Name: live-cell imaging of migrating cells expressing fluorescently-tagged proteins in a three-dimensional matrix
Uploaded: 2011-12-22T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-cell Imaging of Migrating Cells Expressing Fluorescently-tagged Proteins in a Three-dimensional Matrix at JoVE.com

نشكر الدكتور جرانت سوميدا لقراءة نقدية للمخطوطة. وأيد هذا العمل من قبل المحقق بيكمان جائزة الشباب (سي) ، وهي جائزة هيلمان العائلة كلية جديد (سي) ، وهو EUREKA المعاهد الوطنية للصحة ، وجامعة كاليفورنيا للسرطان جنة التنسيق البحوث.

1. جيل من خط الخلية مستقرة (خلايا MDCK مثلا) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة الخلايا في 80-90 ٪ confluency في صحن P35. لا تدع الخلايا شكل أحادي الطبقة متموجة 100 ٪ ، الأمر الذي سيقلل ترنسفكأيشن الكفاءة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transfect الخلايا مع الاهتمام باست?...

<ol>
	<li>Shih, W., Yamada, S., Myosin, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dependent+retrograde+flow+drives+3D+cell+migration.">A dependent retrograde flow drives 3D cell migration.</a> Biophys. J. 98 (8), L29-L31 (2010).</li><li>O'Brien, L. E., Yu, W., Tang, K., Jou, T. S., Zegers, M. M., Mostov, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+and+biochemical+analysis+of+Rac1+in+three-dimensional+epithelial+cell+cultures.">Morphological and biochemical analysis of Rac1 in three-dimensional epithelial cell cultures.</a> Methods Enzymol. 406, 676-691 (2006).</li><li>Legant, W. R., Miller, J. S., Blakely, B. L., Cohen, D. M., Genin, G. M., Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+mechanical+tractions+exerted+by+cells+in+three-dimensional+matrices.">Measurement of mechanical tractions exerted by cells in three-dimensional matrices.</a> Nat. Methods. 7 (12), 969-971 (2010).</li><li>Del Alamo, J. C., Meili, R., Alonso-Latorre, B., Rodriguez-Rodriguez, J., Aliseda, A., Firtel, R. A., Lasheras, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatio-temporal+analysis+of+eurkaryotic+cell+motility+by+improved+force+cytometry.">Spatio-temporal analysis of eurkaryotic cell motility by improved force cytometry.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104 (33), 13343-13348 (2007).</li><li>Lippincott-Schwartz, J., Snapp, E., Kenworthy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+protein+dynamics+in+living+cells.">Studying protein dynamics in living cells.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2 (6), 444-456 (2001).</li><li>Phair, R. D., Misteli, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetic+modeling+approaches+to+in+vivo+imaging.">Kinetic modeling approaches to in vivo imaging.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2 (12), 898-907 (2001).</li><li>Giepmans, B. N., Adams, S. R., Ellisman, M. H., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+toolbox+for+assessing+protein+location+and+function.">Fluorescent toolbox for assessing protein location and function.</a> Science. 312 (5771), 217-224 (2006).</li><li>Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins.">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nat. Methods. 2, 905-909 (2005).</li><li>Cukierman, E., Pankov, R., Stevens, D. R., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taking+cell-matrix+adhesions+to+the+third+dimension.">Taking cell-matrix adhesions to the third dimension.</a> Science. 294 (5547), 1708-1712 (2001).</li></ol>

نحن هنا وصف طريقة لاستخدام التصوير الخلية الحية لدراسة آليات الهجرة الخلية في مصفوفة ثلاثية الأبعاد. نجاح هذه التقنية يعتمد على الحصول على &quot;جيدة&quot; معربا عن استنساخ ستابلي GFP الموسومة البروتينات. وانخفاض مستوى البروتينات GFP تتطلب التعرض الإثارة الزائدة التي التن?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> الكولاجين البقري ، النوع الأول </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 354231 </td><td> الاسهم حوالي 3 ملغ / مل </td></tr><tr><td> 3 aminopropyltrimethoxysilane </td><td> سيغما الدريتش </td><td> 281778 </td><td> المخفف في الماء </td></tr><tr><td> غلوتارالدهيد </td><td> سيغما الدريتش </td><td> 340855 </td><td> المخفف في برنامج تلفزيوني </td></tr><tr><td> 1M Hepes </td><td> Invitrogen </td><td> 15630-080 </td><td></td></tr><tr><td> Fluospheres البوليسترين المجهرية 1 ميكرومتر ، مضان أحمر (580/605) </td><td> Invitrogen </td><td> F13083 </td><td></td></tr><tr><td> Geneticin (G418) </td><td> Invitrogen </td><td> 11811-031 </td><td></td></TR&gt; <tr><td colspan="4"> مكونات الثقافة وسائل الإعلام : </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 31600-034 </td><td></td></tr><tr><td> المصل البقري الجنين </td><td> اتلانتا البيولوجية </td><td> S115500 </td><td></td></tr><tr><td> البنسلين / الستربتوميسين </td><td> Invitrogen </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> الكاناميسين </td><td> Invitrogen </td><td> 15160-054 </td><td></td></tr></tbody></table>

live-cell imaging of migrating cells expressing fluorescently-tagged proteins in a three-dimensional matrix

تقليديا ، وقد تمت دراسة الهجرة الخلية على اثنين من الأبعاد أسطح بلاستيكية صلبة. ومع ذلك ، خلال العمليات البيولوجية الهامة مثل التئام الجروح ، وترميم الأنسجة ، والانبثاث السرطان ، ويجب أن تنقل من خلال خلايا الأنسجة معقدة ثلاثية الأبعاد ، خارج الخلية. إلى فهم أفضل للآليات وراء هذه العمليات البيولوجية ، فمن المهم دراسة دور كل من البروتينات المسؤولة عن قيادة خلية الهجرة. هنا ، ونحن الخطوط العريضة لبروتوكول لدراسة آليات الهجرة الخلية باستخدام خط الخلايا الظهارية (MDCK) ، وثلاثية الأبعاد ، ليفي ، البلمرة مصفوفة الذاتي باعتباره النظام النموذجي. هذه المصفوفة خارج الخلية بصريا واضحة قابلة بسهولة للدراسات التصوير الخلية الحية وأفضل يحاكي الفسيولوجية ، والبيئة ، الأنسجة الرخوة. هذا التقرير يوضح تقنية لتصور مباشرة توطين البروتين وديناميكية ، وتشوه مصفوفة ثلاثية الأبعاد المحيطة. امتحانination توطين البروتين وديناميكية خلال العمليات الخلوية توفر الفكرة الرئيسية في وظائف البروتين. به نيون المشفرة جينيا توفر طريقة فريدة من نوعها لرصد توطين البروتين وديناميكية. باستخدام هذه التقنية ، يمكننا تحليل تراكم التحت خلوية من المفتاح ، والقوة المولدة للمكونات هيكل الخلية في الوقت الحقيقي كما المناورات الخلية من خلال المصفوفة. بالإضافة إلى ذلك ، باستخدام به نيون متعددة مع أطوال موجية مختلفة ، يمكننا النظر في توطين بروتينات متعددة في وقت واحد ، مما يسمح لنا لاختبار ، على سبيل المثال ، إذا كان لديهم أدوار مختلفة من البروتينات مشابهة أو مختلفة. وعلاوة على ذلك ، يمكن كميا ديناميات بروتينات الموسومة fluorescently باستخدام الاسترداد بعد Photobleaching نيون (FRAP) التحليل. هذه المقايسات قياس البروتين التنقل وكيفية ستابلي ملزمة البروتينات هي لشبكة هيكل الخلية. عن طريق الجمع بين الخلية الحية التصوير مع علاج من مثبطات البروتين وظيفة ،يمكننا النظر في التغييرات في الوقت الحقيقي في توزيع البروتينات ومورفولوجيا الخلايا المهاجرة. وعلاوة على ذلك ، ونحن أيضا دمج الخلايا الحية التصوير مع استخدام الجزيئات التتبع الفلورسنت المدمجة داخل المصفوفة لتصور تشوه مصفوفة أثناء الهجرة الخلية. وبالتالي ، لا يمكننا تصور كيف يمكن لخلية المهاجرة توزع القوة المولدة للبروتينات ، وحيث تبذل قوات الجر إلى المصفوفة المحيطة بها. من خلال هذه التقنيات ، يمكننا الحصول على معلومات قيمة حول دور كل من بروتينات معينة ومساهماتها في آليات الهجرة الخلية.

Watch this Scientific Journal Video about Live-cell Imaging of Migrating Cells Expressing Fluorescently-tagged Proteins in a Three-dimensional Matrix at JoVE.com

Live-cell Imaging of Migrating Cells Expressing Fluorescently-tagged Proteins in a Three-dimensional Matrix

وقد جرت العادة على العمليات الخلوية مثل الهجرة الخلية درس على السطوح ثنائية الأبعاد ، والبلاستيك شديدة. هذا التقرير وصفا لأسلوب لتصور مباشرة توطين البروتين وتحليل ديناميات البروتين في الخلايا المهاجرة في مصفوفة أكثر أهمية من الناحية الفسيولوجية ثلاثي الأبعاد.

تعيش خلية من خلايا التصوير تعرب عن ترحيل البروتينات Fluorescently الموسومة في مصفوفة ثلاثية الأبعاد

Traditionally, cell migration has been studied on two-dimensional, stiff plastic surfaces. However, during important biological processes such as wound ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Three-dimensional Optical-resolution Photoacoustic Microscopy

ثلاثي الأبعاد البصرية الميكروسكوب الضوئي الاستبانة

Optical microscopy, providing valuable insights at the cellular and organelle levels, has been widely recognized as an enabling biomedical technology. As ...

Planar and Three-Dimensional Printing of Conductive Inks

مستو وثلاثي الابعاد من أحبار الطباعة موصل

Printed electronics rely on low-cost, large-area fabrication routes to create flexible or multidimensional electronic, optoelectronic, and biomedical ...

Universal Hand-held Three-dimensional Optoacoustic Imaging Probe for Deep Tissue Human Angiography and Functional Preclinical Studies in Real Time

عالمية باليد ثلاثي الأبعاد بصري سمعي التصوير دقق في الأنسجة العميقة تصوير الأوعية الدموية الإنسان والدراسات ما قبل السريرية وظيفية في الوقت الحقيقي

The exclusive combination of high optical contrast and excellent spatial resolution makes optoacoustics (photoacoustics) ideal for simultaneously ...

Analysis of Cell Migration within a Three-dimensional Collagen Matrix

تحليل الهجرة خلية داخل الكولاجين مصفوفة ثلاثية الأبعاد

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic ...

Using Cell-substrate Impedance and Live Cell Imaging to Measure Real-time Changes in Cellular Adhesion and De-adhesion Induced by Matrix Modification

باستخدام الممانعة الخلوي الركيزة ويعيش التصوير خلية قياس التغييرات في الوقت الحقيقي في التصاق الخلوية ودي التصاق المستحث بواسطة مصفوفة تعديل

Cell-matrix adhesion plays a key role in controlling cell morphology and signaling. Stimuli that disrupt cell-matrix adhesion (e.g., myeloperoxidase and ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

جيل من سمك ثلاثي الأبعاد الجلد كامل أي ما يعادل واصابة الآلي

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Live Cell Imaging during Mechanical Stretch

يعيش التصوير خلية خلال الإمتداد الميكانيكية

There is currently a significant interest in understanding how cells and tissues respond to mechanical stimuli, but current approaches are limited in ...

Engineering Three-dimensional Epithelial Tissues Embedded within Extracellular Matrix

الأنسجة الطلائية الهندسة ثلاثي الأبعاد جزءا لا يتجزأ من داخل خارج الخلية مصفوفة

The architecture of branched organs such as the lungs, kidneys, and mammary glands arises through the developmental process of branching morphogenesis, ...

Melt Electrospinning Writing of Three-dimensional Poly(&#949;-caprolactone) Scaffolds with Controllable Morphologies for Tissue Engineering Applications

Melt Electrospinning Writing of Three-dimensional PolyÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Âµ-caprolactone Scaffolds with Controllable Morphologies for Tissue Engineering Applications

تذوب الكتابة اليكتروسبينينج من السقالات Poly(ε-caprolactone) ثلاثي الأبعاد مع مورفولوجيس يمكن السيطرة عليها لتطبيقات هندسة الأنسجة

This tutorial reflects on the fundamental principles and guidelines for electrospinning writing with polymer melts, an additive manufacturing technology ...

Culturing Mammalian Cells in Three-dimensional Peptide Scaffolds

استزراع خلايا الثدييات في السقالات ببتيد ثلاثي الأبعاد

A useful technique for culturing cells in a self-assembling nanofiber three-dimensional (3D) scaffold is described. This culture system recreates an ...