Name: assessing somatic hypermutation in ramos b cells after overexpression or knockdown of specific genes
Uploaded: 2011-11-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Somatic Hypermutation in Ramos B Cells after Overexpression or Knockdown of Specific Genes at JoVE.com

وpMSCV - AID - I - Thy1.1 pKat2 وناقلات وهدية عينية من المديرية العامة للكاتس وpVSV - G ، pRSV رؤيا ، وpMDLg / pRRE ناقلات كانت هدية من نوع كولين BR.

1. إعداد العينات والخلايا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنفيذ إعداد المتوسطة الحجم من الحمض النووي (midiprep) من overexpression shRNA أو المحتوية. يبني وناقلات التعبئة pKat2 فيروسات أو ناقلات التعبئة lentiviral pVSV - G ، pMDLg / pRRE ، والقس pRSV - 25 6 استخدام الحمض النووي مي...

<ol>
	<li>Di Noia, J. M., Neuberger, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+antibody+somatic+hypermutation.">Molecular mechanisms of antibody somatic hypermutation.</a> Annu. Rev. Biochem. 76, 1-22 (2007).</li><li>Peled, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biochemistry+of+somatic+hypermutation.">The biochemistry of somatic hypermutation.</a> Annu. Rev. Immunol. 26, 481-511 (2008).</li><li>Longerich, S., Basu, U., Alt, F., Storb, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AID+in+somatic+hypermutation+and+class+switch+recombination.">AID in somatic hypermutation and class switch recombination.</a> Curr. Opin. Immunol. 18, 164-174 (2006).</li><li>Bardwell, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+somatic+hypermutation+and+reduced+class-switch+recombination+in+exonuclease+1-mutant+mice.">Altered somatic hypermutation and reduced class-switch recombination in exonuclease 1-mutant mice.</a> Nat. Immunol. 5, 224-229 (2004).</li><li>Martomo, S. A., Yang, W. W., Gearhart, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+Msh6+but+not+Msh3+in+somatic+hypermutation+and+class+switch+recombination.">A role for Msh6 but not Msh3 in somatic hypermutation and class switch recombination.</a> J. Exp. Med. 200, 61-68 (2004).</li><li>Phung, Q. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+hypermutation+at+G+and+C+nucleotides+in+immunoglobulin+variable+genes+from+mice+deficient+in+the+MSH2+mismatch+repair+protein.">Increased hypermutation at G and C nucleotides in immunoglobulin variable genes from mice deficient in the MSH2 mismatch repair protein.</a> J. Exp. Med. 187, 1745-1751 (1998).</li><li>Rada, C., Ehrenstein, M. R., Neuberger, M. S., Milstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hot+spot+focusing+of+somatic+hypermutation+in+MSH2-deficient+mice+suggests+two+stages+of+mutational+targeting.">Hot spot focusing of somatic hypermutation in MSH2-deficient mice suggests two stages of mutational targeting.</a> Immunity. 9, 135-141 (1998).</li><li>Rada, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoglobulin+isotype+switching+is+inhibited+and+somatic+hypermutation+perturbed+in+UNG-deficient+mice.">Immunoglobulin isotype switching is inhibited and somatic hypermutation perturbed in UNG-deficient mice.</a> Curr. Biol. 12, 1748-1755 (2002).</li><li>Delbos, F., Aoufouchi, S., Faili, A., Weill, J. C., Reynaud, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+polymerase+eta+is+the+sole+contributor+of+A/T+modifications+during+immunoglobulin+gene+hypermutation+in+the+mouse.">DNA polymerase eta is the sole contributor of A/T modifications during immunoglobulin gene hypermutation in the mouse.</a> J. Exp. Med. 204, 17-23 (2007).</li><li>Masuda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+polymerase+eta+is+a+limiting+factor+for+A:T+mutations+in+Ig+genes+and+contributes+to+antibody+affinity+maturation.">DNA polymerase eta is a limiting factor for A:T mutations in Ig genes and contributes to antibody affinity maturation.</a> Eur. J. Immunol. 38, 2796-2805 (2008).</li><li>Lim, D. S., Hasty, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mutation+in+mouse+rad51+results+in+an+early+embryonic+lethal+that+is+suppressed+by+a+mutation+in+p53.">A mutation in mouse rad51 results in an early embryonic lethal that is suppressed by a mutation in p53.</a> Mol. Cell. Biol. 16, 7133-7143 (1996).</li><li>Xiao, Y., Weaver, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+gene+targeted+deletion+by+Cre+recombinase+demonstrates+the+requirement+for+the+double-strand+break+repair+Mre11+protein+in+murine+embryonic+stem+cells.">Conditional gene targeted deletion by Cre recombinase demonstrates the requirement for the double-strand break repair Mre11 protein in murine embryonic stem cells.</a> Nucleic. Acids. Res. 25, 2985-2991 (1997).</li><li>Zhu, J., Petersen, S., Tessarollo, L., Nussenzweig, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+disruption+of+the+Nijmegen+breakage+syndrome+gene+NBS1+leads+to+early+embryonic+lethality+in+mice.">Targeted disruption of the Nijmegen breakage syndrome gene NBS1 leads to early embryonic lethality in mice.</a> Curr. Biol. 11, 105-109 (2001).</li><li>Luo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+mRad50+causes+embryonic+stem+cell+lethality,+abnormal+embryonic+development,+and+sensitivity+to+ionizing+radiation.">Disruption of mRad50 causes embryonic stem cell lethality, abnormal embryonic development, and sensitivity to ionizing radiation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 96, 7376-7381 (1999).</li><li>Pavri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation-induced+cytidine+deaminase+targets+DNA+at+sites+of+RNA+polymerase+II+stalling+by+interaction+with+Spt5.">Activation-induced cytidine deaminase targets DNA at sites of RNA polymerase II stalling by interaction with Spt5.</a> Cell. 143, 122-133 (2010).</li><li>Lee-Theilen, M., Matthews, A. J., Kelly, D., Zheng, S., Chaudhuri, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CtIP+promotes+microhomology-mediated+alternative+end+joining+during+class-switch+recombination.">CtIP promotes microhomology-mediated alternative end joining during class-switch recombination.</a> Nat. Struct. Mol. Biol. 18, 75-79 (2011).</li><li>Basu, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RNA+exosome+targets+the+AID+cytidine+deaminase+to+both+strands+of+transcribed+duplex+DNA+substrates.">The RNA exosome targets the AID cytidine deaminase to both strands of transcribed duplex DNA substrates.</a> Cell. 144, 353-363 (2011).</li><li>Yabuki, M., Fujii, M. M., Maizels, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+MRE11-RAD50-NBS1+complex+accelerates+somatic+hypermutation+and+gene+conversion+of+immunoglobulin+variable+regions.">The MRE11-RAD50-NBS1 complex accelerates somatic hypermutation and gene conversion of immunoglobulin variable regions.</a> Nat. Immunol. 6, 730-736 (2005).</li><li>Sale, J. E., Neuberger, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TdT-accessible+breaks+are+scattered+over+the+immunoglobulin+V+domain+in+a+constitutively+hypermutating+B+cell+line.">TdT-accessible breaks are scattered over the immunoglobulin V domain in a constitutively hypermutating B cell line.</a> Immunity. 9, 859-869 (1998).</li><li>Cumbers, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+and+iterative+affinity+maturation+of+antibodies+in+vitro+using+hypermutating+B-cell+lines.">Generation and iterative affinity maturation of antibodies in vitro using hypermutating B-cell lines.</a> Nat. Biotechnol. 20, 1129-1134 (2002).</li><li>Papavasiliou, F. N., Schatz, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-cycle-regulated+DNA+double-stranded+breaks+in+somatic+hypermutation+of+immunoglobulin+genes.">Cell-cycle-regulated DNA double-stranded breaks in somatic hypermutation of immunoglobulin genes.</a> Nature. 408, 216-221 (2000).</li><li>Parsa, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AID+mutates+a+non-immunoglobulin+transgene+independent+of+chromosomal+position.">AID mutates a non-immunoglobulin transgene independent of chromosomal position.</a> Mol. Immunol. 44, 567-575 (2007).</li><li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+instability+of+V+region+hypermutation+in+the+Ramos+Burkitt's+lymphoma+cell+line.">Clonal instability of V region hypermutation in the Ramos Burkitt's lymphoma cell line.</a> Int. Immunol. 13, 1175-1184 (2001).</li><li>Ukai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+a:T+mutations+is+dependent+on+cellular+environment+but+independent+of+mutation+frequency+and+target+gene+location.">Induction of a:T mutations is dependent on cellular environment but independent of mutation frequency and target gene location.</a> J. Immunol. 181, 7835-7842 (2008).</li><li>Dull, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+third-generation+lentivirus+vector+with+a+conditional+packaging+system.">A third-generation lentivirus vector with a conditional packaging system.</a> J. Virol. 72, 8463-8471 (1998).</li><li>Nakamura, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+frequency+class+switching+of+an+IgM++B+lymphoma+clone+CH12F3+to+IgA++cells.">High frequency class switching of an IgM+ B lymphoma clone CH12F3 to IgA+ cells.</a> Int. Immunol. 8, 193-201 (1996).</li><li>Muramatsu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+expression+of+activation-induced+cytidine+deaminase+(AID),+a+novel+member+of+the+RNA-editing+deaminase+family+in+germinal+center+B+cells.">Specific expression of activation-induced cytidine deaminase (AID), a novel member of the RNA-editing deaminase family in germinal center B cells.</a> J. Biol. Chem. 274, 18470-18476 (1999).</li></ol>

كما نوقش سابقا ، وأصبحت نماذج خط الخلية لتنويع الضد نقطة انطلاق لتحديد شعبية رواية البروتينات التي تؤثر على خطوات مختلفة خلال تنويع الأضداد. نقدم هنا طريقة لاستخدام عدوى فيروسية للبروتينات إما إلى أسفل ، أو تدق overexpress في خط B - الخلية راموس ومن ثم دراسة تأثير ذلك على SHM...

ويمكن استبدال معظم هذه مع المنتجات المماثلة من الشركات الأخرى -- الكواشف المقترحة. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم الكاشف </th><th > شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td > 6 - TC جيدا واضحة لمعاملة لوحات </td><td > كورنينج </td><td> 3516 </td><td ></td></tr><tr><td > 10 مل BD - Luer Loksyringes </td><td > دينار بحريني الطبية </td><td > 309604 </td><td ></td></tr><tr><td> 24 - TC جيدا واضحة لمعاملة لوحات </td><td > كورنينج </td><td > 3526 </td><td></td></tr><tr><td > 96 - جيدا واضحة البوليسترين مسطحة القاع TC المعاملة microplates </td><td > كورنينج </td><td > 3596 </td><td ></td></tr><tr><td > 100 ملم الأطباق الثقافة TC المعالجة </td><td > كورنينج </td><td > 430167 </td><td ></td></tr><tr><td > مرشحات حقنة Acrodisc ، 0.45 ميكرون </td><td > بظلالها العلوم الحياتية </td><td > 4604 </td><td ></td></tr><tr><td > آغار </td><td > Teknova </td><td > A7777 </tد&gt; <td ></td></tr><tr><td > Agarose </td><td > GeneMate </td><td> E - 3120 - 500 </td><td ></td></tr><tr><td > أمبيسيلين </td><td> سيغما </td><td > A0166 </td><td> 100 ملغ / مل في الماء </td></tr><tr><td > دينار بحريني تدفق الثاني FACSCanto عداد الكريات </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td ></td><td > أو ما شابه ذلك </td></tr><tr><td> دينار بحريني أسفل أنابيب الجولة فالكون البوليسترين </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td > 352054 </td><td > لFACS </td></tr><tr><td > 23 BOSC الخلايا </td><td > ATCC </td><td > CRL - 11270 </td><td ></td></tr><tr><td > CO 2 حاضنة قادرة على 37 درجة مئوية </td><td ></td><td ></td><td ></td></tr><tr><td > DMEM (وسط Dulbecco لتعديل النسر) </td><td > سيغما </td><td> D6429 </td><td ></td></tr><tr><td > FBS (مصل بقري جنيني) </td><td > الجوزاء المنتجات الحيوية </td><td > 100-106 </td><td ></td></tr><tr><td > FITC α - الفئران CD90/mouse CD90.1 الأضداد </td><td > BioLegend </td><td > 202503 </td><td > FITCα - Thy1.1 </td></tr><tr><td > FuGENE الكاشف ترنسفكأيشن 6 </td><td > روش </td><td > 11814443001 </td><td></td></tr><tr><td > HEPES العازلة الحل </td><td > Invitrogen </td><td > 15630-080 </td><td ></td></tr><tr><td > فاي كابا بوليميريز الحامض النووي </td><td > كابا النظم البيولوجية </td><td > KK2101 </td><td ></td></tr><tr><td > LB الحساء (المرق lysogeny -- لوريا) مسحوق </td><td > Difco </td><td > 240230 </td><td ></td></tr><tr><td > بعثة TRC shRNA الأسهم الجلسرين البكتيرية </td><td > سيغما </td><td ></td><td> ناقلات shRNA </td></tr><tr><td > NCS (العجل الوليد المصل) </td><td > الجوزاء المنتجات الحيوية </td><td > 100-504 </td><td ></td></tr><tr><td> PBS (الفوسفات حل مخزنة) </td><td > Invitrogen </td><td> 70011 </td><td > المخفف في الماء ل1X </td></tr><tr><td > PE الضد α الغلوبولين المناعي البشري </td><td > BioLegend </td><td > 314508 </td><td ></td></tr><tr><td > PGS (البنسلين ، الستربتومايسين ، الجلوتامين الحل) </td><td > الجوزاء بيو - PRODUCTS </td><td > 400-110 </td><td ></td></tr><tr><td> Polybrene (hexadimethrine الميثيل) </td><td > سيغما </td><td > 107689 </td><td > 10 ملغ / مل في الماء </td></tr><tr><td > PureYield نظام Midiprep البلازميد </td><td > Promega </td><td > A2495 </td><td></td></tr><tr><td> بوروميسين </td><td> سيغما </td><td > P8833 </td><td > 250 ميكروغرام / مل في الماء </td></tr><tr><td > QIAquick هلام استخراج طقم </td><td > QIAGEN </td><td > 28706 </td><td ></td></tr><tr><td> راموس (RA 1) الخلايا </td><td > ATCC </td><td > CRL - 1596 </td><td ></td></tr><tr><td > RPMI المتوسطة - 1640 </td><td > سيغما </td><td > R8758 </td><td ></td></tr><tr><td > مرتفع الثاني </td><td > Invitrogen </td><td > 18064-022 </td><td></td></tr><tr><td > SYBR FAST qPCR طقم </td><td > كابا النظم البيولوجية </td><td > KK4601 </td><td ></td></tr><tr><td > طق بوليميراز الدنا </td><td > Invitrogen </td><td > 18038-042 </td><td ></td></tr><tr><td > TOPO TA استنساخ عدة </td><td > Invitroالجنرال </td><td > K4520 - 01 </td><td ></td></tr><tr><td > TRIzol </td><td > Invitrogen </td><td > 15596-026 </td><td ></td></tr><tr><td > المعالج الحمض النووي الجينوم SV تنقية النظام </td><td > Promega </td><td > A2361 </td><td ></td></tr><tr><td > X - غال [5 - 4 - برومو كلورو - 3 - β - indoyl - D - galatopyranoside] </td><td > Growcells </td><td > C - 5687 </td><td > 40 ملغ / مل في DMSO </td></tr></tbody></table>

assessing somatic hypermutation in ramos b cells after overexpression or knockdown of specific genes

خلايا B تبدأ حياتها مع الأجسام المضادة الناتجة عن انخفاض تقارب تأشب الخامس J (D). ومع ذلك ، بناء على الكشف عن العوامل المسببة للأمراض ، وتحور المتغير (V) المنطقة من الجين (IG) الغلوبولين المناعي ما يقرب من 100،000 مرات أكثر من بقية الجينوم خلال hypermutation جسدية (SHM) ، مما أدى إلى ارتفاع تقارب 1،2 الأضداد. بالإضافة إلى ذلك ، فئة التوحد التبديل (CSR) وتنتج الأجسام المضادة مع وظائف المستجيب مختلفة تبعا لنوع من رد الفعل المناعي ان هناك حاجة لعامل ممرض معين. وبدأ كل من المسؤولية الاجتماعية للشركات والتي SHM نازعة أمين سيتيدين التنشيط التي يسببها (AID) ، والتي deaminates مخلفات السيتوزين في الحمض النووي لانتاج uracils. تتم معالجة هذه uracils بأشكال عرضة للخطأ من مسارات الإصلاح ، مما يؤدي في النهاية إلى حدوث طفرات وإعادة التركيب 1-3. فهمنا الحالي للتفاصيل الجزيئي للSHM والمسؤولية الاجتماعية للشركات تأتي من مجموعة من الدراسات التي أجريت في الفئران وخلايا الأولية ، وخطوط الخلية ، والخلية F -ري التجارب. نماذج الماوس تبقى المعيار الذهبي مع بالضربة القاضية الجينية تظهر أدوارا حاسمة لعوامل كثيرة إصلاح (على سبيل المثال اونغ ، MSH2 ، Msh6 ، Exo1 وبوليميريز η) 40-10. ومع ذلك ، ليس كل الجينات قابلة للدراسات خروج المغلوب. على سبيل المثال ، بالضربة القاضية من عدة مزدوج الجديلة البروتينات إصلاح كسر مميتة بشكل أولي أو يضعف B - الخلية التنمية 11-14. وعلاوة على ذلك ، قد تكون في بعض الأحيان ملثمين وظيفة معينة من البروتين في SHM أو المسؤولية الاجتماعية للشركات عن عيوب أكثر عالمية بسبب خروج المغلوب. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن منذ التجارب على الفئران أن تكون طويلة ، وتغيير تعبير الجينات الفردية في خطوط الخلايا قد تصبح خطوة شعبية متزايدة الأولى لتحديد وتوصيف الجينات مرشح 15-18. وقد تم شعبية الخلية سطر نموذج لدراسة SHM 18-24 -- راموس -- خلية سرطان الغدد الليمفاوية بيركيت الخط الذي يمر constitutively SHM. ميزة واحدة من الخلايا راموس هو أن لديهم المدمج في شبه مريحةقياس كمي للSHM. خلايا التعبير عن نوع IgM و البرية ، لأنها تلتقط الطفرات ، وبعض من الطفرات ضرب التعبير الغلوبولين المناعي. لذلك ، يعاير خسارة الغلوبولين المناعي عن طريق المسح الضوئي مضان تنشيط الخلايا (FACS) يوفر قراءة سريعة التدريجي لمستوى SHM. ويمكن الحصول على مزيد من القياس الكمي للSHM بواسطة تسلسل الجينات مباشرة الأضداد. منذ الخلايا راموس يصعب transfect ، ونحن ننتج المشتقات المستقرة التي زادت أو خفضت التعبير عن الجينات الفردية التي تصيب الخلايا مع فيروسات أو يبني lentiviral التي تحتوي إما على كاسيت أو overexpression قصيرة الحمض النووي الريبي القاسي (shRNA) ، على التوالي. هنا ، نحن تصف كيف تصيب الخلايا راموس ومن ثم استخدام هذه الخلايا لبحث دور للجينات محددة بشأن SHM (الشكل 1).

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Somatic Hypermutation in Ramos B Cells after Overexpression or Knockdown of Specific Genes at JoVE.com

Assessing Somatic Hypermutation in Ramos B Cells after Overexpression or Knockdown of Specific Genes

نحن تصف كيفية تنفيذ فيروسات أو التهابات lentiviral من overexpression shRNA أو المحتوية. يبني الإنسان راموس في الخلية B الخط وكيفية قياس جسدية hypermutation في هذه الخلايا

تقييم Hypermutation الجسدية في خلايا B راموس بعد Overexpression أو ضربة قاضية لجينات معينة

B cells start their life with low affinity antibodies generated by V(D)J recombination.  However, upon detecting a pathogen, the variable (V) region of an ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Murine Model of CD40-activation of B cells

الفئران نموذج تفعيل CD40 - B من الخلايا

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Induction and Assessment of Class Switch Recombination in Purified Murine B Cells

الاستقراء والتقييم من فئة التوحد التبديل في تنقية خلايا الفئران B

Humoral immunity is the branch of the immune system maintained by B cells and mediated through the secretion of antibodies. Upon B cell activation, the ...

Generation of Multivirus-specific T Cells to Prevent/treat Viral Infections after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplant

توليد خلايا T - Multivirus محددة لمنع / علاج الالتهابات الفيروسية خيفي بعد زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم

Viral infections cause morbidity and mortality in allogeneic hematopoietic stem cell transplant (HSCT) recipients. We and others have successfully ...

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

بعد الخلوي في مصير<em&gt; E. القولونية</em&gt; بعد الإصابة التي كتبها لامدا بالعاثية

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

Detection of True IgE-expressing Mouse B Lineage Cells

كشف صحيح فريق الخبراء الحكومي الدولي، معربا عن ماوس B خلايا سلالته

B lymphocyte immunoglobulin heavy chain (IgH) class switch recombination (CSR) is a process wherein initially expressed IgM switches to other IgH ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

كشف وإثراء نادر محددة مستضد الخلايا B لتحليل النمط الظاهري وظيفة

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

أوفيركسريسيون وتنقية الإنسان<em&gt; رابطة الدول المستقلة</em&gt; -prenyltransferase في<em&gt; الإشريكية القولونية</em

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

جيل من التمييزية مونوكلونل البشرية من خلايا نادرة محددة مستضد ب المتداولة في الدم

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Assessing Cellular Stress and Inflammation in Discrete Oxytocin-secreting Brain Nuclei in the Neonatal Rat Before and After First Colostrum Feeding

تقييم الإجهاد الخلوية والتهاب في نويات الدماغ إفراز الاوكسيتوسين المنفصلة في الفئران حديثي الولادة قبل وبعد التغذية اللبأ الأولى

The goal of this protocol is to isolate oxytocin-receptor rich brain nuclei in the neonatal brain before and after first colostrum feeding. The expression ...

Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro

تحليل القص الناجمة عن تدفق الهجرة من المنطقة الهامشية الفاري ب الخلايا في المختبر

Marginal zone B cells (MZBs) are a population of B cells that reside in the mouse splenic marginal zones that envelop follicles. To reach the follicles, ...