).</li><li>Chan, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-producing+killer+dendritic+cells+provide+a+link+between+innate+and+adaptive+immunity.">Interferon-producing killer dendritic cells provide a link between innate and adaptive immunity.</a> Nat. Med. 12, 207-213 (2006).</li><li>Taieb, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+dendritic+cell+subset+involved+in+tumor+immunosurveillance.">A novel dendritic cell subset involved in tumor immunosurveillance.</a> Nat. Med. 12, 214-219 (2006).</li><li>Guerrero-Plata, A., Kolli, D., Hong, C., Casola, A., Garofalo, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subversion+of+pulmonary+dendritic+cell+function+by+paramyxovirus+infections.">Subversion of pulmonary dendritic cell function by paramyxovirus infections.</a> Journal of Immunology. 182, 3072-3083 (2009).</li><li>Larson, R. S., Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+leukocyte+integrins.">Structure and function of leukocyte integrins.</a> Immunol. Rev. 114, 181-217 (1990).</li><li>Sung, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+major+lung+CD103+(alphaE)-beta7+integrin-positive+epithelial+dendritic+cell+population+expressing+Langerin+and+tight+junction+proteins.">A major lung CD103 (alphaE)-beta7 integrin-positive epithelial dendritic cell population expressing Langerin and tight junction proteins.</a> J. Immunol. 176, 2161-2172 (2006).</li><li>Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+CD11c++MHC+class+II-+precursors+generate+lung+dendritic+cells+during+respiratory+viral+infection,+but+are+depleted+in+the+process.">Local CD11c+ MHC class II- precursors generate lung dendritic cells during respiratory viral infection, but are depleted in the process.</a> J. Immunol. 177, 2536-2542 (2006).</li><li>Bhatia, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+host+defense+against+Aspergillus+fumigatus+involves+alveolar+macrophages+with+a+predominance+of+alternatively+activated+phenotype.">Rapid host defense against Aspergillus fumigatus involves alveolar macrophages with a predominance of alternatively activated phenotype.</a> PLoS One. 6, e15943-e15943 (2011).</li><li>Shao, Z., Makinde, T. O., McGee, H. S., Wang, X., Agrawal, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fms-like+tyrosine+kinase+3+ligand+regulates+migratory+pattern+and+antigen+uptake+of+lung+dendritic+cell+subsets+in+a+murine+model+of+allergic+airway+inflammation.">Fms-like tyrosine kinase 3 ligand regulates migratory pattern and antigen uptake of lung dendritic cell subsets in a murine model of allergic airway inflammation.</a> J. Immunol. 183, 7531-75381 (2009).</li><li>Hao, X., Kim, T. S., Braciale, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+response+of+respiratory+dendritic+cell+subsets+to+influenza+virus+infection.">Differential response of respiratory dendritic cell subsets to influenza virus infection.</a> J. Virol. 82, 4908-4919 (2008).</li></ol>

Isolatie van pulmonale muis DC is een belangrijke techniek voor de studie van een breed scala van respiratoire stimuli. Het proces van het verkrijgen van deze cellen bevat cruciale stappen die het verlies van cellen en levensvatbaarheid van de cellen en zuiverheid te voorkomen. Perfusie van de long voor de collectie zal helpen om een ​​perifere cellen te elimineren als contaminant erytrocyten te verminderen. Het gebruik van de geautomatiseerde dissociatie kan worden advanteogus wanneer een groot aantal van de longen...

<table width="200" border="1"><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogus nummer </td><td> Commentaar (optioneel) </td></tr><tr><td> ACK lyserende buffer </td><td> Invitrogen </td><td> D6-0005DG </td><td></td></tr><tr><td> Anti-muis CD11c (HL3) </td><td> BD Pharmingen </td><td> 5580979 </td><td> PE-Cy7 geconjugeerd </td></tr><tr><td> Anti-muis IA / IE (269) </td><td> BD-Pharmingen </td><td> 553623 </td><td> FITC-geconjugeerd </td></tr><tr><td> Collangenase Type 1A </td><td> Sigma </td><td> 9891-500MG </td><td></td></tr><tr><td> Cel filters </td><td> BD Falcon </td><td> 352340, 352360 </td><td></td></tr><tr><td> CD11c (N418) microbolletjes </td><td> Miltenyi </td><td> 130-052-001 </td><td></td></tr><tr><td> DNase I </td><td> Sigma </td><td> D5025-150KU </td><td></td></tr><tr><td> Balanced Salt Hank&#39;s oplossing </td><td> Invitrogen </td><td> 14170 </td><td></td></tr><tr><td> Hepes bufferoplossing </td><td> Invitrogen </td><td> 15630 </td><td></td></tr><tr><td> Petrischalen 60 mm </td><td> BD Falcon </td><td> 351016 </td><td></td></tr><tr><td> GentleMACS ™ C-buizen </td><td> Miltenyi </td><td> 130-093-237 </td><td></td></tr><tr><td> Gentle MACS dissociator </td><td> Miltentyi </td><td> 130-093-235 </td><td></td></tr><tr><td> AutoMACS-Pro ™ </td><td> Miltenyi </td><td> 130-092-545 </td><td></td></tr><tr><td> FASCS Aria </td><td> BD </td><td></td><td></td></tr></table>

isolation of mouse lung dendritic cells

Lung dendritische cellen (DC) spelen een fundamentele rol in sensing binnendringende ziekteverwekkers 1,2 als in de controle van tolerogene reacties 3 in de luchtwegen. Ten minste drie belangrijke subsets van long dendritische cellen zijn beschreven bij muizen: de conventionele DC (CDC) 4, plasmacytoïde DC (PDC) 5 en de IFN-producerende killer DC (IKDC) 6,7. De CDC subset is de meest prominente DC subset in de longen 8. De gemeenschappelijke marker bekend bij DC subsets te identificeren is CD11c, een type I transmembraan integrine (β2), die ook tot uitdrukking op monocyten, macrofagen, neutrofielen en een aantal B-cellen 9. In sommige weefsels, met behulp van CD11c als een marker voor muis-DC te identificeren geldig is, net als in de milt, waar de meeste CD11c + cellen vertegenwoordigen de CDC-subset die hoge niveaus van de belangrijkste histocompatibiliteitscomplex klasse II (MHC-II) uitdrukt. Echter, de long is een meer heterogeen weefsel waar wordenkant DC subsets, is er een hoog percentage van een afzonderlijke cel bevolking die hoge niveaus van CD11c uitdrukt bout lage niveaus van MHC-II. Op basis van haar karakterisering en meestal op de uitdrukking van F4/80, een milt macrofaag marker, heeft de CD11c hi MHC-II-lo long celpopulatie is geïdentificeerd als pulmonaire macrofagen, 10 en meer recentelijk, als een potentiële voorloper DC 11. In tegenstelling tot de muis PDC, heeft de studie van de specifieke rol van CDC in de pulmonale immuunreactie te wijten aan het ontbreken van een specifieke marker die kan helpen bij de isolatie van deze cellen beperkt. Daarom is in dit werk beschrijven we een procedure om sterk gezuiverd muis long CDC isoleren. De isolatie van pulmonale DC subsets is een zeer nuttig instrument om inzicht in de functie van deze cellen te krijgen in reactie op respiratoire pathogenen alsmede milieu-factoren die de gastheer immuunreactie in de longen kan leiden.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells at JoVE.com

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Een sterk gezuiverde bereiding van de muis long dendritische cellen wordt beschreven. Specifieke aandacht wordt gegeven aan de isolatie van de conventionele dendritische cel subset.

Isolatie van Mouse Lung dendritische cellen

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

Isolatie van Mouse buikholte Cellen

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Isolatie en karakterisering van dendritische cellen en macrofagen van de muis Darm

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

Isolatie van myeloïde dendritische cellen en epitheelcellen van Human Thymus

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

An Efficient and High Yield Method for Isolation of Mouse Dendritic Cell Subsets

Een efficiënte en High Yield methode voor het isoleren van de muis dendritische cel subsets

Dendritic cells (DCs) are professional antigen-presenting cells primarily responsible for acquiring, processing and presenting antigens on antigen ...

Characterization of Human Monocyte-derived Dendritic Cells by Imaging Flow Cytometry: A Comparison between Two Monocyte Isolation Protocols

Karakterisering van Human-monocyten afgeleide dendritische cellen door Imaging flowcytometrie: Een vergelijking tussen twee monocyten Isolation Protocollen

Dendritic cells (DCs) are antigen presenting cells of the immune system that play a crucial role in lymphocyte responses, host defense mechanisms, and ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fluorescentie-geactiveerde Cell Sorting voor Zuivering van plasmacytoïde dendritische cellen van de muis Bone Marrow

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Legionella pneumophila Outer Membrane Vesicles: Isolation and Analysis of Their Pro-inflammatory Potential on Macrophages

Legionella pneumophila Outer Membrane Vesicles: Isolation and Analysis of Their Pro-inflammatory Potential on Macrophages

Legionella pneumophila Outer membraanvesicles: Isolatie en analyse van hun pro-inflammatoire Potential op macrofagen

Bacteria are able to secrete a variety of molecules via various secretory systems. Besides the secretion of molecules into the extracellular space or ...

Human Lung Dendritic Cells: Spatial Distribution and Phenotypic Identification in Endobronchial Biopsies Using Immunohistochemistry and Flow Cytometry

Human Lung dendritische cellen: ruimtelijke verdeling en fenotypische Identification in Endobronchiale biopten middels immunohistochemie en flowcytometrie

The lungs are constantly exposed to the external environment, which in addition to harmless particles, also contains pathogens, allergens, and toxins. In ...

Precision-cut Mouse Lung Slices to Visualize Live Pulmonary Dendritic Cells

Precisie-cut Mouse Lung Slices Live Pulmonary visualiseren van dendritische cellen

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for ...

Isolation of Dendritic Cells from the Human Female Reproductive Tract for Phenotypical and Functional Studies

Isolatie van dendritische cellen uit de menselijke vrouwelijke voortplantingssysteem voor Phenotypical en functionele Studies

The characterization of the human dendritic cells (DCs) resident in mucosal tissues is challenging due to the difficulty in obtaining samples, and the low ...