Name: isolation of mouse lung dendritic cells
Uploaded: 2011-11-22T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells at JoVE.com

Forfatterne ønsker å takke for Marilyn Dietrich på LSU flowcytometrisystemer kjerner Facility for hennes hjelp med celle sortering og Peter Mottram for hans hjelp med microphotographs. Dette arbeidet ble finansiert av Flight Attendant Medical Research Institute, LSU-Competitive Research Program Award, og NIH / NIAID Grants P20 RR020159 og R03AI081171.

1. Lung perfusjon og single cellesuspensjon <ol><li> Avlive musen med en intraperitoneal injeksjon av ketamin / xylazin anestesiblanding (i mg / mus 1,8 ketamin, 0,19 xylazin) og exsanguination via femoral vein </li><li> Avdekk brysthula ved å klippe og forsiktig trekke tilbake den ytre huden av peritoneum. Fortsett å åpne membranen ved å kutte brystkassen å eksponere både hjertet og lungene. </li><li> Perfuse forsiktig lungene med en 5 ml sprøyte fylt med EDTA-HBSS (1mm EDTA i kalsium / magnesium-free HBSS). K...

<ol>
	<li>Pulendran, B., Palucka, K., Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensing+pathogens+and+tuning+immune+responses.">Sensing pathogens and tuning immune responses.</a> Science. 293, 253-256 (2001).</li><li>Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunobiology+of+dendritic+cells.">Immunobiology of dendritic cells.</a> Annual Review of Immunology. 18, 767-811 (2000).</li><li>Manicassamy, S., Pulendran, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cell+control+of+tolerogenic+responses.">Dendritic cell control of tolerogenic responses.</a> Immunol. Rev. 241, 206-227 (2011).</li><li>Steinman, R. M., Cohn, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+novel+cell+type+in+peripheral+lymphoid+organs+of+mice.+I.+Morphology,+quantitation,+tissue+distribution.">Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution.</a> J. Exp. Med. 137, 1142-1162 (1973).</li><li>Asselin-Paturel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+type+I+IFN-producing+cells+are+immature+APCs+with+plasmacytoid+morphology.">Mouse type I IFN-producing cells are immature APCs with plasmacytoid morphology.</a> Nat. Immunol. 2, 1144-1150 (2001).</li><li>Chan, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-producing+killer+dendritic+cells+provide+a+link+between+innate+and+adaptive+immunity.">Interferon-producing killer dendritic cells provide a link between innate and adaptive immunity.</a> Nat. Med. 12, 207-213 (2006).</li><li>Taieb, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+dendritic+cell+subset+involved+in+tumor+immunosurveillance.">A novel dendritic cell subset involved in tumor immunosurveillance.</a> Nat. Med. 12, 214-219 (2006).</li><li>Guerrero-Plata, A., Kolli, D., Hong, C., Casola, A., Garofalo, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subversion+of+pulmonary+dendritic+cell+function+by+paramyxovirus+infections.">Subversion of pulmonary dendritic cell function by paramyxovirus infections.</a> Journal of Immunology. 182, 3072-3083 (2009).</li><li>Larson, R. S., Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+leukocyte+integrins.">Structure and function of leukocyte integrins.</a> Immunol. Rev. 114, 181-217 (1990).</li><li>Sung, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+major+lung+CD103+(alphaE)-beta7+integrin-positive+epithelial+dendritic+cell+population+expressing+Langerin+and+tight+junction+proteins.">A major lung CD103 (alphaE)-beta7 integrin-positive epithelial dendritic cell population expressing Langerin and tight junction proteins.</a> J. Immunol. 176, 2161-2172 (2006).</li><li>Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+CD11c++MHC+class+II-+precursors+generate+lung+dendritic+cells+during+respiratory+viral+infection,+but+are+depleted+in+the+process.">Local CD11c+ MHC class II- precursors generate lung dendritic cells during respiratory viral infection, but are depleted in the process.</a> J. Immunol. 177, 2536-2542 (2006).</li><li>Bhatia, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+host+defense+against+Aspergillus+fumigatus+involves+alveolar+macrophages+with+a+predominance+of+alternatively+activated+phenotype.">Rapid host defense against Aspergillus fumigatus involves alveolar macrophages with a predominance of alternatively activated phenotype.</a> PLoS One. 6, e15943-e15943 (2011).</li><li>Shao, Z., Makinde, T. O., McGee, H. S., Wang, X., Agrawal, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fms-like+tyrosine+kinase+3+ligand+regulates+migratory+pattern+and+antigen+uptake+of+lung+dendritic+cell+subsets+in+a+murine+model+of+allergic+airway+inflammation.">Fms-like tyrosine kinase 3 ligand regulates migratory pattern and antigen uptake of lung dendritic cell subsets in a murine model of allergic airway inflammation.</a> J. Immunol. 183, 7531-75381 (2009).</li><li>Hao, X., Kim, T. S., Braciale, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+response+of+respiratory+dendritic+cell+subsets+to+influenza+virus+infection.">Differential response of respiratory dendritic cell subsets to influenza virus infection.</a> J. Virol. 82, 4908-4919 (2008).</li></ol>

Isolering av lunge mus DC er en viktig teknikk for studiet av et bredt spekter av luftveiene stimuli. Prosessen med å innhente disse cellene inkluderer kritiske trinnene som forhindrer tap av celler samt celleviabilitet og renhet. Perfusing lungene før samlingen vil bidra til å eliminere eventuelle perifere celler samt redusere forurensning erytrocytter. Bruk av automatiserte dissosiasjon kan advanteogus når et stort antall lungene blir håndtert, ellers kan du melde deg for alternativ protokollen, husk at spredning...

<table width="200" border="1"><tr><td> Navn på reagens </td><td> Firma </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer (valgfritt) </td></tr><tr><td> ACK Lysing buffer </td><td> Invitrogen </td><td> D6-0005DG </td><td></td></tr><tr><td> Anti-mus CD11c (HL3) </td><td> BD Pharmingen </td><td> 5580979 </td><td> PE-Cy7 konjugert </td></tr><tr><td> Anti-mus IA / IE (269) </td><td> BD-Pharmingen </td><td> 553623 </td><td> FITC konjugert </td></tr><tr><td> Collangenase Type 1A </td><td> Sigma </td><td> 9891-500mg </td><td></td></tr><tr><td> Cell siler </td><td> BD Falcon </td><td> 352340, 352360 </td><td></td></tr><tr><td> CD11c (N418) Microbeads </td><td> Miltenyi </td><td> 130-052-001 </td><td></td></tr><tr><td> DNase I </td><td> Sigma </td><td> D5025-150KU </td><td></td></tr><tr><td> Hank er Balanced Salt løsning </td><td> Invitrogen </td><td> 14170 </td><td></td></tr><tr><td> Hepes bufferløsning </td><td> Invitrogen </td><td> 15630 </td><td></td></tr><tr><td> Petriskåler 60 mm </td><td> BD Falcon </td><td> 351016 </td><td></td></tr><tr><td> GentleMACS ™ C rør </td><td> Miltenyi </td><td> 130-093-237 </td><td></td></tr><tr><td> Lett MACS dissociator </td><td> Miltentyi </td><td> 130-093-235 </td><td></td></tr><tr><td> AutoMACS-Pro ™ </td><td> Miltenyi </td><td> 130-092-545 </td><td></td></tr><tr><td> FASCS Aria </td><td> BD </td><td></td><td></td></tr></table>

isolation of mouse lung dendritic cells

Lung dendrittiske celler (DC) spiller en fundamental rolle i sensing invaderende patogener 1,2 samt kontroll av tolerogenic responser 3 i luftveiene. Minst tre undergrupper av lunge dendrittiske celler har blitt beskrevet i mus: konvensjonelle DC (CDC) 4, plasmacytoid DC (PDC) 5 og IFN-produserende drapsmann DC (IKDC) 6,7. CDC undergruppe er det mest fremtredende DC undergruppe i lungene 8. Den vanlige markør kjent for å identifisere DC undergrupper er CD11c, en type jeg transmembrane integrin (β2) som også er uttrykt på monocytter, makrofager, nøytrofile granulocytter og enkelte B-celler 9. I noen vev, ved hjelp CD11c som en markør for å identifisere mus DC er gyldig, som i milten, der de fleste CD11c + celler representere CDC undergruppe som uttrykker høye nivåer av de store histocompatibility komplekse klasse II (MHC-II). Imidlertid er lunge et mer heterogent vev der væreside DC undergrupper, det er en høy prosentandel av en tydelig celle befolkning som uttrykker høye nivåer av CD11c bout lave nivåer av MHC-II. Basert på karakterisering sin og det meste på sin uttrykk av F4/80, en milten macrophage markør har CD11c hi MHC-II lo lunge celle befolkningen blitt identifisert som lunge makrofager 10 og mer nylig, som en potensiell DC forløper 11. I motsetning til mus PDC, har studiet av den spesifikke rolle CDC i lungene immunresponsen vært begrenset på grunn av mangel på en bestemt markør som kan hjelpe i isolering av disse cellene. Derfor, i dette arbeidet, beskriver vi en prosedyre for å isolere svært renset mus lunge CDC. Isolering av pulmonale DC undergrupper representerer et meget nyttig verktøy for å få innsikt inn i funksjonen av disse cellene som svar på respiratoriske patogener samt miljøfaktorer som kan utløse vertens immunrespons i lungene.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells at JoVE.com

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Et høyt renset utarbeidelse av mus lunge dendrittiske celler er beskrevet. Spesifikk vekt er gitt til isolering av konvensjonelle dendrittiske celle delmengden.

Isolering av Mouse Lung dendrittiske celler

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Isolering og karakterisering av dendrittiske celler og makrofager fra musen Intestine

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

Isolering av myeloid dendrittiske celler og Epitelceller fra Menneskelig Thymus

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

An Efficient and High Yield Method for Isolation of Mouse Dendritic Cell Subsets

En effektiv og High Yield metode for isolering av mus dendrittiske cellen Delsett

Dendritic cells (DCs) are professional antigen-presenting cells primarily responsible for acquiring, processing and presenting antigens on antigen ...

Characterization of Human Monocyte-derived Dendritic Cells by Imaging Flow Cytometry: A Comparison between Two Monocyte Isolation Protocols

Karakterisering av menneske moncyttavledede dendrittiske celler ved Imaging flowcytometrisystemer: En sammenligning mellom to Monocyte Isolation protokoller

Dendritic cells (DCs) are antigen presenting cells of the immune system that play a crucial role in lymphocyte responses, host defense mechanisms, and ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fluorescens-aktivert cellesortering for Rensing av Plasmacytoid dendrittiske celler fra mus Bone Marrow

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Legionella pneumophila Outer Membrane Vesicles: Isolation and Analysis of Their Pro-inflammatory Potential on Macrophages

Legionella pneumophila Outer Membrane Vesicles: Isolation and Analysis of Their Pro-inflammatory Potential on Macrophages

Legionella pneumophila ytre membran Blemmer: Isolering og analyse av deres Pro-inflammatorisk potensialet på Makrofager

Bacteria are able to secrete a variety of molecules via various secretory systems. Besides the secretion of molecules into the extracellular space or ...

Human Lung Dendritic Cells: Spatial Distribution and Phenotypic Identification in Endobronchial Biopsies Using Immunohistochemistry and Flow Cytometry

Menneske Lung dendrittiske celler: Romlig fordeling og Fenotypisk Identifikasjon i Endobronchial Biopsi Bruke Immunohistochemistry og flowcytometri

The lungs are constantly exposed to the external environment, which in addition to harmless particles, also contains pathogens, allergens, and toxins. In ...

Precision-cut Mouse Lung Slices to Visualize Live Pulmonary Dendritic Cells

Precision-kutt Mouse Lung Slices å visualisere Live-lunge dendrittiske celler

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for ...

Isolation of Dendritic Cells from the Human Female Reproductive Tract for Phenotypical and Functional Studies

Isolering av dendrittiske celler fra den menneskelige kvinnelige skjede for Phenotypical og funksjonelle studier

The characterization of the human dendritic cells (DCs) resident in mucosal tissues is challenging due to the difficulty in obtaining samples, and the low ...