Name: isolation of mouse lung dendritic cells
Uploaded: 2011-11-22T13:00:00
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Die Autoren möchten sich an Marilyn Dietrich an der LSU Durchflusszytometrie Core Facility danken für ihre Hilfe bei der Zellsortierung und Peter Mottram für seine Unterstützung bei der Mikrophotographien. Diese Arbeit wurde von der Flight Attendant Medical Research Institute, die LSU-Competitive Research Program Award und den NIH / NIAID Grants P20 RR020159 und R03AI081171 finanziert.

1. Lung Perfusion und einzigen Zellsuspension <ol><li> Euthanize die Maus mit einer intraperitonealen Injektion von Ketamin / Xylazin Narkose-Gemisch (in mg / Maus Ketamin 1,8, Xylazin 0,19) und Ausbluten über die Vena femoralis </li><li> Expose der Brusthöhle durch Schneiden und vorsichtig wieder die Außenhaut des Bauchfells. Fahren Sie mit dem Zwerchfell, indem die Rippen, um sowohl die Herz und Lunge aussetzen zu öffnen. </li><li> Perfundieren sanft die Lungen mit einer 5 ml Spritze mit EDTA-HBSS (1mM EDTA in C...

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	<li>Pulendran, B., Palucka, K., Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensing+pathogens+and+tuning+immune+responses.">Sensing pathogens and tuning immune responses.</a> Science. 293, 253-256 (2001).</li><li>Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunobiology+of+dendritic+cells.">Immunobiology of dendritic cells.</a> Annual Review of Immunology. 18, 767-811 (2000).</li><li>Manicassamy, S., Pulendran, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cell+control+of+tolerogenic+responses.">Dendritic cell control of tolerogenic responses.</a> Immunol. Rev. 241, 206-227 (2011).</li><li>Steinman, R. M., Cohn, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+novel+cell+type+in+peripheral+lymphoid+organs+of+mice.+I.+Morphology,+quantitation,+tissue+distribution.">Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution.</a> J. Exp. Med. 137, 1142-1162 (1973).</li><li>Asselin-Paturel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+type+I+IFN-producing+cells+are+immature+APCs+with+plasmacytoid+morphology.">Mouse type I IFN-producing cells are immature APCs with plasmacytoid morphology.</a> Nat. Immunol. 2, 1144-1150 (2001).</li><li>Chan, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-producing+killer+dendritic+cells+provide+a+link+between+innate+and+adaptive+immunity.">Interferon-producing killer dendritic cells provide a link between innate and adaptive immunity.</a> Nat. Med. 12, 207-213 (2006).</li><li>Taieb, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+dendritic+cell+subset+involved+in+tumor+immunosurveillance.">A novel dendritic cell subset involved in tumor immunosurveillance.</a> Nat. Med. 12, 214-219 (2006).</li><li>Guerrero-Plata, A., Kolli, D., Hong, C., Casola, A., Garofalo, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subversion+of+pulmonary+dendritic+cell+function+by+paramyxovirus+infections.">Subversion of pulmonary dendritic cell function by paramyxovirus infections.</a> Journal of Immunology. 182, 3072-3083 (2009).</li><li>Larson, R. S., Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+leukocyte+integrins.">Structure and function of leukocyte integrins.</a> Immunol. Rev. 114, 181-217 (1990).</li><li>Sung, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+major+lung+CD103+(alphaE)-beta7+integrin-positive+epithelial+dendritic+cell+population+expressing+Langerin+and+tight+junction+proteins.">A major lung CD103 (alphaE)-beta7 integrin-positive epithelial dendritic cell population expressing Langerin and tight junction proteins.</a> J. Immunol. 176, 2161-2172 (2006).</li><li>Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+CD11c++MHC+class+II-+precursors+generate+lung+dendritic+cells+during+respiratory+viral+infection,+but+are+depleted+in+the+process.">Local CD11c+ MHC class II- precursors generate lung dendritic cells during respiratory viral infection, but are depleted in the process.</a> J. Immunol. 177, 2536-2542 (2006).</li><li>Bhatia, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+host+defense+against+Aspergillus+fumigatus+involves+alveolar+macrophages+with+a+predominance+of+alternatively+activated+phenotype.">Rapid host defense against Aspergillus fumigatus involves alveolar macrophages with a predominance of alternatively activated phenotype.</a> PLoS One. 6, e15943-e15943 (2011).</li><li>Shao, Z., Makinde, T. O., McGee, H. S., Wang, X., Agrawal, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fms-like+tyrosine+kinase+3+ligand+regulates+migratory+pattern+and+antigen+uptake+of+lung+dendritic+cell+subsets+in+a+murine+model+of+allergic+airway+inflammation.">Fms-like tyrosine kinase 3 ligand regulates migratory pattern and antigen uptake of lung dendritic cell subsets in a murine model of allergic airway inflammation.</a> J. Immunol. 183, 7531-75381 (2009).</li><li>Hao, X., Kim, T. S., Braciale, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+response+of+respiratory+dendritic+cell+subsets+to+influenza+virus+infection.">Differential response of respiratory dendritic cell subsets to influenza virus infection.</a> J. Virol. 82, 4908-4919 (2008).</li></ol>

Isolation der pulmonalen Maus DC ist eine wichtige Technik für die Untersuchung einer breiten Palette von Atemwegs-Reize. Das Verfahren zur Erlangung dieser Zellen enthält kritische Schritte, dass der Verlust von Zellen sowie die Lebensfähigkeit der Zellen und Reinheit zu verhindern. Perfusion der Lunge vor der Abholung wird dazu beitragen, die peripheren Zellen zu eliminieren, sowie verringern Verunreinigungen Erythrozyten. Der Einsatz der automatisierten Dissoziation kann advanteogus werden, wenn eine große Zahl v...

<table width="200" border="1"><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare (optional) </td></tr><tr><td> ACK Lysepuffer </td><td> Invitrogen </td><td> D6-0005DG </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Maus-CD11c (HL3) </td><td> BD Pharmingen </td><td> 5580979 </td><td> PE-Cy7 konjugierte </td></tr><tr><td> Anti-Maus-IA / IE (269) </td><td> BD-Pharmingen </td><td> 553623 </td><td> FITC-konjugierten </td></tr><tr><td> Collangenase Typ 1A </td><td> Sigma </td><td> 9891-500MG </td><td></td></tr><tr><td> Zell-Siebe </td><td> BD Falcon </td><td> 352340, 352360 </td><td></td></tr><tr><td> CD11c (N418) Microbeads </td><td> Miltenyi </td><td> 130-052-001 </td><td></td></tr><tr><td> DNase I </td><td> Sigma </td><td> D5025-150KU </td><td></td></tr><tr><td> Hanks Balanced Salt Lösung </td><td> Invitrogen </td><td> 14170 </td><td></td></tr><tr><td> Hepes-Pufferlösung </td><td> Invitrogen </td><td> 15630 </td><td></td></tr><tr><td> Petrischalen 60 mm </td><td> BD Falcon </td><td> 351016 </td><td></td></tr><tr><td> GentleMACS ™ C Rohren </td><td> Miltenyi </td><td> 130-093-237 </td><td></td></tr><tr><td> Gentle MACS dissociator </td><td> Miltentyi </td><td> 130-093-235 </td><td></td></tr><tr><td> AutoMACS-Pro ™ </td><td> Miltenyi </td><td> 130-092-545 </td><td></td></tr><tr><td> FASCS Aria </td><td> BD </td><td></td><td></td></tr></table>

isolation of mouse lung dendritic cells

Lung dendritische Zellen (DC) spielen eine fundamentale Rolle in der Sensorik eindringende Krankheitserreger 1,2 sowie in der Kontrolle von tolerogenen Antworten 3 in die Atemwege. Mindestens drei Teilmengen von Lungen-dendritische Zellen in Mäusen beschrieben worden: konventionelle DC (CDC) 4, plasmazytoide DC (pDC) 5 und die IFN-Produktion Killer DC (IKDC) 6,7. Die CDC Subset ist das prominenteste DC Teilmenge in der Lunge 8. Die gemeinsame Marker bekannt, DC Teilmengen zu identifizieren ist CD11c, eine Typ-I-Transmembran-Integrin (β2), die auch auf Monozyten, Makrophagen, Neutrophilen und einigen B-Zellen 9 ist zum Ausdruck gebracht. In einigen Geweben, mit CD11c als Marker zur Maus DC identifizieren gilt, wie in der Milz, wo die meisten CD11c + Zellen stellen die CDC Subset, das hohe Niveau des Haupthistokompatibilitätskomplex Klasse II (MHC-II) zum Ausdruck bringt. Allerdings ist die Lunge ein heterogenes Gewebe, wo seinSeite DC Teilmengen gibt es einen hohen Prozentsatz von einer deutlichen Zellpopulation, die ein hohes Maß an CD11c drückt Kampf geringe MHC-II. Basierend auf der Charakterisierung und vor allem auf seinen Ausdruck F4/80, eine Milz-Makrophagen-Marker, die CD11c hallo MHC-II lo Lunge Zellpopulation Lungenmakrophagen 10 und in jüngerer Zeit identifiziert worden, wie ein potenzieller DC Vorstufe 11. Im Gegensatz zu Maus pDC, hat das Studium der spezifischen Rolle der CDC in den pulmonalen Immunantwort wurde durch das Fehlen einer spezifischen Markierung, die in die Isolation dieser Zellen helfen könnte begrenzt. Daher wird in dieser Arbeit beschreiben wir ein Verfahren zu hoch gereinigten Mauslunge cDC isolieren. Die Isolierung der pulmonalen DC Teilmengen stellt ein sehr nützliches Werkzeug, um Einblicke in die Funktion dieser Zellen in Reaktion auf die Erreger respiratorischer Erkrankungen sowie Umwelt-Faktoren, die die Immunantwort des Wirtes in der Lunge auslösen kann gewinnen.

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Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Ein hoch gereinigte Präparation von Mauslunge dendritischen Zellen beschrieben wird. Besonderer Nachdruck wird auf die Isolierung von konventionellen dendritischen Zellen Teilmenge gegeben.

Isolierung von Maus Lung Dendritischen Zellen

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

Isolierung von Maus Bauchhöhle Cells

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Isolierung und Charakterisierung von dendritischen Zellen und Makrophagen aus dem Mausdarm

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

Isolierung von myeloider dendritischer Zellen und Epithelzellen Menschliche Thymus

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

An Efficient and High Yield Method for Isolation of Mouse Dendritic Cell Subsets

Eine effiziente und High-Yield-Methode zur Isolierung von Maus über dendritische Zellen Subsets

Dendritic cells (DCs) are professional antigen-presenting cells primarily responsible for acquiring, processing and presenting antigens on antigen ...

Characterization of Human Monocyte-derived Dendritic Cells by Imaging Flow Cytometry: A Comparison between Two Monocyte Isolation Protocols

Charakterisierung von humanen Monozyten-abgeleiteten dendritischen Zellen durch Imaging Durchflusszytometrie: Ein Vergleich zwischen zwei Monozyt Isolation Protokolle

Dendritic cells (DCs) are antigen presenting cells of the immune system that play a crucial role in lymphocyte responses, host defense mechanisms, and ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fluoreszenz-aktivierte Zellsortierung zur Reinigung von Plasmazytoide dendritischer Zellen aus dem Knochenmark der Maus

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Legionella pneumophila Outer Membrane Vesicles: Isolation and Analysis of Their Pro-inflammatory Potential on Macrophages

Legionella pneumophila Outer Membrane Vesicles: Isolation and Analysis of Their Pro-inflammatory Potential on Macrophages

Legionella pneumophila der äußeren Membran - Vesikeln: Isolierung und Analyse ihrer Pro-inflammatorische Potential auf Makrophagen

Bacteria are able to secrete a variety of molecules via various secretory systems. Besides the secretion of molecules into the extracellular space or ...

Human Lung Dendritic Cells: Spatial Distribution and Phenotypic Identification in Endobronchial Biopsies Using Immunohistochemistry and Flow Cytometry

Menschliche Lunge Dendritische Zellen: Räumliche Verteilung und phänotypische Identifizierung in Endobronchial Biopsien mittels Immunhistochemie und Durchflusszytometrie

The lungs are constantly exposed to the external environment, which in addition to harmless particles, also contains pathogens, allergens, and toxins. In ...

Precision-cut Mouse Lung Slices to Visualize Live Pulmonary Dendritic Cells

Precision-cut Maus Lung Slices Live-Pulmonary Dendritische Zellen sichtbar zu machen

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for ...

Isolation of Dendritic Cells from the Human Female Reproductive Tract for Phenotypical and Functional Studies

Isolation von dendritischen Zellen aus menschlichen weiblichen Fortpflanzungsorgane für phänotypische und funktionelle Studien

The characterization of the human dendritic cells (DCs) resident in mucosal tissues is challenging due to the difficulty in obtaining samples, and the low ...