Name: quantitative analysis of random migration of cells using time-lapse video microscopy
Uploaded: 2012-05-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Analysis of Random Migration of Cells Using Time-lapse Video Microscopy at JoVE.com

Gli autori desiderano ringraziare Amanda Struckhoff per l&#39;aiuto iniziale con l&#39;esperimento. Questo lavoro è stato sostenuto da una borsa di studio NIH 5RO1CA115706.

1. Preparazione della piastra ricoperta di collagene <ol><li> Diluire collagene ad una concentrazione finale di 10 pg / ml in Opti-Mem media. </li><li> Ricoprire piastre da 6 pozzetti con collagene, con l&#39;aggiunta di 1,5 ml dal passaggio 1 a ciascun pozzetto. Incubare per una notte a 4 ° C. </li><li> Il giorno seguente, lavare la piastra 2 volte con 1x Phosphate Buffered Saline (PBS) e memorizzarli in PBS. </li></ol> 2. Preparazione cellulare e Semina su una piastra da 6 pozzetti <p clas...

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	<li>Lauffenburger, D. A., Horwitz, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+migration:+a+physically+integrated+molecular+process.">Cell migration: a physically integrated molecular process.</a> Cell. 84, 359-369 (1996).</li><li>Ridley, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+migration:+integrating+signals+from+front+to+back.">Cell migration: integrating signals from front to back.</a> Science. 302, 1704-1709 (2003).</li><li>Petrie, R. J., Doyle, A. D., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Random+versus+directionally+persistent+cell+migration.">Random versus directionally persistent cell migration.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 10, 538-549 (2009).</li><li>Valone, F. H., Austen, K. F., Goetzl, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+the+random+migration+of+human+platelets.">Modulation of the random migration of human platelets.</a> J. Clin. Invest. 54, 1100-1106 (1974).</li><li>Biehlmaier, O., Hehl, J., Csucs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquisition+speed+comparison+of+microscope+software+programs.">Acquisition speed comparison of microscope software programs.</a> Microsc. Res. Tech. 74, 539-545 (2011).</li><li>Struckhoff, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+regulation+of+ROCK+in+tumor+cells+controls+CXCR4-driven+adhesion+events.">Dynamic regulation of ROCK in tumor cells controls CXCR4-driven adhesion events.</a> J. Cell. Sci. 123, 401-412 (2010).</li><li>Abramoff, M. D., Magelhaes, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+Processing+with+ImageJ.">Image Processing with ImageJ.</a> Biophoton. Internat. 11, 36-42 (2004).</li><li>Greenberg, J. H., Seppa, S., Seppa, H., Tyl Hewitt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+collagen+and+fibronectin+in+neural+crest+cell+adhesion+and+migration.">Role of collagen and fibronectin in neural crest cell adhesion and migration.</a> Dev. Biol. 87, 259-266 (1981).</li><li>Albini, A., Sporn, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tumour+microenvironment+as+a+target+for+chemoprevention.">The tumour microenvironment as a target for chemoprevention.</a> Nat. Rev. Cancer. 7, 139-147 (2007).</li><li>Yu, Y. P., Luo, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myopodin-mediated+suppression+of+prostate+cancer+cell+migration+involves+interaction+with+zyxin.">Myopodin-mediated suppression of prostate cancer cell migration involves interaction with zyxin.</a> Cancer. Res. 66, 7414-7419 (2006).</li><li>Teng, T. S., Lin, B., Manser, E., Ng, D. C., Cao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stat3+promotes+directional+cell+migration+by+regulating+Rac1+activity+via+its+activator+betaPIX.">Stat3 promotes directional cell migration by regulating Rac1 activity via its activator betaPIX.</a> J. Cell. Sci. 122, 4150-4159 (2009).</li><li>Wozniak, M. A., Kwong, L., Chodniewicz, D., Klemke, R. L., Keely, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=R-Ras+controls+membrane+protrusion+and+cell+migration+through+the+spatial+regulation+of+Rac+and+Rho.">R-Ras controls membrane protrusion and cell migration through the spatial regulation of Rac and Rho.</a> Mol. Biol. Cell. 16, 84-96 (2005).</li><li>Orr, A. W., Elzie, C. A., Kucik, D. F., Murphy-Ullrich, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombospondin+signaling+through+the+calreticulin/LDL+receptor-related+protein+co-complex+stimulates+random+and+directed+cell+migration.">Thrombospondin signaling through the calreticulin/LDL receptor-related protein co-complex stimulates random and directed cell migration.</a> J. Cell Sci. 116, 2917-2927 (2003).</li><li>Smith, A., Bracke, M., Leitinger, B., Porter, J. C., Hogg, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LFA-1-induced+T+cell+migration+on+ICAM-1+involves+regulation+of+MLCK-mediated+attachment+and+ROCK-dependent+detachment.">LFA-1-induced T cell migration on ICAM-1 involves regulation of MLCK-mediated attachment and ROCK-dependent detachment.</a> J. Cell Sci. 116, 3123-3133 (2003).</li></ol>

Il vero test di migrazione tempo casuale consente di preciso, sensibile, l&#39;analisi dei parametri di migrazione delle cellule come la velocità e spostamento. Questo metodo non è limitato alla fine misura valore punto, quindi è più quantitativa. Dal momento che, le cellule vengono monitorati nel normale terreno DMEM con siero, ma riduce l&#39;effetto deleterio di incubazione più lungo nel siero dei media liberi. È stato dimostrato che la migrazione delle cellule dipende dalla formattazione e rottura delle cellul...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reattivo </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Comments </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30243.01 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> Gemini Bio-Prodotti </td><td> 100-106 </td><td></td></tr><tr><td> Opti-Mem </td><td> Invitrogen </td><td> 31985-070 </td><td></td></tr><tr><td> Collagene </td><td> BD </td><td> 354231 </td><td></td></tr><tr><td> Microscopio con camera a cella Live &amp; automatizzato di controllo XY </td><td> Olimpo </td><td> Olympus 1X81 </td><td></td></tr><tr><td> Camera di controllo ambientale </td><td> Neue </td><td> Neue live cella Camera </td><td> Il nostro è un personalizzato costruito piano rettangolare lastra di vetro per le ottiche appropriate attraverso la parte superiore della camera. La forma rettangolare ospita multi-pozzetti utilizzati in molti dei nostri sperits. </td></tr><tr><td> Automated XY </td><td> Precedente </td><td> Prima Proscan </td><td> Questo permette di moltiplicare il ritorno precise posizioni XY selezionate durante la microscopia time lapse. </td></tr><tr><td> Macchina fotografica </td><td></td><td> Hamamatsu EM fotocamera C9100 </td><td></td></tr><tr><td> Software </td><td> Tipicamente acquistato tramite vendor microscopio, come Olympus </td><td> Presentazione Libro 5 </td><td></td></tr></tbody></table>

quantitative analysis of random migration of cells using time-lapse video microscopy

La migrazione delle cellule è un processo dinamico, che è importante per lo sviluppo embrionale, la riparazione dei tessuti, la funzione del sistema immunitario, e l&#39;invasione tumorale 1, 2. Durante la migrazione direzionale, cellule muoversi rapidamente in risposta ad un segnale extracellulare chemiotattica, o in risposta a stimoli intrinseci 3 forniti dalla macchina motilità di base. Migrazione casuale si verifica quando una cellula possiede bassa direzionalità intrinseca, permettendo alle cellule di esplorare il loro ambiente locale. La migrazione cellulare è un processo complesso, nella cella risposta iniziale subisce polarizzazione e sporgenze si estende nella direzione di migrazione 2. I metodi tradizionali per misurare la migrazione quale il saggio Boyden camera di migrazione è un metodo semplice per misurare chemiotassi in vitro, che consente di misurare la migrazione come risultato punto finale. Tuttavia, questo approccio non permette la misurazione di parametri di migrazione singoli, né permette di Visuazazione dei cambiamenti morfologici delle cellule subisce durante la migrazione. Qui vi presentiamo un metodo che ci permette di monitorare le cellule che migrano in tempo reale con video - microscopia lasso di tempo. Poiché la migrazione cellulare e dell&#39;invasione sono le caratteristiche di cancro, questo metodo è applicabile a studiare la migrazione delle cellule del cancro e l&#39;invasione in vitro. Migrazione casuale di piastrine è stato considerato come uno dei parametri di funzionalità piastrinica 4, quindi questo metodo potrebbe anche essere utile nello studio funzioni piastriniche. Questo saggio ha il vantaggio di essere rapida, affidabile, riproducibile, e non richiede l&#39;ottimizzazione del numero di cellule. Al fine di mantenere condizioni fisiologicamente adatte cellule, il microscopio è dotato di CO 2 di alimentazione e termostato. Movimento cellulare viene monitorata da ripresa di immagini con una telecamera montata sul microscopio a intervalli regolari. La migrazione cellulare può essere calcolata misurando la velocità media eMEDIO spostamento, che viene calcolato dal software Slidebook.

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Quantitative Analysis of Random Migration of Cells Using Time-lapse Video Microscopy

Questo metodo permette di monitoraggio delle cellule in tempo reale e misurazioni quantitative dei diversi parametri di migrazione cellulare, quali la velocità, spostamento e velocità. A differenza dei metodi tradizionali, questo approccio in tempo reale non si basa su misurazioni quantitative di migrazione degli endpoint, invece permette di monitorare e calcolare diversi parametri in modo continuo.

Analisi quantitativa della migrazione casuale di celle usando Time-lapse Microscopia Video

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