Name: quantitative analysis of random migration of cells using time-lapse video microscopy
Uploaded: 2012-05-13T14:00:00
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著者らは、実験と初期支援するアマンダStruckhoffに感謝します。この作品は、NIH 5RO1CA115706からの助成金によってサポートされていました。

1。コラーゲンをコートしたプレートの準備<ol><li>のOpti-MEM培地で10μg/ mlの最終濃度コラーゲンを希釈する。 </li><li>ステップ1からの各ウェルに1.5ミリリットルを追加することにより、コラーゲンコート6ウェルプレート、。一晩4℃でインキュベーションします。 </li><li>次の日に、1×リン酸でプレートを2回洗浄緩衝生理食塩水（PBS）とPBSに保存します。 </li></ol> 2。 6ウェルプ?...

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	<li>Lauffenburger, D. A., Horwitz, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+migration:+a+physically+integrated+molecular+process.">Cell migration: a physically integrated molecular process.</a> Cell. 84, 359-369 (1996).</li><li>Ridley, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+migration:+integrating+signals+from+front+to+back.">Cell migration: integrating signals from front to back.</a> Science. 302, 1704-1709 (2003).</li><li>Petrie, R. J., Doyle, A. D., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Random+versus+directionally+persistent+cell+migration.">Random versus directionally persistent cell migration.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 10, 538-549 (2009).</li><li>Valone, F. H., Austen, K. F., Goetzl, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+the+random+migration+of+human+platelets.">Modulation of the random migration of human platelets.</a> J. Clin. Invest. 54, 1100-1106 (1974).</li><li>Biehlmaier, O., Hehl, J., Csucs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquisition+speed+comparison+of+microscope+software+programs.">Acquisition speed comparison of microscope software programs.</a> Microsc. Res. Tech. 74, 539-545 (2011).</li><li>Struckhoff, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+regulation+of+ROCK+in+tumor+cells+controls+CXCR4-driven+adhesion+events.">Dynamic regulation of ROCK in tumor cells controls CXCR4-driven adhesion events.</a> J. Cell. Sci. 123, 401-412 (2010).</li><li>Abramoff, M. D., Magelhaes, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+Processing+with+ImageJ.">Image Processing with ImageJ.</a> Biophoton. Internat. 11, 36-42 (2004).</li><li>Greenberg, J. H., Seppa, S., Seppa, H., Tyl Hewitt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+collagen+and+fibronectin+in+neural+crest+cell+adhesion+and+migration.">Role of collagen and fibronectin in neural crest cell adhesion and migration.</a> Dev. Biol. 87, 259-266 (1981).</li><li>Albini, A., Sporn, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tumour+microenvironment+as+a+target+for+chemoprevention.">The tumour microenvironment as a target for chemoprevention.</a> Nat. Rev. Cancer. 7, 139-147 (2007).</li><li>Yu, Y. P., Luo, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myopodin-mediated+suppression+of+prostate+cancer+cell+migration+involves+interaction+with+zyxin.">Myopodin-mediated suppression of prostate cancer cell migration involves interaction with zyxin.</a> Cancer. Res. 66, 7414-7419 (2006).</li><li>Teng, T. S., Lin, B., Manser, E., Ng, D. C., Cao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stat3+promotes+directional+cell+migration+by+regulating+Rac1+activity+via+its+activator+betaPIX.">Stat3 promotes directional cell migration by regulating Rac1 activity via its activator betaPIX.</a> J. Cell. Sci. 122, 4150-4159 (2009).</li><li>Wozniak, M. A., Kwong, L., Chodniewicz, D., Klemke, R. L., Keely, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=R-Ras+controls+membrane+protrusion+and+cell+migration+through+the+spatial+regulation+of+Rac+and+Rho.">R-Ras controls membrane protrusion and cell migration through the spatial regulation of Rac and Rho.</a> Mol. Biol. Cell. 16, 84-96 (2005).</li><li>Orr, A. W., Elzie, C. A., Kucik, D. F., Murphy-Ullrich, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombospondin+signaling+through+the+calreticulin/LDL+receptor-related+protein+co-complex+stimulates+random+and+directed+cell+migration.">Thrombospondin signaling through the calreticulin/LDL receptor-related protein co-complex stimulates random and directed cell migration.</a> J. Cell Sci. 116, 2917-2927 (2003).</li><li>Smith, A., Bracke, M., Leitinger, B., Porter, J. C., Hogg, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LFA-1-induced+T+cell+migration+on+ICAM-1+involves+regulation+of+MLCK-mediated+attachment+and+ROCK-dependent+detachment.">LFA-1-induced T cell migration on ICAM-1 involves regulation of MLCK-mediated attachment and ROCK-dependent detachment.</a> J. Cell Sci. 116, 3123-3133 (2003).</li></ol>

リアルタイムランダム遊走アッセイは、速度や変位などの細胞遊走パラメータを正確に、機密性の高い、分析を可能にします。このメソッドは、より定量的であるので、ポイントの測定値を終了するには、制限されていません。ので、細胞は血清を正常DMEM培地で監視され、それは無血清培地におけるより長いインキュベーションの悪影響を減らすことができます。それは細胞の遊走は、書式...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> DMEM </td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td> SH30243.01 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td>ジェミニバイオ製品</td><td> 100から106 </td><td></td></tr><tr><td> OPTI-MEM </td><td>インビトロジェン</td><td> 31985-070 </td><td></td></tr><tr><td>コラーゲン</td><td> BD </td><td> 354231 </td><td></td></tr><tr><td>ライブセル室＆自動XYステージコントローラを搭載した顕微鏡</td><td>オリンポス</td><td>オリンパス1X81 </td><td></td></tr><tr><td>環境制御室</td><td>ノイエ</td><td>ノイエ·ライブセル室</td><td>我々は、チャンバの上部を介して、適切な光学系のカスタム構築された長方形のガラス板の上を持っています。長方形の形状は、私たちのexperimenの多くで使用されるマルチウェルプレートに対応TS。 </td></tr><tr><td>自動XYステージ</td><td>前の</td><td>前のPROSCAN </td><td>これは、正確なリターンが時間経過顕微鏡時に選択したXY位置を乗算することができます。 </td></tr><tr><td>カメラ</td><td></td><td>浜松EMカメラC9100 </td><td></td></tr><tr><td>ソフトウェア</td><td>典型的には、このようなオリンパス顕微鏡などのベンダーから購入し</td><td>スライドブック5 </td><td></td></tr></tbody></table>

quantitative analysis of random migration of cells using time-lapse video microscopy

細胞遊走は、胚発生、組織修復、免疫システムの機能、および腫瘍浸潤1、2のために重要である動的なプロセスです。双方向の移行時に、細胞は細胞外の走化信号に応答して、基本的な運動機構が提供する本質的な手がかり3に対応して急速に移動します。細胞は、細胞が自分のローカル環境を探索することができ、低い固有の方向性を持っているときに、ランダムな移行が行われる。 細胞遊走は、初期応答セルに、複雑なプロセスである偏光を受けると移行2の方向に突起を拡張します。そのようなBoydenチャンバー遊走アッセイなどの移行を測定する従来の方法は、エンドポイントの結果としての移行を測定することができ体外で走化性を測定する簡単な方法です。しかし、このアプローチはどちらも個別の移行パラメータの測定を可能にしない。また、映像設備を許可しないセル移行時に受けることが形態学的変化のlization。 時間経過顕微鏡 - ここでは、私たちはビデオを使ってリアルタイムで移行する細胞を監視することができます方法を提示する。細胞の遊走および浸潤癌の特徴であるため、このメソッドは 、in vitro で癌細胞の遊走および浸潤を研究する上で適用されるものとします。血小板のランダムな移行は血小板機能4のパラメータの一つとして考えられてきた。したがって、このメソッドはまた、血小板の機能を勉強するのに役立つかもしれません。このアッセイは迅速で、信頼性、再現性という利点を有しており、細胞数の最適化を必要としません。セルのための生理学的に適切な条件を維持するために、顕微鏡はCO 2の供給と温度サーモスタットが装備されています。細胞運動は、定期的に顕微鏡に取り付けたカメラを使用して写真を撮ることによって監視されています。細胞遊走は、平均速度と測定することによって計算することができます。Slidebookソフトウェアによって計算されますverage変位、。

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Quantitative Analysis of Random Migration of Cells Using Time-lapse Video Microscopy

このメソッドは、実時間、速度、変位、速度など、さまざまな細胞への移行パラメータの定量的測定の細胞のモニタリングが可能になります。従来の方法とは異なり、このリアルタイムのアプローチは、エンドポイントの定量的な移行の測定値に基づいてされていません。代わりに監視し、継続的にさまざまなパラメータを計算することができます。

タイムラプスビデオ顕微鏡を用いた細胞のランダムな移行の定量分析

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