Name: stem cell transplantation in an in vitro simulated ischemia/reperfusion model
Uploaded: 2011-11-05T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי OTKA (קרן הונגרית למחקר מדעי) D45933, T049621, ט (הונגריה מדע וטכנולוגיה קרן) A4/04, Arg-17/2006 ו SIN, Bolyai, מלגות Öveges ו TÁMOP 4.2.2-08 / 1 / KMR-2008-0004 ו - 4.2.1 / B 09/1/KMR-2010-0001. OTKA 83803. ברצוננו להודות Gesztes ויליאם למתן את הקריינות.

1. הכנת H9c2 תאים cardiomyoblast H9c2 cardiomyoblasts עכברוש התקבלו ATCC (Wesel, גרמניה) התרחבה גלוקוז גבוהה (4.5 גר &#39;/ ל&#39;) DMEM המכיל 10% בסרום שור עוברית, 4 מ&quot;מ L-גלוטמין, 100 U / ml פניצילין 100 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​סטרפטומיצין. H9c2 התא קו myoblast נגזר לב עוברי חולדה, ה...

<ol>
	<li>Dimmeler, S., Burchfield, J., Zeiher, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-Based+Therapy+of+Myocardial+Infarction.">Cell-Based Therapy of Myocardial Infarction.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, (2008).</li><li>Kim, S. U., de Vellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-based+cell+therapy+in+neurological+diseases:+A+review.">Stem cell-based cell therapy in neurological diseases: A review.</a> Journal of Neuroscience Research. 87, 2183-21 (2009).</li><li>Lee, K., Chan, C. K., Patil, N., Goodman, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+therapy+for+bone+regeneration-Bench+to+bedside.">Cell therapy for bone regeneration-Bench to bedside.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part B: Applied Biomaterials. 89, 252-25 (2009).</li><li>Gaipa, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GMP-based+CD133++cells+isolation+maintains+progenitor+angiogenic+properties+and+enhances+standardization+in+cardiovascular+cell+therapy.">GMP-based CD133+ cells isolation maintains progenitor angiogenic properties and enhances standardization in cardiovascular cell therapy.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 14, 1619-1619 (2010).</li><li>Trounson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+perspectives+in+human+stem+cell+therapeutic+research.">New perspectives in human stem cell therapeutic research.</a> BMC medicine. 7, 29-29 (2009).</li><li>Mazhari, R., Hare, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+action+of+mesenchymal+stem+cells+in+cardiac+repair:+potential+influences+on+the+cardiac+stem+cell+niche.">Mechanisms of action of mesenchymal stem cells in cardiac repair: potential influences on the cardiac stem cell niche.</a> Nat Clin Pract Cardiovasc Med. 4, S21-S21 (2007).</li><li>Kimes, B. W., Brandt, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+a+clonal+muscle+cell+line+from+rat+heart.">Properties of a clonal muscle cell line from rat heart.</a> Experimental Cell Research. 98, 367-367 (1976).</li><li>Sardao, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+imaging+of+H9c2+myoblasts+exposed+to+tert-butylhydroperoxide--characterization+of+morphological+features+of+cell+death.">Vital imaging of H9c2 myoblasts exposed to tert-butylhydroperoxide--characterization of morphological features of cell death.</a> BMC Cell Biol. 8, 11-11 (2007).</li><li>Hescheler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological,+biochemical,+and+electrophysiological+characterization+of+a+clonal+cell+(H9c2)+line+from+rat+heart.">Morphological, biochemical, and electrophysiological characterization of a clonal cell (H9c2) line from rat heart.</a> Circulation research. 69, 1476-1476 (1991).</li><li>Cselenyak, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+rescue+cardiomyoblasts+from+cell+death+in+an+in+vitro+ischemia+model+via+direct+cell-to-cell+connections.">Mesenchymal stem cells rescue cardiomyoblasts from cell death in an in vitro ischemia model via direct cell-to-cell connections.</a> BMC Cell Biol. 11, 29-29 (2010).</li><li>Sauvant, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implementation+of+an+in+vitro+model+system+for+investigation+of+reperfusion+damage+after+renal+ischemia.">Implementation of an in vitro model system for investigation of reperfusion damage after renal ischemia.</a> Cell Physiol Biochem. 24, 567-567 (2009).</li><li>Namas, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-Induced+Overexpression+of+BNIP3+is+Not+Dependent+on+Hypoxia-Inducible+Factor+1alpha+in+Mouse+Hepatocytes.">Hypoxia-Induced Overexpression of BNIP3 is Not Dependent on Hypoxia-Inducible Factor 1alpha in Mouse Hepatocytes.</a> Shock. 36, 196-196 (2011).</li><li>Cao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia/Reoxygenation+Up-Regulated+the+Expression+of+Death+Receptor+5+and+Enhanced+Apoptosis+in+Human+Hepatocyte+Line.">Hypoxia/Reoxygenation Up-Regulated the Expression of Death Receptor 5 and Enhanced Apoptosis in Human Hepatocyte Line.</a> Transplantation Proceedings. 38, 2207-2207 (2006).</li><li>Meloni, B. P., Meade, A. J., Kitikomolsuk, D., Knuckey, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+neuronal+cell+death+in+acute+and+delayed+in+vitro+ischemia+(oxygen-glucose+deprivation)+models.">Characterisation of neuronal cell death in acute and delayed in vitro ischemia (oxygen-glucose deprivation) models.</a> Journal of Neuroscience Methods. 195, 67-67 (2011).</li><li>Mimeault, M., Hauke, R., Batra, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells:+a+revolution+in+therapeutics--recent+advances+in+stem+cell+biology+and+their+therapeutic+applications+in+regenerative+medicine+and+cancer+therapies.">Stem cells: a revolution in therapeutics--recent advances in stem cell biology and their therapeutic applications in regenerative medicine and cancer therapies.</a> Clinical Pharmacology &#38; Therapeutics. 82, 252-252 (2007).</li><li>Angoulvant, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cell+conditioned+media+attenuates+in+vitro+and+ex+vivo+myocardial+reperfusion+injury.">Mesenchymal stem cell conditioned media attenuates in vitro and ex vivo myocardial reperfusion injury.</a> J Heart Lung Transplant. 30, 95-95 (2010).</li><li>Lim, Y. J., Zheng, S., Zuo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+Preconditions+Purkinje+Cells+against+Cell+Death+under+In+Vitro+Simulated+Ischemia/Reperfusion+Conditions.">Morphine Preconditions Purkinje Cells against Cell Death under In Vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Conditions.</a> Anesthesiology. 100, 562-562 (2004).</li><li>Guo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen-receptor-mediated+protection+of+cerebral+endothelial+cell+viability+and+mitochondrial+function+after+ischemic+insult+in+vitro.">Estrogen-receptor-mediated protection of cerebral endothelial cell viability and mitochondrial function after ischemic insult in vitro.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 30, 545-545 (2010).</li></ol>

פרוטוקול הפגינו הוא בגישה חוץ גופית לנושא הרבה יותר מורכב של טיפול בתאי גזע של אוטם שריר הלב, עם כל היתרונות והחסרונות של מודל כזה. ברור שזה לא יכול לשקף את מורכבות (למשל, מערכת החיסון) האירועים המתרחשים במהלך ואחרי האוטם בשריר הלב, אך ניתן למקד את ההשפעות הישירות של תא...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> calcein-AM </td><td> מולקולרית בדיקות </td><td> L3224, C3099 </td><td> <a href="http://www.invitrogen.com">http://www.invitrogen.com</a> </td></tr><tr><td> ethidium homodimer-2 </td><td> מולקולרית בדיקות </td><td> L3224, E3599 </td><td> <a href="http://www.invitrogen.com">http://www.invitrogen.com</a> </td></tr><tr><td> האם Vybrant </td><td> מולקולרית בדיקות </td><td> V22887 </td><td> <a href="http://www.invitrogen.com">http://www.invitrogen.com</a> </td></tr></tbody></table> טבלה 1. ריאגנטים. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם הציוד </td><td> חברה </td><td> הערות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> הדגירה Pecon תא מערכת מיקרוסקופים Zeiss </td><td> Pecon GmbH </td><td> <a href="http://www.pecon.biz/">www.pecon.biz/</a> </td></tr></tbody></table> 2. טבלה ציוד.

stem cell transplantation in an in vitro simulated ischemia/reperfusion model

השתלת תא גזע פרוטוקולים מוצאים את דרכם לתוך הפרקטיקה הקלינית 1,2,3. קבלת תוצאות טובות יותר, מה שהופך את הפרוטוקולים חזקים יותר, ולמצוא מקורות חדשים עבור תאים להשתלה הם מוקד של מחקר שנעשה לאחרונה 4,5. בחינת היעילות של טיפולים בתא אינה משימה קלה, כלים חדשים נדרשים כדי לחקור את המנגנונים המעורבים בתהליך הטיפול 6. תכננו פרוטוקול הניסוי של איסכמיה / reperfusion כדי לאפשר תצפית של חיבורי הסלולר מנגנוני subcellular גם במהלך הפציעה איסכמיה / reperfusion ואחרי השתלת תא גזע כדי להעריך את היעילות של טיפול בתא. H9c2 תאים cardiomyoblast הונחו על תרבות צלחות התא 7,8. איסכמיה היה מדומה עם 150 דקות בתווך גלוקוז חופשי עם רמת חמצן מתחת 0.5%. ואז, מדיה נורמלי רמות החמצן היו מחדש כדי לדמות reperfusion. לאחר שלילת חמצן גלוקוז,התאים שנפגעו טופלו השתלה של מח עצמות אדם נגזר תווית בתאי גזע mesenchymal ידי הוספתם התרבות. בתאי גזע mesenchymal עדיפים בניסויים קליניים משום שהם נגישים בקלות עם ניתוח פולשני מינימלי, ניתן להרחבה בקלות עצמיים. לאחר 24 שעות של עיבוד משותף, התאים היו מוכתמות calcein ו-ethidium homodimer להבדיל בין תאים חיים ומתים. התקנה זו מאפשרת לנו לחקור את הקשרים אינטר באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי confocal ו לכמת את שיעור ההישרדות של תאים postischemic ידי cytometry הזרימה. מיקרוסקופיה Confocal הראה את יחסי הגומלין של שתי אוכלוסיות תאים כגון איחוי תאים היווצרות של צינורות אינטר. Cytometry ניתוח תזרים חשף 3 אשכולות של תאים פגומים אשר ניתן להתוות על הגרף ונותחו סטטיסטית. אוכלוסיות אלה יכולים להיחקר בנפרד ניתן להסיק על נתונים אלה על האפקטיביות של סימולציהtherapeutical גישה.

Watch this Scientific Journal Video about Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model at JoVE.com

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

אנו מדגימים כיצד להקים<em&gt; במבחנה</em&gt; איסכמיה / reperfusion מודל כיצד להעריך את ההשפעה של טיפול בתאי גזע לתאי לב על postischemic.

גזע השתלת תאים ב במבחנה דגם סימולציה איסכמיה / reperfusion

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

במודל עכבר של בתוך הרחם השתלה

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

באמצעות PCR כמוני בזמן אמת לקביעת engraftment תא התורם במודל תחרותי Murine מח עצם השתלה

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

דגם איסכמיה reperfusion של פגיעה חריפה בכליות ופגיעים ההודעה פיברוזיס בעכברים

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

השתלת תאי גזע עצבית בדגם ניסיוני של Contusive פגיעה בחוט השדרה

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction

Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction

חמצן גלוקוז קיפוח וReoxygenation כ<em&gt; במבחנה</em&gt; איסכמיה reperfusion פציעת דגם לחוסר תפקוד מחסום דם-המוח לומד

Ischemia-Reperfusion (IR) injury is known to contribute significantly to the morbidity and mortality associated with ischemic strokes. Ischemic ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

לומד סרטן לבלב גזע מאפייני תא לפיתוח טיפול חדש אסטרטגיות

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

יצירת והשתלות של גיליון נגזר שומן בתאי גזע (ASC) במודל של ריפוי פצע סוכרתי

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

שתיים, כלי סגר דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

מודל מפרה קליני לחקר איסכמיה-reperfusion פציעה במיקרו-כירורגיה משחזרת

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...