Name: isolation of mouse lung dendritic cells
Uploaded: 2011-11-22T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells at JoVE.com

Författarna vill tacka till Marilyn Dietrich vid LSU flödescytometrisystem Core Facility för hennes hjälp med cellen sortering och Peter Mottram för hans hjälp med mikrofotografier. Detta arbete har finansierats av Flight Attendant Medical Research Institute, LSU-Competitive Research Program Award och NIH / NIAID Bidrag P20 RR020159 och R03AI081171.

1. Lung perfusion och enda cellsuspensionen <ol><li> Euthanize musen med en intraperitoneal injektion av ketamin / xylazin anestesiblandningar (i mg / mus ketamin 1,8, xylazin 0,19) och exsanguination via femoral ven </li><li> Exponera brösthålan genom att klippa och försiktigt dra tillbaka den yttre huden på bukhinnan. Fortsätt att öppna membranet genom att skära av bröstkorgen för att exponera både hjärta och lungor. </li><li> BEGJUTA försiktigt i lungorna med hjälp av en 5 ml spruta fylld med EDTA-HBSS...

<ol>
	<li>Pulendran, B., Palucka, K., Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensing+pathogens+and+tuning+immune+responses.">Sensing pathogens and tuning immune responses.</a> Science. 293, 253-256 (2001).</li><li>Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunobiology+of+dendritic+cells.">Immunobiology of dendritic cells.</a> Annual Review of Immunology. 18, 767-811 (2000).</li><li>Manicassamy, S., Pulendran, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cell+control+of+tolerogenic+responses.">Dendritic cell control of tolerogenic responses.</a> Immunol. Rev. 241, 206-227 (2011).</li><li>Steinman, R. M., Cohn, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+novel+cell+type+in+peripheral+lymphoid+organs+of+mice.+I.+Morphology,+quantitation,+tissue+distribution.">Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution.</a> J. Exp. Med. 137, 1142-1162 (1973).</li><li>Asselin-Paturel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+type+I+IFN-producing+cells+are+immature+APCs+with+plasmacytoid+morphology.">Mouse type I IFN-producing cells are immature APCs with plasmacytoid morphology.</a> Nat. Immunol. 2, 1144-1150 (2001).</li><li>Chan, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-producing+killer+dendritic+cells+provide+a+link+between+innate+and+adaptive+immunity.">Interferon-producing killer dendritic cells provide a link between innate and adaptive immunity.</a> Nat. Med. 12, 207-213 (2006).</li><li>Taieb, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+dendritic+cell+subset+involved+in+tumor+immunosurveillance.">A novel dendritic cell subset involved in tumor immunosurveillance.</a> Nat. Med. 12, 214-219 (2006).</li><li>Guerrero-Plata, A., Kolli, D., Hong, C., Casola, A., Garofalo, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subversion+of+pulmonary+dendritic+cell+function+by+paramyxovirus+infections.">Subversion of pulmonary dendritic cell function by paramyxovirus infections.</a> Journal of Immunology. 182, 3072-3083 (2009).</li><li>Larson, R. S., Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+leukocyte+integrins.">Structure and function of leukocyte integrins.</a> Immunol. Rev. 114, 181-217 (1990).</li><li>Sung, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+major+lung+CD103+(alphaE)-beta7+integrin-positive+epithelial+dendritic+cell+population+expressing+Langerin+and+tight+junction+proteins.">A major lung CD103 (alphaE)-beta7 integrin-positive epithelial dendritic cell population expressing Langerin and tight junction proteins.</a> J. Immunol. 176, 2161-2172 (2006).</li><li>Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+CD11c++MHC+class+II-+precursors+generate+lung+dendritic+cells+during+respiratory+viral+infection,+but+are+depleted+in+the+process.">Local CD11c+ MHC class II- precursors generate lung dendritic cells during respiratory viral infection, but are depleted in the process.</a> J. Immunol. 177, 2536-2542 (2006).</li><li>Bhatia, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+host+defense+against+Aspergillus+fumigatus+involves+alveolar+macrophages+with+a+predominance+of+alternatively+activated+phenotype.">Rapid host defense against Aspergillus fumigatus involves alveolar macrophages with a predominance of alternatively activated phenotype.</a> PLoS One. 6, e15943-e15943 (2011).</li><li>Shao, Z., Makinde, T. O., McGee, H. S., Wang, X., Agrawal, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fms-like+tyrosine+kinase+3+ligand+regulates+migratory+pattern+and+antigen+uptake+of+lung+dendritic+cell+subsets+in+a+murine+model+of+allergic+airway+inflammation.">Fms-like tyrosine kinase 3 ligand regulates migratory pattern and antigen uptake of lung dendritic cell subsets in a murine model of allergic airway inflammation.</a> J. Immunol. 183, 7531-75381 (2009).</li><li>Hao, X., Kim, T. S., Braciale, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+response+of+respiratory+dendritic+cell+subsets+to+influenza+virus+infection.">Differential response of respiratory dendritic cell subsets to influenza virus infection.</a> J. Virol. 82, 4908-4919 (2008).</li></ol>

Isolering av pulmonell mus DC är en viktig teknik för att studera ett brett spektrum av respiratoriska stimuli. Processen för att erhålla dessa celler innehåller kritiska moment som förhindrar förlust av celler samt cellernas livskraft och renhet. Perfusing lungan innan samlingen kan bidra till att eliminera perifera celler samt minska föroreningar erytrocyter. Användningen av automatiserade dissociation kan advanteogus när ett stort antal lungorna hanteras, annars kan du välja den alternativa protokoll, med ...

<table width="200" border="1"><tr><td> Reagensets namn </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer (tillval) </td></tr><tr><td> ACK lyserings buffert </td><td> Invitrogen </td><td> D6-0005DG </td><td></td></tr><tr><td> Anti-mus CD11c (HL3) </td><td> BD Pharmingen </td><td> 5580979 </td><td> PE-Cy7 konjugerade </td></tr><tr><td> Anti-mus-IA / IE (269) </td><td> BD-Pharmingen </td><td> 553.623 </td><td> FITC-konjugerad </td></tr><tr><td> Collangenase typ 1A </td><td> Sigma </td><td> 9891-500mg </td><td></td></tr><tr><td> Cell silar </td><td> BD Falcon </td><td> 352.340, 352.360 </td><td></td></tr><tr><td> CD11c (N418) mikrokulor </td><td> Miltenyi </td><td> 130-052-001 </td><td></td></tr><tr><td> DNas jag </td><td> Sigma </td><td> D5025-150KU </td><td></td></tr><tr><td> Hanks balanserade saltlösning </td><td> Invitrogen </td><td> 14.170 </td><td></td></tr><tr><td> Hepes buffertlösning </td><td> Invitrogen </td><td> 15.630 </td><td></td></tr><tr><td> Petriskålar 60 mm </td><td> BD Falcon </td><td> 351.016 </td><td></td></tr><tr><td> GentleMACS ™ C rör </td><td> Miltenyi </td><td> 130-093-237 </td><td></td></tr><tr><td> Gentle MACS dissociator </td><td> Miltentyi </td><td> 130-093-235 </td><td></td></tr><tr><td> AutoMACS-Pro ™ </td><td> Miltenyi </td><td> 130-092-545 </td><td></td></tr><tr><td> FASCS Aria </td><td> BD </td><td></td><td></td></tr></table>

isolation of mouse lung dendritic cells

Lung dendritiska celler (DC) spelar en grundläggande roll i avkänning invaderande patogener 1,2 samt kontroll av tolerogenic svar 3 i luftvägarna. Minst tre huvudsakliga grupper av celler lunga dendritiska har beskrivits i möss: konventionella DC (CDC) 4, plasmacytoid DC (PDC) 5 och IFN-producerande killer DC (IKDC) 6,7. CDC delmängd är den mest framträdande DC delmängd i lungan 8. Den gemensamma markör kända för att identifiera DC delmängder är CD11c, en typ I transmembrant integrin (β2) som också uttrycks på monocyter, makrofager, neutrofiler och några B-celler 9. I vissa vävnader, med hjälp av CD11c som markör för att identifiera musen DC är giltiga, som i mjälte, där de flesta CD11c + celler representerar CDC delmängd som uttrycker höga nivåer av de stora histocompatibility komplex klass II (MHC-II). Men det är lungan en mer heterogen vävnad där varasidan DC delmängder finns det en hög andel av en distinkt cellpopulation som uttrycker höga nivåer av CD11c anfallen låga nivåer av MHC-II. Baserat på dess karakteristik och främst på dess uttryck F4/80, en mjälten makrofager markör har CD11c hi MHC-II-lo lung cellpopulation identifierats som lungmakrofager 10 och mer nyligen, som en potentiell DC föregångare 11. I motsats till musen PDC, har studiet av den särskilda roll som CDC i pulmonell immunförsvaret varit begränsad på grund av brist på en specifik markör som kan hjälpa vid isolering av dessa celler. Därför, i detta arbete, beskriver vi ett förfarande för att isolera renat musen lung CDC. Isolering av pulmonell DC delmängder utgör ett mycket användbart verktyg för att få insikt i funktionen hos dessa celler som svar på respiratoriska patogener samt miljöfaktorer som kan utlösa värd immunsvar i lungan.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells at JoVE.com

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Ett renat beredning av dendritiska mus lungceller beskrivs. Särskild vikt läggs vid isolering av konventionella dendritiska celler delmängd.

Isolering av Dendritiska Mouse lungceller

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

Isolering av Mouse bukhålan celler

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Isolering och karakterisering av dendritiska celler och makrofager från mus tarm

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

Isolering av myeloida dendritiska celler och epitelceller från Human Thymus

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

An Efficient and High Yield Method for Isolation of Mouse Dendritic Cell Subsets

En effektiv och High Yield Metod för isolering av mus dendritiska cellundergrupper

Dendritic cells (DCs) are professional antigen-presenting cells primarily responsible for acquiring, processing and presenting antigens on antigen ...

Characterization of Human Monocyte-derived Dendritic Cells by Imaging Flow Cytometry: A Comparison between Two Monocyte Isolation Protocols

Karakterisering av mänskliga monocythärledda dendritiska celler från Imaging Flow Cytometry: en jämförelse mellan två monocyt Isoleringsprotokoll

Dendritic cells (DCs) are antigen presenting cells of the immune system that play a crucial role in lymphocyte responses, host defense mechanisms, and ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fluorescensaktiverad cellsortering för Rening av Plasmacytoid dendritiska celler från benmärg från mus

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Legionella pneumophila Outer Membrane Vesicles: Isolation and Analysis of Their Pro-inflammatory Potential on Macrophages

Legionella pneumophila Outer Membrane Vesicles: Isolation and Analysis of Their Pro-inflammatory Potential on Macrophages

Legionella pneumophila yttre membranvesiklar: Isolering och analys av deras pro-inflammatoriska Potential på makrofager

Bacteria are able to secrete a variety of molecules via various secretory systems. Besides the secretion of molecules into the extracellular space or ...

Human Lung Dendritic Cells: Spatial Distribution and Phenotypic Identification in Endobronchial Biopsies Using Immunohistochemistry and Flow Cytometry

Human Lung dendritiska celler: Spatial distribution och fenotypisk identifiering i bronkerna Biopsier Använda Immunohistokemi och flödescytometri

The lungs are constantly exposed to the external environment, which in addition to harmless particles, also contains pathogens, allergens, and toxins. In ...

Precision-cut Mouse Lung Slices to Visualize Live Pulmonary Dendritic Cells

Precision-cut Mouse Lung skivor att visualisera Live Pulmonary dendritiska celler

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for ...

Isolation of Dendritic Cells from the Human Female Reproductive Tract for Phenotypical and Functional Studies

Isolering av dendritiska celler från mänskliga kvinnliga fortplantningsorganen för fenotypiska och funktionella studier

The characterization of the human dendritic cells (DCs) resident in mucosal tissues is challenging due to the difficulty in obtaining samples, and the low ...