Name: paired nanoinjection and electrophysiology assay to screen for bioactivity of compounds using the drosophila melanogaster giant fiber system
Uploaded: 2012-04-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System at JoVE.com

Мы хотели бы выразить признательность членам Марий лаборатории и Godenschwege лаборатории, в частности, Алина Йонезава, комментарии и помощь с этим протоколом. Эта работа финансировалась Национальным институтом неврологических расстройств и инсульта грант R21NS06637 в FM и TAG, AB финансировалось Национальным научным фондом награды число 082925, URM: интегративной биологии для будущих исследователей.

1. Электрофизиология Rig Настройка <ol><li> Необходимое оборудование для установки электрофизиологии настройки подробно описан Августином и др.. В этом журнале 14. Пожалуйста, обратитесь к этой статье подробное объяснение электрофизиологических аппараты необходимы. </li><li> Измен?...

<ol>
	<li>Koehn, F. E., Carter, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolving+role+of+natural+products+in+drug+discovery.">The evolving role of natural products in drug discovery.</a> Nat. Rev. Drug Discov. 4, 206-220 (2005).</li><li>Miljanich, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ziconotide:+neuronal+calcium+channel+blocker+for+treating+severe+chronic+pain.">Ziconotide: neuronal calcium channel blocker for treating severe chronic pain.</a> Curr. Med. Chem. 11, 3029-3040 (2004).</li><li>Layer, R. T., Wagstaff, J. D., White, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conantokins:+peptide+antagonists+of+NMDA+receptors.">Conantokins: peptide antagonists of NMDA receptors.</a> Curr. Med. Chem. 11, 3073-3084 (2004).</li><li>Lewis, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conotoxins+as+selective+inhibitors+of+neuronal+ion+channels,+receptors+and+transporters.">Conotoxins as selective inhibitors of neuronal ion channels, receptors and transporters.</a> IUBMB Life. 56, 89-93 (2004).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A., Tanouye, M. A., Phelan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+an+escape:+development+and+function+of+the+Drosophila+giant+fibre+system.">Making an escape: development and function of the Drosophila giant fibre system.</a> Semin. Cell Dev. Biol. 17, 31-41 (2006).</li><li>Fayyazuddin, A., Zaheer, M. A., Hiesinger, P. R., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nicotinic+acetylcholine+receptor+Dalpha7+is+required+for+an+escape+behavior+in+Drosophila.">The nicotinic acetylcholine receptor Dalpha7 is required for an escape behavior in Drosophila.</a> PLoS biology. 4, e63 (2006).</li><li>Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-glutamate+as+an+excitatory+transmitter+at+the+Drosophila+larval+neuromuscular+junction.">L-glutamate as an excitatory transmitter at the Drosophila larval neuromuscular junction.</a> The Journal of physiology. 262, 215-236 (1976).</li><li>Usherwood, P. N., Machili, P., Leaf, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-Glutamate+at+insect+excitatory+nerve-muscle+synapses.">L-Glutamate at insect excitatory nerve-muscle synapses.</a> Nature. 219, 1169-1172 (1968).</li><li>Marrus, S. B., Portman, S. L., Allen, M. J., Moffat, K. G., DiAntonio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+localization+of+glutamate+receptor+subunits+at+the+Drosophila+neuromuscular+junction.">Differential localization of glutamate receptor subunits at the Drosophila neuromuscular junction.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 24, 1406-1415 (2004).</li><li>Petersen, S. A., Fetter, R. D., Noordermeer, J. N., Goodman, C. S., DiAntonio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+glutamate+receptors+in+Drosophila+reveals+a+retrograde+signal+regulating+presynaptic+transmitter+release.">Genetic analysis of glutamate receptors in Drosophila reveals a retrograde signal regulating presynaptic transmitter release.</a> Neuron. 19, 1237-1248 (1997).</li><li>Qin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Four+different+subunits+are+essential+for+expressing+the+synaptic+glutamate+receptor+at+neuromuscular+junctions+of+Drosophila.">Four different subunits are essential for expressing the synaptic glutamate receptor at neuromuscular junctions of Drosophila.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 25, 3209-3218 (2005).</li><li>Schuster, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+cloning+of+an+invertebrate+glutamate+receptor+subunit+expressed+in+Drosophila+muscle.">Molecular cloning of an invertebrate glutamate receptor subunit expressed in Drosophila muscle.</a> Science. 254, 112-114 (1991).</li><li>Tanouye, M. A., Wyman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+outputs+of+giant+nerve+fiber+in+Drosophila.">Motor outputs of giant nerve fiber in Drosophila.</a> Journal of. 44, 405-421 (1980).</li><li>Augustin, H., Allen, M. J., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+Recordings+from+the+Giant+Fiber+Pathway+of+D.+melanogaster.">Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (47), e2412 (2011).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T., Zhang, B., Freeman, M. R., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila Neurobiology. , 215-224 (2010).</li><li>Blagburn, J. M., Alexopoulos, H., Davies, J. A., Bacon, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Null+mutation+in+shaking-B+eliminates+electrical,+but+not+chemical,+synapses+in+the+Drosophila+giant+fiber+system:+a+structural+study.">Null mutation in shaking-B eliminates electrical, but not chemical, synapses in the Drosophila giant fiber system: a structural study.</a> J. Comp. Neurol. 404, 449-458 (1999).</li><li>Thomas, J. B., Wyman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+altering+synaptic+connectivity+between+identified+neurons+in+Drosophila.">Mutations altering synaptic connectivity between identified neurons in Drosophila.</a> J. Neurosci. 4, 530-538 (1984).</li><li>Baird, D. H., Schalet, A. P., Wyman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Passover+locus+in+Drosophila+melanogaster:+complex+complementation+and+different+effects+on+the+giant+fiber+neural+pathway.">The Passover locus in Drosophila melanogaster: complex complementation and different effects on the giant fiber neural pathway.</a> Genetics. 126, 1045-1059 (1990).</li><li>Gorczyca, M., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+cholinergic+synapse+in+the+giant+fiber+pathway+of+Drosophila+using+conditional+mutations+of+acetylcholine+synthesis.">Identification of a cholinergic synapse in the giant fiber pathway of Drosophila using conditional mutations of acetylcholine synthesis.</a> J. Neurogenet. 1, 289-313 (1984).</li><li>Allen, M. J., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemical+component+of+the+mixed+GF-TTMn+synapse+in+Drosophila+melanogaster+uses+acetylcholine+as+its+neurotransmitter.">The chemical component of the mixed GF-TTMn synapse in Drosophila melanogaster uses acetylcholine as its neurotransmitter.</a> The European journal of neuroscience. 26, 439-445 (2007).</li><li>Mejia, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+approach+for+in+vivo+screening+of+toxins+using+the+Drosophila+Giant+Fiber+circuit.">A novel approach for in vivo screening of toxins using the Drosophila Giant Fiber circuit.</a> Toxicon. 56, 1398-1407 (2010).</li><li>Stork, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+and+function+of+the+blood-brain+barrier+in+Drosophila.">Organization and function of the blood-brain barrier in Drosophila.</a> J. Neurosci. 28, 587-597 (2008).</li></ol>

Nanoinjection / электрофизиологии биопроб, представленные здесь позволяет быстрого скрининга соединений в нервной системе плодовой мушки. Это роман в естественных условиях техника, которая требует небольшого количества соединений, чтобы выявить влияние на различные молекулярные мише...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Запись стеклянных электродов: боросиликатного стекла капилляров </td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> 1B100F-4 </td><td> 1,0 мм диаметром, 0,58 мм ID </td></tr><tr><td> Стимулятор </td><td> Трава инструменты </td><td> Модель S48 </td><td></td></tr><tr><td> Усилитель </td><td> Получение инструментов Инк </td><td> Модель 5А </td><td></td></tr><tr><td> Сбор данных программное обеспечение: DIGIDATA </td><td> Molecular Devices </td><td> Модель 1440A </td><td></td></tr><tr><td> Сбор данных программного обеспечения: pCLAMP </td><td> Molecular Devices </td><td> Версия 10 </td><td></td></tr><tr><td> Стереомикроскоп Wго волоконно-оптической подсветкой кольцо микроскоп </td><td> AmScope </td><td> SM-4Т Модель HL250-AR </td><td></td></tr><tr><td> Анатомический возможности для монтажа </td><td> AmScope </td><td> SM-2TZ </td><td></td></tr><tr><td> Кайт Руководство Микроманипулятор и наклона базы </td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> Модель M3301 # Кайт: Модель # кайт-M3-L </td><td></td></tr><tr><td> DROSOPHILA MELANOGASTER Дикий 10E генотип (дикого типа) </td><td> Блумингтон сток центр </td><td> Лот № 3892 </td><td></td></tr><tr><td> Вертикальная пипетки съемник </td><td> Дэвид Kopf Instruments </td><td> Модель 700c </td><td></td></tr><tr><td> Инъекция стекло микропипетки: Боросиликатное стеклянные капилляры </td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> Catalogue # 4878 </tг&gt; <td> 1.14mm диаметр, 0,5 мм ID </td></tr><tr><td> Силиконовый масло </td><td> Рыбак </td><td> Catalogue # S159-500 </td><td></td></tr><tr><td> Beveler </td><td> Саттер машиностроительный завод </td><td> KT Brown Тип Модель # BV-10 </td><td></td></tr><tr><td> Nanoliter2000 </td><td> Инструменты Всемирной Precision </td><td> Catalogue # B203XVY </td><td></td></tr><tr><td> Синий пищевой краситель </td><td> Маккормик </td><td> N / A </td><td> Состав: вода, пропиленгликоль, FD &amp; C Blue 1 и 0,1% пропилпарабен (консервант). </td></tr><tr><td> Methyllycaconitine цитрата (MLA) </td><td> Tocris Bioscience </td><td> Каталог # 1029 </td><td></td></tr><tr><td> Пластиковые палочки воска </td><td> Гигиенические Corporation (Акрон Огайо, США) </td><td></td><td></td></tr></tboду&gt; </table>

paired nanoinjection and electrophysiology assay to screen for bioactivity of compounds using the drosophila melanogaster giant fiber system

Скрининга соединений в естественных условиях деятельности могут быть использованы в качестве первого шага для выявления кандидатов, которые могут быть разработаны в 1,2 фармакологических агентов. Мы разработали новый nanoinjection / электрофизиологии анализа, что позволяет обнаружить эффекты биологически активных соединений модулирующим на функции нейронов схема, которая является посредником побега ответ дрозофилы MELANOGASTER 3,4. Наш анализ в естественных условиях, в котором используется волоконно дрозофилы гигантские System (GFS, рис. 1) позволяет скрининг различных типов соединений, таких как малые молекулы или пептиды, и требует лишь минимальных количествах, чтобы вызвать эффект. Кроме того, дрозофилы GFS предлагает большой выбор потенциальных молекулярных мишеней на нейроны или мышц. Гигантские волокна (GFS) синапсов электрически (щелевые контакты), а также химически (холинергических) на периферийных Synapsing интернейронов (PSI) и Tergo Trochanteral мышцы нейрона (TTMn) 5 </sup&gt;. PSI в DLMn (спинного продольного нейронов мышц) соединения зависит от Dα7 никотиновые рецепторы ацетилхолина (nAChRs) 6. И, наконец, нервно-мышечных соединений (NMJ) в TTMn и DLMn со скачком (TTM) и летных мышц (DLM) являются глутаматергической 7-12. Здесь мы показываем, как придать nanoliter количества соединений, при получении электрофизиологических внутриклеточных записей из системы гигантских волокон 13 и как осуществлять мониторинг воздействия соединений на функции этой цепи. Мы покажем специфику анализа с methyllycaconitine цитрата (MLA), нАХР антагонист, который нарушает PSI в DLMn связи, но не ГФ TTMn связи или функции NMJ в прыжке или полете мышцы. Перед началом этого видео очень важно, чтобы вы внимательно смотреть и познакомиться с Юпитер видео под названием &quot;Электрофизиологические Записи с Гигантские Путь волоконно Д. Melanogaster »от Августина и др. 7, как видео, представленные здесь, предназначены в качестве расширения для этого существующий метод. Здесь мы используем метод электрофизиологической записи и сосредоточиться подробно только на того парных nanoinjections и мониторинга техники.

Watch this Scientific Journal Video about Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System at JoVE.com

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Быстрый<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Анализ для проверки нейромодуляторных соединений с использованием гигантских системы волокон (GFS) в<em&gt; DROSOPHILA MELANOGASTER</em&gt; Описано. Nanoinjections в голову животного, а также электрофизиологические записи GFS может выявить биологическую активность соединений на нейроны или мышц.

Парные Nanoinjection и электрофизиологии Анализ для выявления биологической активности соединений с использованием DROSOPHILA MELANOGASTER Гигантские системы волоконно

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

Электрофизиологические Записи из гигантских Путь волокна D. MELANOGASTER</em

When startled adult D. melanogaster react by jumping into the air and flying away. In many invertebrate species, including D. melanogaster, the "escape" ...

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Всего Подготовка горе взрослых Drosophila Брюшной нервной для инъекций Гигантские Dye Волоконно

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Маркировка отдельных клеток в центральной нервной системе<em&gt; Дрозофилы</em

In this  article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Определение спонтанную двигательную активность в<em&gt; Дрозофилы</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Простой Анализ для количественного определения социального избегания у<em&gt; Дрозофилы</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

Высокое разрешение Количественное запаха, руководствуясь поведения в<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Использование<em&gt; Flywalk</em&gt; Парадигма

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Поведенческая Анализ на Mechanosensation из MARCM основе Клоны в<em&gt; Дрозофилы</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

Высокая пропускная способность анализа, чтобы изучить яйцекладка предпочтений отдельных<em&gt; Дрозофилы</em

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

Простой способ измерить изменения в Reward обращаемость за помощью<em&gt; Дрозофилы</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

Капиллярных фидерных Анализ мер по обеспечению продовольственной приема внутрь<em&gt; Дрозофилы</em

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of ...