Name: a cre-lox p recombination approach for the detection of cell fusion in vivo
Uploaded: 2012-01-04T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Cre-Lox P Recombination Approach for the Detection of Cell Fusion In Vivo at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أشكر الدكتور بيمان Hemmati (قسم الطب في جامعة ويسكونسن ماديسون) لتوفير بسخاء H1 اللجان الدائمة ، والدكتور تيم هاكر ، والدكتور سونغ Gouqing والسيدة جيل كوخ من جامعة ويسكونسن فسيولوجيا القلب والأوعية الدموية مرفق الأساسية لأداء جراحات الماوس. وأيد هذا العمل من قبل مؤسسة العلوم الوطنية من خلال زمالة بحوث الدراسات العليا لفريمان بريان والمعاهد الوطنية للصحة HL089679 R21.

1. خلية المانحة ترنسفكأيشن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حصاد الخلايا الجذعية الوسيطة (MSCS ، والمستمدة من الخلايا الجذعية الجنينية H1 التكرم تبرعت من قبل الدكتور بيمان Hematti ؛ بدلا من ذلك ، يمكن استخدام أي نوع من الخلايا من أي نوع الافتراض على الم?...

<ol>
	<li>Bernirschke, K. K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pathology of the Human Placenta. , (2000).</li><li>Hoshina, M., Boothby, M., Boime, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytological+localization+of+chorionic+gonadotropin+alpha+and+placental+lactogen+mRNAs+during+development+of+the+human+placenta.">Cytological localization of chorionic gonadotropin alpha and placental lactogen mRNAs during development of the human placenta.</a> J. Cell. Biol. 93, 190-198 (1982).</li><li>Johansen, M., Redman, C. W., Wilkins, T., Sargent, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trophoblast+deportation+in+human+pregnancy--its+relevance+for+pre-eclampsia.">Trophoblast deportation in human pregnancy--its relevance for pre-eclampsia.</a> Placenta. 20, 531-539 (1999).</li><li>Redman, C. W., Sargent, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+debris,+oxidative+stress+and+pre-eclampsia.">Placental debris, oxidative stress and pre-eclampsia.</a> Placenta. 21, 597-602 (2000).</li><li>Ogle, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+fusion+of+cells+between+species+yields+transdifferentiation+and+retroviral+transfer+in+vivo.">Spontaneous fusion of cells between species yields transdifferentiation and retroviral transfer in vivo.</a> FASEB. J. 18, 548-550 (2004).</li><li>Nygren, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow-derived+hematopoietic+cells+generate+cardiomyocytes+at+a+low+frequency+through+cell+fusion,+but+not+transdifferentiation.">Bone marrow-derived hematopoietic cells generate cardiomyocytes at a low frequency through cell fusion, but not transdifferentiation.</a> Nat. Med. 10, 494-501 (2004).</li><li>Nygren, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid+and+lymphoid+contribution+to+non-haematopoietic+lineages+through+irradiation-induced+heterotypic+cell+fusion.">Myeloid and lymphoid contribution to non-haematopoietic lineages through irradiation-induced heterotypic cell fusion.</a> Nat. Cell. Biol. 10, 584-592 (2008).</li><li>Kutschka, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenoviral+human+BCL-2+transgene+expression+attenuates+early+donor+cell+death+after+cardiomyoblast+transplantation+into+ischemic+rat+hearts.">Adenoviral human BCL-2 transgene expression attenuates early donor cell death after cardiomyoblast transplantation into ischemic rat hearts.</a> Circulation. 114, I174-I180 (2006).</li><li>Min, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+bioluminescence+imaging+of+cord+blood+derived+mesenchymal+stem+cell+transplantation+into+rat+myocardium.">In vivo bioluminescence imaging of cord blood derived mesenchymal stem cell transplantation into rat myocardium.</a> Ann. Nucl. Med. 20, 165-170 (2006).</li><li>Malstrom, S. E., Tornavaca, O., Meseguer, A., Purchio, A. F., West, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+characterization+and+hormonal+regulation+of+kidney+androgen-regulated+protein+(Kap)-luciferase+transgenic+mice.">The characterization and hormonal regulation of kidney androgen-regulated protein (Kap)-luciferase transgenic mice.</a> Toxicol. Sci. 79, 266-277 (2004).</li><li>Weir, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophotonic+imaging+in+HO-1.luc+transgenic+mice:+real-time+demonstration+of+gender-specific+chloroform+induced+renal+toxicity.">Biophotonic imaging in HO-1.luc transgenic mice: real-time demonstration of gender-specific chloroform induced renal toxicity.</a> Mutat. Res. 574, 67-75 (2005).</li><li>Rajashekara, G., Glover, D. A., Banai, M., O'Callaghan, D., Splitter, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attenuated+bioluminescent+Brucella+melitensis+mutants+GR019+(virB4),+GR024+(galE),+and+GR026+(BMEI1090-BMEI1091)+confer+protection+in+mice.">Attenuated bioluminescent Brucella melitensis mutants GR019 (virB4), GR024 (galE), and GR026 (BMEI1090-BMEI1091) confer protection in mice.</a> Infect. Immun. 74, 2925-2936 (1090).</li><li>Kadurugamuwa, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+biophotonic+imaging+for+monitoring+of+catheter-associated+urinary+tract+infections+and+therapy+in+mice.">Noninvasive biophotonic imaging for monitoring of catheter-associated urinary tract infections and therapy in mice.</a> Infect. Immun. 73, 3878-3887 (2005).</li><li>Ryan, P. L., Youngblood, R. C., Harvill, J., Willard, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photonic+monitoring+in+real+time+of+vascular+endothelial+growth+factor+receptor+2+gene+expression+under+relaxin-induced+conditions+in+a+novel+murine+wound+model.">Photonic monitoring in real time of vascular endothelial growth factor receptor 2 gene expression under relaxin-induced conditions in a novel murine wound model.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 1041, 398-414 (2005).</li><li>Zhu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+imaging+of+GFAP+expression+after+neuronal+damage+in+mice.">Non-invasive imaging of GFAP expression after neuronal damage in mice.</a> Neurosci. Lett. 367, 210-212 (2004).</li><li>Noiseux, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+overexpressing+Akt+dramatically+repair+infarcted+myocardium+and+improve+cardiac+function+despite+infrequent+cellular+fusion+or+differentiation.">Mesenchymal stem cells overexpressing Akt dramatically repair infarcted myocardium and improve cardiac function despite infrequent cellular fusion or differentiation.</a> Mol. Ther. 14, 840-850 (2006).</li><li>Ajiki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Composite+tissue+transplantation+in+rats:+fusion+of+donor+muscle+to+the+recipient+site.">Composite tissue transplantation in rats: fusion of donor muscle to the recipient site.</a> Transplant Proc. 37, 208-209 (2005).</li><li>Trivedi, P., Hematti, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+and+immunological+characterization+of+mesenchymal+stromal+cells+from+human+embryonic+stem+cells.">Derivation and immunological characterization of mesenchymal stromal cells from human embryonic stem cells.</a> Exp. Hematol. 36, 350-359 (2008).</li><li>Ogle, B. M., Cascalho, M., Platt, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+implications+of+cell+fusion.">Biological implications of cell fusion.</a> Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 6, 567-575 (2005).</li><li>Collins, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ImageJ+for+microscopy.">ImageJ for microscopy.</a> BioTechniques. 43, 25-30 (2007).</li></ol>

وصف الأسلوب هنا يسمح ، للمرة الأولى ، وتحديد وتحليل منفصلة الزماني للانصهار الخلية في الكائنات الحية ، بما في ذلك الحيوانات الصغيرة. نهج يجمع بين لجنة المساواة العرقية ، مع إعادة التركيب LoxP اللاحقة biophotonic تحليل الصور. هذا النهج هو قابلة للتتبع ليس فقط الخلايا خلايا ا?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> النيون ترنسفكأيشن النظام </td><td> Invitrogen ، كارلسباد ، كاليفورنيا </td><td> MPK5000 </td><td></td></tr><tr><td> نيون 100 كيت ميكرولتر </td><td> Invitrogen ، كارلسباد ، كاليفورنيا </td><td> MPK10025 </td><td> ويحتوي الاحتياطي R E </td></tr><tr><td> A - MEM مسحوق </td><td> Invitrogen ، كارلسباد ، كاليفورنيا </td><td> 12000-022 </td><td></td></tr><tr><td> الجنين مصل البقر (FBS) </td><td> Hyclone ، لوغان UT </td><td> SH30070.03 </td><td></td></tr><tr><td> B6.C - TG (CMV - لجنة المساواة العرقية) 1Cgn / J </td><td> مختبر جاكسون ، بار هاربور ، ME </td><td> 006054 </td><td></td></tr><tr><td> 10X التربسين </td><td> فيشر العلمية والغابات في الحديقة ، ونيو جيرسي </tد&gt; <td> MT - 25 - 054 - الكلورين </td><td></td></tr><tr><td> L - الجلوتامين </td><td> فيشر العلمية والغابات في الحديقة ، ونيو جيرسي </td><td> 25030-081 </td><td></td></tr><tr><td> D - Luciferin </td><td> الفرجار العلوم الحياتية ، Hopkinton ، MA </td><td> 122796 </td><td></td></tr><tr><td> Xenogen نظام التصوير Biophotonic </td><td> الفرجار العلوم الحياتية ، Hopkinton ، MA </td><td> IVIS الطيف </td><td></td></tr><tr><td> الصوديوم Biocarbonate </td><td> سيغما الدريتش ، وسانت لويس ، MO </td><td> S6014 - 500G </td><td></td></tr><tr><td> غير الأحماض الأمينية الأساسية </td><td> Invitrogen ، كارلسباد ، كاليفورنيا </td><td> 11140-050 </td><td></td></tr></tbody></table>

a cre-lox p recombination approach for the detection of cell fusion in vivo

وقد استخدمت هذه القدرة من اثنين أو أكثر من الخلايا من نفس النوع على المزج بين التطور في جميع أنحاء metazoans لتشكيل أجهزة معقدة كثيرة ، بما في ذلك الهيكل العظمي والعضلات والعظام والمشيمة. الدراسات المعاصرة تثبت انصهار خلايا من نفس النوع تمنح وظيفة المحسنة. على سبيل المثال ، عندما خلايا الأرومة الغاذية من الصمامات المشيمة لتشكيل الأرومة الغاذية المخلوية ، والأرومة الغاذية المخلوية أقدر على نقل المواد الغذائية والهرمونات عبر حاجز الأم والجنين من غير مدمجة trophoblasts 1-4. المزيد من الدراسات الحديثة تظهر مزيجا من أنواع مختلفة من الخلايا يمكن أن يوجه مصير الخلية. وكان يعتقد مرة واحدة &quot;الارتداد&quot; أو تعديل مصير الخلية التي الانصهار إلى أن تقتصر على أنظمة الثقافة الخلية. بل أدى ظهور زرع الخلايا الجذعية لاكتشاف من قبلنا وغيرها من الجهات التي يمكن أن الخلايا الجذعية تندمج مع الخلايا الجسدية في الجسم الحي والتي تسهل الاندماج تمايز الخلايا الجذعية 5-7. وهكذا ، والانصهار الخلية هو تنظيم عملية جيمكن apable تعزيز بقاء الخلايا والتمايز ، وبالتالي يكون من الأهمية المركزية لإصلاح وتطوير الأنسجة وحتى التسبب في المرض. الحد من الانصهار دراسة الخلية ، هو الافتقار إلى التكنولوجيا المناسبة ل1) تحديد المنتجات بدقة والانصهار 2) تتبع المنتجات الانصهار مع مرور الوقت. هنا نقدم منهجا جديدا لمعالجة كل القيود عن طريق تحريض تلألؤ بيولوجي على الانصهار (الشكل 1) ؛ ويمكن الكشف عن تلألؤ بيولوجي مع حساسية عالية في الجسم الحي 15/08 ونحن الاستفادة من بناء ترميز luciferase يراعة (Photinus البرالس) وضعت بالقرب من الجين a كودون وقف يحيط بها سلاسل LoxP عند التعبير عن هذه الخلايا بخلايا فتيل الجين التعبير عن بروتين recombinase لجنة المساواة العرقية ، والمشقوق المواقع LoxP ورفعه إشارة تكف عن السماح النسخ من luciferase. لأن الإشارة induciبلي ، من حدوث إشارات إيجابية كاذبة منخفض جدا. على عكس الطرق الحالية التي تستخدم نظام لجنة المساواة العرقية / LoxP 16 ، 17 ، أدخلنا إشارة &quot;حية&quot; الكشف وبالتالي تحمل للمرة الأولى الفرصة لتتبع حركية الانصهار خلية في الجسم الحي. للتدليل على النهج ، معربا عن الفئران بتواجد مطلق لجنة المساواة العرقية recombinase بمثابة المستفيدين من الخلايا الجذعية transfected مع بناء للتعبير عن المصب luciferase من كودون وقف floxed. تم زرع الخلايا الجذعية عن طريق الحقن intramyocardial وبعد إجراء زرع تحليل الصور intravital لتتبع وجود المنتجات الانصهار في القلب والأنسجة المحيطة بها على مر الزمن. ويمكن تكييف هذا النهج لتحليل خلايا الانصهار في أي نوع النسيج في أي مرحلة من مراحل المرض ، وتطوير أو إصلاح الأنسجة الكبار.

Watch this Scientific Journal Video about A Cre-Lox P Recombination Approach for the Detection of Cell Fusion In Vivo at JoVE.com

A Cre-Lox P Recombination Approach for the Detection of Cell Fusion In Vivo

ووصف طريقة لتعقب الخلية الانصهار في الكائنات الحية على مر الزمن. ويستخدم نهج لجنة المساواة العرقية.<em&gt; LoxP</em&gt; التوحد للحث على التعبير luciferase الانصهار الخلية. ويمكن الكشف عن إشارة الانارة ولدت في الكائنات الحية باستخدام نظم التصوير biophotonic مع حساسية الكشف عن الخلايا 1000 ~ في الأنسجة الطرفية.

أ ف التوحد لجنة المساواة العرقية ، السلمون المدخن النهج للكشف عن خلية الانصهار في فيفو</em

The ability of two or more cells of the same type to fuse has been utilized in metazoans throughout evolution to form many complex organs, including ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

A Cre-Lox P Recombination Approach for the Detection of Cell Fusion In Vivo

Biomolecular Detection employing the Interferometric Reflectance Imaging Sensor (IRIS)

Biomolecular Detection employing the Interferometric Reflectance Imaging Sensor IRIS

اكتشاف الجزيئية البيولوجية توظيف الانعكاس التداخل التصوير الاستشعار (IRIS)

The sensitive measurement of biomolecular interactions has use in many fields and industries such as basic biology and microbiology, ...

Fabrication of Electrochemical-DNA Biosensors for the Reagentless Detection of Nucleic Acids, Proteins and Small Molecules

تصنيع أجهزة الاستشعار الكهروكيميائية الدنا للكشف Reagentless من الأحماض النووية والبروتينات والجزيئات الصغيرة

As medicine is currently practiced, doctors send specimens to a central laboratory for testing and thus must wait hours or days to 
receive the results. ...

Creating Two-Dimensional Patterned Substrates for Protein and Cell Confinement

إنشاء ثنائي الأبعاد ركائز منقوشة على الحبس البروتين والخلايا

Microcontact printing provides a rapid, highly reproducible method for the creation of well-defined patterned substrates.1  While microcontact printing ...

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

ميكروفلويديك أجهزة بسيطة لل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التصوير من<em&gt; C. ايليجانس</em&gt;،<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; واسماك الزرد

Micro fabricated fluidic devices provide an accessible micro-environment for in vivo studies on small organisms. Simple fabrication processes are ...

Microinjection Wound Assay and In vivo Localization of Epidermal Wound Response Reporters in Drosophila Embryos.

Microinjection Wound Assay and In vivo Localization of Epidermal Wound Response Reporters in Drosophila Embryos.

حقن مكروي الجرح الفحص و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; توطين البشرة الجرح مراسلون الاستجابة في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الأجنة.

The Drosophila embryo develops a robust epidermal layer that serves both to protect the internal cells from a harsh external environment as well as to ...

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

جلد كامل عيب نموذج في تقييم الأوعية الدموية من الحيوية<em&gt; في فيفو</em

Insufficient vascularization is considered to be one of the main factors limiting the clinical success of tissue-engineered constructs. In order to ...

A Label-free Technique for the Spatio-temporal Imaging of Single Cell Secretions

تقنية تسمية خالية لتصوير المكانية والزمانية لإفرازات خلية واحدة

Inter-cellular communication is an integral part of a complex system that helps in maintaining basic cellular activities. As a result, the malfunctioning ...

Hollow Fiber Bioreactors for In Vivo-like Mammalian Tissue Culture

Hollow Fiber Bioreactors for In Vivo-like Mammalian Tissue Culture

المفاعلات الحيوية الألياف المجوفة ل<em&gt; في فيفو</em&gt; تشبه الثدييات زراعة الأنسجة

Tissue culture has been used for over 100 years to study cells and responses ex vivo. The convention of this technique is the growth of anchorage ...

Preparation of 3D Collagen Gels and Microchannels for the Study of 3D Interactions In Vivo

Preparation of 3D Collagen Gels and Microchannels for the Study of 3D Interactions In Vivo

إعداد 3D الهلام الكولاجين وMicrochannels لدراسة التفاعلات 3D<em&gt; في فيفو</em

Historically, most cellular processes have been studied in only 2 dimensions.  While these studies have been informative about general cell signaling ...

Mesenchymal Stromal Cell Culture and Delivery in Autologous Conditions: A Smart Approach for Orthopedic Applications

الوسيطة اللحمية خلية الثقافة و التوصيل في حالة ذاتي: مقاربة ذكية لتطبيقات العظام

Human Mesenchymal Stromal Cells (hMSCs) are cultured in vitro with different media. Limits on their use in clinical settings, however, mainly depend on ...