Name: stem cell transplantation in an in vitro simulated ischemia/reperfusion model
Uploaded: 2011-11-05T14:00:00
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Diese Arbeit wurde von OTKA (Hungarian Scientific Research Fund) D45933, T049621, TET (Hungarian Science and Technology Foundation) A4/04, Arg-17/2006 und SIN, Bolyai, Öveges Stipendien und TÁMOP unterstützt 4.2.2-08 / 1 / KMR-2008-0004 und 4.2.1 / B 09/1/KMR-2010-0001. OTKA 83803. Wir möchten William Gesztes für die Bereitstellung der Voice-over danken.

1. Vorbereitung H9c2 cardiomyoblast Zellen H9c2 Ratte cardiomyoblasts wurden von ATCC (Wesel, Deutschland) erhalten und ausgebaut in hoher Glukose (4,5 g / L) DMEM mit 10% fötalem Rinderserum, 4 mM L-Glutamin, 100 U / ml Penicillin und 100 ug / ml Streptomycin. Die H9c2 Myoblasten-Zelllinie aus embryonalen Ratte Herzen abgeleitet wird, wird es als ein in vitro Modell für Skelett-und Herzmuskeln 8,9 verwendet. Bereiten Sie 12 gut Platte H9c2 Zellen: </p...

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	<li>Dimmeler, S., Burchfield, J., Zeiher, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-Based+Therapy+of+Myocardial+Infarction.">Cell-Based Therapy of Myocardial Infarction.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, (2008).</li><li>Kim, S. U., de Vellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-based+cell+therapy+in+neurological+diseases:+A+review.">Stem cell-based cell therapy in neurological diseases: A review.</a> Journal of Neuroscience Research. 87, 2183-21 (2009).</li><li>Lee, K., Chan, C. K., Patil, N., Goodman, S. 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Der Beweis-Protokoll ist ein in vitro Ansatz für die viel mehr komplexe Thema der Stammzellentherapie bei Herzinfarkt, mit allen Vor-und Nachteile eines solchen Modells. Natürlich kann es nicht spiegeln die komplexe (zB immunologische) stattfindenden Veranstaltungen während und nach Myokard-Infarkt, kann aber auf die direkten Auswirkungen der zusätzlichen Zellen auf der postischämischen Zellen konzentrieren. Die Auswirkungen der simulierten Ischämie auf H9c2 cardiomyoblasts in hohem Maße abhängig von der Zeit de...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> Calcein-AM </td><td> Molecular Probes </td><td> L3224, C3099 </td><td> <a href="http://www.invitrogen.com">http://www.invitrogen.com</a> </td></tr><tr><td> Ethidium Homodimer-2 </td><td> Molecular Probes </td><td> L3224, E3599 </td><td> <a href="http://www.invitrogen.com">http://www.invitrogen.com</a> </td></tr><tr><td> Vybrant DiD </td><td> Molecular Probes </td><td> V22887 </td><td> <a href="http://www.invitrogen.com">http://www.invitrogen.com</a> </td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Reagenzien. <table border="1"><tbody><tr><td> Bezeichnung des Geräts </td><td> Firma </td><td> Kommentare (optional) </td></tr><tr><td> Pecon Zellinkubation System für Zeiss-Mikroskope </td><td> Pecon GmbH </td><td> <a href="http://www.pecon.biz/">www.pecon.biz/</a> </td></tr></tbody></table> Tabelle 2. Equipment.

stem cell transplantation in an in vitro simulated ischemia/reperfusion model

Stammzelltransplantation Protokolle finden ihren Weg in die klinische Praxis 1,2,3. Getting bessere Ergebnisse, so dass die Protokolle mehr robust, und die Suche nach neuen Quellen für implantierbare Zellen stehen im Mittelpunkt der jüngsten Forschung 4,5. Untersuchung der Wirksamkeit von Zelltherapien ist keine leichte Aufgabe, und neue Werkzeuge sind nötig, um die Mechanismen in der Behandlung Verfahren 6 zu erforschen. Wir haben ein experimentelles Protokoll der Ischämie / Reperfusion, um die Beobachtung von zellulären Verbindungen und sogar subzelluläre Mechanismen während der Ischämie / Reperfusion und nach Stammzelltransplantation zu ermöglichen und die Wirksamkeit der Zelltherapie zu bewerten. H9c2 cardiomyoblast Zellen wurden auf Zellkulturplatten 7,8 platziert. Ischämie simuliert wurde mit 150 Minuten in einer Glucose-freiem Medium mit Sauerstoff unter 0,5%. Dann wurden normale Medien-und Sauerstoff wieder zu Reperfusion zu simulieren. Nach Sauerstoff Glukose Deprivation,die geschädigten Zellen wurden mit der Transplantation von markiertem menschlichem Knochenmark abgeleiteten mesenchymalen Stammzellen, indem sie in die Kultur behandelt. Mesenchymale Stammzellen sind in klinischen Studien bevorzugt, weil sie leicht zu erreichen mit minimal-invasiven Chirurgie, leicht erweiterbar und autologe sind. Nach 24-stündiger Kokultivierung wurden die Zellen mit Calcein und Ethidium-Homodimer gefärbt, um zwischen lebenden und toten Zellen zu unterscheiden. Dieses Setup erlaubt uns, die interzellulären Verbindungen mit Hilfe der konfokalen Fluoreszenzmikroskopie zu untersuchen und die Überlebensrate von postischämischen Zellen mittels Durchflusszytometrie zu quantifizieren. Die konfokale Mikroskopie zeigte die Wechselwirkungen der beiden Zellpopulationen wie Zellfusion und die Bildung von interzellulären Nanoröhren. Durchflusszytometrie-Analyse ergab 3 Cluster von beschädigten Zellen, die in einem Diagramm dargestellt und können statistisch ausgewertet werden. Diese Populationen können separat untersucht werden und Rückschlüsse auf diese Daten über die Wirksamkeit der simulierten gezogen werdenTherapieansatz.

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Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Wir zeigen, wie die Einrichtung eines<em&gt; In-vitro-</em&gt; Ischämie / Reperfusion-Modell und wie man den Effekt der Stammzelltherapie am postischämischen Herzzellen zu bewerten.

Stem Cell Transplantation in einem In-vitro- Simulierte Ischämie / Reperfusion-Modell

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

Einem Mausmodell der In Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Forschung

Medizin

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Mittels quantitativer real-time PCR zum Donor Cell Engraftment in einem Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Modell fest

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischämie-Reperfusion-Modell des akuten Nierenschädigung und nach der Verletzung Fibrose bei Mäusen

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Gequetscht Modell von Rückenmarksverletzungen

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction

Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction

Sauerstoff-Glukose Deprivation und Reoxygenierung als<em&gt; In-vitro-</em&gt; Ischämie-Reperfusion Injury Modell zum Studium der Blut-Hirnschranke Dysfunction

Ischemia-Reperfusion (IR) injury is known to contribute significantly to the morbidity and mortality associated with ischemic strokes. Ischemic ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Studieren Bauchspeicheldrüsenkrebs Stammzelleigenschaften für die Entwicklung neuer Behandlungsstrategien

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Murine Modell der intestinalen Ischämie-Reperfusionsschaden

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Schaffung und Transplantation von einem Fettgewebe-derived Stem Cell (ASC) Blatt in einem diabetischen Wundheilung Modell

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

Zwei-Schiff Okklusion Mausmodell der zerebralen Ischämie-reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Ein präklinisches Rattenmodell zur Untersuchung von Ischämie-Reperfusionsverletzungen in der rekonstruktiven Mikrochirurgie

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...