Name: paired nanoinjection and electrophysiology assay to screen for bioactivity of compounds using the drosophila melanogaster giant fiber system
Uploaded: 2012-04-15T14:00:00
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Nous tenons à remercier les membres du laboratoire Mari et le laboratoire Godenschwege, en particulier Aline Yonezawa, pour les commentaires et l&#39;aide à ce protocole. Ce travail a été financé par l&#39;Institut national des troubles neurologiques et des maladies de subvention à la bande FM R21NS06637 et TAG; AB a été financé par le nombre National Science prix de la Fondation 082925, URM: biologie intégrative pour les futurs chercheurs.

1. Électrophysiologie Rig Set-up <ol><li> L&#39;équipement requis pour la plate-forme d&#39;électrophysiologie set-up est décrite en détail par Augustin et al. dans le présent Journal 14. S&#39;il vous plaît se référer à cet article pour une explication détaillée des appareils électrophysiologiques nécessaires. </li><li> Modifier la plate-forme décrit précédemment électrophysiologie set-up 14 par l&#39;ajout d&#39;un micromanipulateur sixième, qui détient le nanoinjec...

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	<li>Koehn, F. E., Carter, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolving+role+of+natural+products+in+drug+discovery.">The evolving role of natural products in drug discovery.</a> Nat. Rev. Drug Discov. 4, 206-220 (2005).</li><li>Miljanich, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ziconotide:+neuronal+calcium+channel+blocker+for+treating+severe+chronic+pain.">Ziconotide: neuronal calcium channel blocker for treating severe chronic pain.</a> Curr. Med. Chem. 11, 3029-3040 (2004).</li><li>Layer, R. T., Wagstaff, J. D., White, H. 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J., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+Recordings+from+the+Giant+Fiber+Pathway+of+D.+melanogaster.">Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (47), e2412 (2011).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T., Zhang, B., Freeman, M. R., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila Neurobiology. , 215-224 (2010).</li><li>Blagburn, J. M., Alexopoulos, H., Davies, J. A., Bacon, J. 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Neurosci. 28, 587-597 (2008).</li></ol>

Le bio-essai nanoinjection / électrophysiologie présentée ici permet de dépistage rapide de composés dans le système nerveux de la mouche des fruits. C&#39;est un roman dans la technique in vivo qui nécessite de petites quantités d&#39;un composé de susciter un effet sur ​​une variété de cibles moléculaires dans un circuit neuronal bien caractérisé. Cette méthode peut être utilisée pour tester la bioactivité des composés différents, à partir de toxines inconnues disponibles dan...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Électrodes de verre d&#39;enregistrement: verre borosilicate capillaires </td><td> Instruments de précision du monde </td><td> 1B100F-4 </td><td> 1.0mm OD, 0.58mm ID </td></tr><tr><td> Stimulateur </td><td> Instruments de gazon </td><td> Modèle S48 </td><td></td></tr><tr><td> Amplificateur </td><td> Obtenir Instruments Inc </td><td> 5A Modèle </td><td></td></tr><tr><td> Acquisition de données Logiciels: Digidata </td><td> Molecular Devices </td><td> Modèle 1440A </td><td></td></tr><tr><td> Logiciel de collecte de données: pCLAMP </td><td> Molecular Devices </td><td> Version 10 </td><td></td></tr><tr><td> Stéréomicroscope wvec la fibre optique d&#39;éclairage anneau microscope </td><td> AmScope </td><td> SM-4T Modèle HL250-AR </td><td></td></tr><tr><td> Dissection portée pour le montage </td><td> AmScope </td><td> SM-2TZ </td><td></td></tr><tr><td> Kite Manuel Micromanipulateur &amp; inclinable base </td><td> Instruments de précision du monde </td><td> Modèle # M3301 Kite: Modèle # KITE-M3-L </td><td></td></tr><tr><td> Drosophila melanogaster sauvage 10E génotype (souche de type sauvage) </td><td> Bloomington Stock centre </td><td> Stock # 3892 </td><td></td></tr><tr><td> Vertical pipette extracteur </td><td> David Kopf Instruments </td><td> Modèle 700c </td><td></td></tr><tr><td> Micropipettes de verre d&#39;injection: verre borosilicate capillaires </td><td> Instruments de précision du monde </td><td> Catalogue # 4878 </td&gt; <td> 1.14mm OD, ID 0.5mm </td></tr><tr><td> Huile de silicone </td><td> Pêcheur </td><td> Catalogue # S159-500 </td><td></td></tr><tr><td> Chanfreiner </td><td> Sutter Instrument Co. </td><td> KT Brown Type d&#39; Modèle # BV-10 </td><td></td></tr><tr><td> Nanoliter2000 </td><td> Instruments de précision du monde </td><td> Catalogue # B203XVY </td><td></td></tr><tr><td> Colorant alimentaire bleu </td><td> McCormick </td><td> N / A </td><td> Ingrédients: Eau, Propylène Glycol, FD &amp; C Blue 1, et 0,1% (conservateur) propylparaben. </td></tr><tr><td> Methyllycaconitine citrate (MLA) </td><td> Bioscience Tocris </td><td> Catalogue # 1029 </td><td></td></tr><tr><td> Bâtonnets de cire en plastique </td><td> Hygenic Corporation (Akron Ohio aux Etats-Unis) </td><td></td><td></td></tr></tbody&gt; </table>

paired nanoinjection and electrophysiology assay to screen for bioactivity of compounds using the drosophila melanogaster giant fiber system

Criblage de composés pour l&#39;activité in vivo peut être utilisé en tant que première étape d&#39;identifier des candidats qui peuvent être développés en 1,2 agents pharmacologiques. Nous avons développé un roman nanoinjection / électrophysiologie dosage qui permet la détection des effets modulateurs de composés bioactifs sur la fonction d&#39;un circuit neuronal qui sert de médiateur de la réaction de fuite chez Drosophila melanogaster 3,4. Notre test in vivo, qui utilise le système de Drosophila fibre géante (GFS, Figure 1) permet le dépistage des différents types de composés, tels que de petites molécules ou des peptides, et exige que des quantités minimales à obtenir un effet. En outre, le GFS Drosophila offre une grande variété de cibles moléculaires potentielles sur les neurones ou les muscles. Les fibres géantes (GFS) synapse électrique (Gap jonctions) ainsi que chimiquement (cholinergique) sur une synapse périphérique Interneuron (PSI) et le Tergo Muscle Trochanteral neurone (TTMn) 5 </sup&gt;. Le PSI à DLMn (dorsale neurone musculaire longitudinale) de connexion dépend de Dα7 récepteurs nicotiniques de l&#39;acétylcholine (nAChR) 6. Enfin, la jonction neuromusculaire (JNM) de l&#39;TTMn et le DLMn avec le saut (TTM) et les muscles de vol (DLM) sont glutamatergique 7-12. Ici, nous montrons comment injecter des quantités nanolitre d&#39;un composé, tout en obtenant électrophysiologiques des enregistrements intracellulaires du système de fibre géante 13 et la façon de surveiller les effets du composé sur la fonction de ce circuit. Nous montrons la spécificité du test avec du citrate de methyllycaconitine (MLA), un antagoniste nAChR, qui perturbe le PSI à DLMn connexion, mais pas le GF TTMn connexion ou la fonction de la jonction neuromusculaire au saut ou les muscles de vol. Avant de commencer cette vidéo, il est essentiel que vous regardez attentivement et se familiariser avec la vidéo intitulée &quot;JoVE enregistrements électrophysiologiques de la voie des fibres Géant de D. melanogaster &quot;de Augustin et al 7, comme la vidéo présentée ici est conçu comme une extension de cette technique existante. Ici, nous utilisons la méthode électrophysiologique des enregistrements et de se concentrer en détail que sur l&#39;ajout des nanoinjections appariés et de la technique de surveillance.

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Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Un rapide<em&gt; In vivo</em&gt; Test pour tester des composés neuromodulateurs en utilisant le système de fibre géante (GFS) de<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Est décrite. Nanoinjections dans la tête de l&#39;animal ainsi que des enregistrements électrophysiologiques de la SFP peut révéler la bioactivité des composés sur les neurones ou les muscles.

Nanoinjection paires et test d&#39;électrophysiologie à l&#39;écran de la bioactivité des composés en utilisant le Drosophila melanogaster Système de fibre géant

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

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Enregistrements électrophysiologiques de la voie des fibres Géant de D. melanogaster</em

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